鹿茸的鑒別方法

王宇鵬

鹿茸為鹿科植物梅花鹿CervusnipponTemminck 或者馬鹿CervuselaphusLinnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角[1]。前者習(xí)慣性稱為“花鹿茸”，后者習(xí)慣性稱為“馬鹿茸”。鹿茸具有壯腎陽(yáng)、益精血、強(qiáng)筋骨、調(diào)沖任、托瘡毒的功效，是我國(guó)名貴的中藥材。在我國(guó)，鹿科動(dòng)物種類有十幾種，根據(jù)報(bào)道顯示有多種動(dòng)物的茸充當(dāng)鹿茸使用，導(dǎo)致在中藥材市場(chǎng)上鹿茸摻偽品較多；還有，因?yàn)楫a(chǎn)地不同，梅花鹿茸、馬鹿茸的藥材質(zhì)量不同[2]。因此，應(yīng)對(duì)鹿茸中藥材進(jìn)行有效鑒定，保證鹿茸用藥的安全性，本文將近十年與鹿茸藥材的鑒定方法相關(guān)的研究進(jìn)行概述。

1 鹿茸的傳統(tǒng)鑒別方法

1.1 性狀鑒別“花鹿茸”，具有一個(gè)分枝的稱為“二杠”，主枝稱為“大挺”，側(cè)枝稱為“門莊”。外皮呈紅棕色或者棕色，表面密生細(xì)茸毛，茸毛顏色為紅黃色或者棕黃色。具有兩個(gè)分枝的稱為“三岔”?！榜R鹿茸”外觀比“花鹿茸”粗大，分枝較多，具有一個(gè)側(cè)枝的稱為“單門”，兩個(gè)側(cè)枝的稱為“蓮花”，三個(gè)側(cè)枝的稱為“三岔”。有研究者對(duì)多種鹿茸藥材的外觀性狀進(jìn)行比較鑒別，發(fā)現(xiàn)馬鹿茸分枝最多，這為鹿茸的種間鑒別提供依據(jù)[3]。

1.2 顯微鑒別取鹿茸粉末，顯微鏡下可見顯微特征：茸毛多碎斷，毛根多與毛囊相連，基部多膨大呈撕裂狀；毛干表面有瓦片狀排列的扁平細(xì)胞，細(xì)胞的游離邊緣指向毛尖；沒(méi)有骨化的骨組織表面具不規(guī)則塊狀突起，無(wú)色，邊緣不齊；鹿茸表皮角質(zhì)層呈淡黃色，表面呈顆粒狀；骨碎片不規(guī)則，表面具細(xì)密縱向紋理，顏色呈淡黃色或者棕色，骨陷窩呈類圓形，數(shù)量較多，排列不齊。鹿茸的炮制應(yīng)去除茸毛，但是中藥材市場(chǎng)上流通的鹿茸藥材表面的茸毛并沒(méi)有清除干凈，茸毛的顯微特征具有一定的穩(wěn)定性，可以作為鹿茸的顯微鑒定特征之一。劉麗等[4]對(duì)馬鹿茸、梅花鹿茸等七種品種鹿茸的茸毛進(jìn)行顯微鑒別，使用顯微量尺測(cè)量七種茸毛的長(zhǎng)度、毛干直徑等顯微鑒別指標(biāo)的數(shù)據(jù)信息，使用聚類分析法進(jìn)行分類，鑒別結(jié)果與傳統(tǒng)鑒別結(jié)果一致，即正品為梅花鹿茸、馬鹿茸，替代品為白唇鹿茸，混用品為新西蘭鹿茸、狍茸、麋鹿絨以及黇鹿茸，結(jié)果表明鹿茸的茸毛顯微鑒別特征可以作為鹿茸的顯微鑒別指標(biāo)，具有鑒別簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn)，為鹿茸的品種鑒別提供有效依據(jù)。

2 現(xiàn)代鑒別方法

2.1 薄層鑒別薄層色譜鑒別方法具有操作簡(jiǎn)單、可靠的優(yōu)點(diǎn)[5]。有研究者以甘氨酸為對(duì)照品，對(duì)比鑒別不同鹿茸藥材，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在與甘氨酸對(duì)照品相應(yīng)位置上，鹿茸蠟片、粉片具有清晰斑點(diǎn)顯現(xiàn)[6]；還有研究者以鹿茸溶液為對(duì)照品，對(duì)強(qiáng)力腦清片、參茸王漿口服液、參茸軟膠囊等含鹿茸的中成藥中的鹿茸藥材進(jìn)行薄層鑒別[7]，鑒別方法直觀、簡(jiǎn)單。

2.2 光譜鑒別研究報(bào)道顯示[8]，鹿茸的光譜鑒別方法主要有熒光鑒別法以及紫外光譜鑒別法。紫外光譜鑒別具有簡(jiǎn)單、直觀的優(yōu)點(diǎn)，具體方法為取鹿茸樣品，加一定濃度的乙醇進(jìn)行提取并濾取藥液，以同樣濃度的乙醇為空白，在200～300 nm下測(cè)量吸光度，結(jié)果顯示在253 nm、236 nm左右，鹿茸樣品呈現(xiàn)最大吸收。但是紫外光譜法在鑒別同源鹿茸藥材方面具有應(yīng)用局限性。胡翠英等[9]應(yīng)用凝視式熒光光譜成像技術(shù)對(duì)13種鹿茸飲片進(jìn)行真?zhèn)舞b別，結(jié)果顯示在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，13種鹿茸飲片的光譜曲線特征明顯不同；在410～670 nm波長(zhǎng)范圍下對(duì)13種鹿茸飲片的光譜數(shù)據(jù)信息進(jìn)行聚類分析，聚類分析結(jié)果與傳統(tǒng)性狀鑒別與顯微鑒別結(jié)果一致，表明熒光光譜成像法可用于鹿茸飲片的真?zhèn)舞b別，具有鑒別快速、客觀、重復(fù)性良好的優(yōu)點(diǎn)。有研究者[10]使用傅里葉變換紅外光譜技術(shù)評(píng)價(jià)了三種廠家的鹿茸粉的質(zhì)量，為鹿茸粉的等級(jí)質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。吳新宇等[11]使用傅里葉變換紅外光譜技術(shù)結(jié)合主成分分析法對(duì)鹿茸真?zhèn)芜M(jìn)行鑒別，鑒別準(zhǔn)確率高達(dá)93.5%。

2.3 色譜鑒別蛋白質(zhì)是鹿茸飲片中含量較高的成分，氨基酸是蛋白質(zhì)的基本組成單位，近年來(lái)有許多研究將氨基酸含量作為鹿茸質(zhì)量分析的主要指標(biāo)。有研究者[12]采用柱前衍生化HPLC法對(duì)50批鹿茸飲片中15種氨基酸的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示鹿茸蠟片中氨基酸含量最高，血片與粉片中氨基酸的含量差異較小，氨基酸含量測(cè)定可以作為鑒別鹿茸飲片真?zhèn)蔚闹饕罁?jù)。該研究組使用HPLC指紋圖譜法建立了鹿茸飲片的HPLC指紋圖譜，采用主成分分析法將不同品種的鹿茸飲片進(jìn)行鑒別區(qū)分，還通過(guò)聚類分析法將鹿茸蠟片與骨片進(jìn)行分離，高效液相指紋圖譜結(jié)合化學(xué)計(jì)量法在鑒別不同規(guī)格鹿茸飲片具有高效、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。宗穎等[13]應(yīng)用高效液相色譜法，建立了梅花鹿茸藥材以及鹿茸不同部位的HPLC指紋特征圖譜，可用于鹿茸飲片的真?zhèn)舞b別，鑒定專屬性較高。

2.4 分子鑒別隨著現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，分子生物學(xué)技術(shù)逐漸用于鹿茸藥材的真?zhèn)舞b別以及質(zhì)量評(píng)價(jià)。DNA條形碼技術(shù)是分子鑒定中應(yīng)用比較廣泛的技術(shù)，具有通用性、唯一性、信息化等優(yōu)點(diǎn)，操作簡(jiǎn)便規(guī)范。有研究者[14]使用COⅠ通用引物對(duì)鹿茸飲片中提取出來(lái)的DNA進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增，在凝膠電泳成像儀器上可見單一、明亮的條帶，經(jīng)克隆純化后，測(cè)定序列后，使用DNAMAN軟件進(jìn)行處理，得到目標(biāo)序列，在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中使用BLAST算法鑒別鹿茸藥材的真?zhèn)?，可用于同源類鹿茸飲片的鑒別。陳康等[15]使用高分辨率熔解曲線(HRM)鑒別鹿茸藥材的真?zhèn)?，以COⅠ序列為引物，建立正品鹿茸藥材的熔解曲線模型，基于該模型，可對(duì)鹿茸藥材的真?zhèn)芜M(jìn)行鑒別。HRM技術(shù)與DNA條形碼技術(shù)聯(lián)合鑒別鹿茸藥材，具有高通量、快速、成本較低等優(yōu)點(diǎn)。魏藝聰?shù)萚16]基于COⅠ與SRY基因序列，建立了2個(gè)位點(diǎn)的特異性PCR體系，用于鑒別鹿茸樣本的來(lái)源，并隨機(jī)選取中藥材市場(chǎng)中流通的24個(gè)鹿茸樣品進(jìn)行鑒別分析，PCR鑒定法具有簡(jiǎn)便、可靠的優(yōu)點(diǎn)。

2.5 免疫鑒定法隨著摻偽技術(shù)的發(fā)展，目前在中藥材市場(chǎng)上，對(duì)非正品鹿茸的炮制加工方法與正品鹿茸相似，傳統(tǒng)性狀鑒別無(wú)法進(jìn)行區(qū)分，有研究者[17]使用SDS-PAGE凝膠電泳法鑒別了四種鹿茸藥材的水溶性蛋白質(zhì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)四種鹿茸飲片之間的蛋白質(zhì)差異，在此基礎(chǔ)上，對(duì)這四種鹿茸飲片進(jìn)行鑒別，在凝膠色譜的基礎(chǔ)上，使用膠體金免疫層析技術(shù)，制成試劑盒，使其用于鹿茸飲片的鑒別，該法具有很高的專屬性與特異性。

3 小結(jié)

鹿茸既是常用藥，又是貴重藥，目前在我國(guó)中藥材市場(chǎng)上，鹿茸的摻偽技術(shù)復(fù)雜多樣，鹿茸的中藥鑒別方法由簡(jiǎn)單直觀的傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別發(fā)展為多組分、多層次指紋圖譜技術(shù)的綜合鑒定方法；并引入分子生物學(xué)、免疫鑒定等技術(shù)對(duì)中藥材的品種優(yōu)劣進(jìn)行評(píng)價(jià)，但是各種鑒定方法都有一定的局限性。在實(shí)際應(yīng)用中，可根據(jù)情況進(jìn)行選擇。