布病虎紅平板凝集試驗與試管凝集試驗的對比

劉婕妤

（甘肅省華亭市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 動物疫病預防控制中心，甘肅 華亭 744100）

布魯氏菌病是由布魯氏菌病引起的人畜共患的一種慢性傳染病。其特征是生殖器官和胎膜發(fā)炎，引起流產(chǎn)、不育和各種組織的局部病灶。布魯氏菌病是我國二類疫病，本病在華亭市各鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）均有不同程度的流行發(fā)展趨勢，給養(yǎng)羊業(yè)造成了嚴重損失。本文對布病虎紅平板凝集與試管凝集試驗方法進行了比較，以便為畜間布病檢測提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

華亭動物疫病預防控制中心實驗室，2017年1月-2019年9月采集的2 888份牛羊血清樣品。試驗試劑均為山東綠都生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

對采集的血清樣品先采用布病虎紅平板凝集試驗進行陽性初篩，再用布病試管凝集試驗進行結(jié)果定性。

1.2.1 虎紅平板凝集試驗 潔凈的玻璃板，其上劃4 cm2的方格，將玻璃板上各格標記待檢血清號（待檢血清應新鮮，無明顯蛋白凝塊，無溶血和無腐敗氣味），在玻璃板上先滴加抗原0.03 ml，然后按順序滴加相應的血清0.03 ml，即可直接用滴加血清的槍頭攪動血清和抗原使之混合，再棄去槍頭，進行下一個待檢血清的檢測，以此類推。每次試驗應設陰、陽性對照。

結(jié)果判定：待檢血清在室溫條件下4 min內(nèi)出現(xiàn)沙粒狀的凝集現(xiàn)象為陽性，出現(xiàn)均勻的粉紅色現(xiàn)象為陰性。

1.2.2 試管凝集試驗

1.2.2.1 稀釋被檢血清 牛稀釋用1:50、1:100、1:200、1:400（4個稀釋度 ）；羊1:25、1:50、1:100、1:200（4個稀釋度)。

1.2.2.2 加抗原 將0.5 ml抗原（1:20）加入已稀釋好的各血清管中，并振搖均勻，各反應管反應總量為1 ml。

1.2.2.3 設立對照 每次試驗都應設立對照。陰、陽性血清對照：加抗原的方法與待檢血清相同（陽性血清的最高稀釋度應超過其效價滴度）；抗原對照：在0.5 ml稀釋液中，加0.5 ml抗原（1：20）。

1.2.2.4 比濁管的配置 此次試驗均配制比濁管，根據(jù)抗原抗體凝集程度，作為判定結(jié)果的參考依據(jù)。

1.2.2.5 結(jié)果判定 根據(jù)出現(xiàn)凝集反應的強度進行判斷，出現(xiàn)50%以上的凝集（參照比濁管的清亮度）即可判定為陽性。

2 結(jié)果

對采集的2 888份血清樣品進行檢測發(fā)現(xiàn)，虎紅平板凝集檢出陽性家畜20例，后對該20例血清進行試管凝集定性檢測，發(fā)現(xiàn)只有19例。因此，兩次檢測試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)陽性符合情況并不完全一致，由此可推斷，布病平板凝集試驗有出現(xiàn)假陽性的可能。為了提高試驗結(jié)果的準確度，可對布病平板凝集初篩的陽性血清再進行試管凝集定性確診。

3 分析

虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗簡便易行。虎紅平板凝集試驗有較高的敏感性，且操作較試管凝集試驗簡便、成本低廉、出結(jié)果快的優(yōu)點，可用于大規(guī)模的普查。試管凝集試驗具有較高的特異性，操作較虎紅平板凝集試驗繁瑣、費時費力、出結(jié)果慢，因此在工作中應把兩種試驗結(jié)合起來，先用虎紅平板凝集試驗篩查，陽性標本再由試管凝集試驗進行復核以作出準確的判斷。