3830例遺傳咨詢者外周血染色體核型分析

莊宇珊，洪桂華

莆田學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建莆田 351100

染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常引起的疾病稱為染色體病，其本質(zhì)是染色體上的基因或基因群的增減或變位破壞了基因元件的平衡狀態(tài)，因而妨礙了人體相關(guān)器官的分化和發(fā)育，造成機(jī)體形態(tài)和功能的異常[1]。染色體病是一種常見(jiàn)的遺傳病，占遺傳性疾病的1/10，大部分染色體異常胚胎夭折并引起自發(fā)流產(chǎn)，少數(shù)的存活者，在兒童期常表現(xiàn)為發(fā)育落后、智力低下及先天多發(fā)畸形等[2]，成人常表現(xiàn)出生殖孕育問(wèn)題，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神壓力。因此，染色體病對(duì)人類健康危害甚大，且無(wú)治療良策，目前主要通過(guò)遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷予以預(yù)防。該研究回顧分析2016年1月—2018年12月期間在該院進(jìn)行遺傳咨詢的3 830例染色體病患者的臨床資料，了解異常染色體的分類及頻率，明確篩查、干預(yù)重點(diǎn)，為患者的治療及育齡婦女的再次妊娠提供科學(xué)依據(jù)。報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

回顧分析因先天畸形、智力低下，精神發(fā)育遲緩、不良孕史等臨床指征就診于該院的3 830例患者的臨床資料。受試者自愿參加并簽署知情同意書。該研究已獲得所在醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，同時(shí)排除對(duì)研究不知情者和不愿意配合檢查者。

1.2 方法

采用外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)-G顯帶-染色體核型分析法[3]。具體操作：無(wú)菌抽取患者外周靜脈血2 mL，分別適量接種于兩瓶5 mL 1640培養(yǎng)基中，輕輕搖勻。置于兩個(gè)獨(dú)立的37℃恒溫箱中培養(yǎng)72 h，常規(guī)收獲制片，G顯帶染色處理，必要時(shí)增加C顯帶或N顯帶。每例標(biāo)本計(jì)數(shù)20個(gè)，選取5個(gè)中期核型進(jìn)行分析，異常標(biāo)本計(jì)數(shù)到100個(gè)，分析10個(gè)核型。根據(jù)人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制 （ISCN2013）G顯帶400條帶水平為標(biāo)準(zhǔn)，分析染色體核型。

2 結(jié)果

在3 830例遺傳咨詢患者中，共檢出321例異常核型，檢出率8.4%。異常核型中，染色體數(shù)目異常75例，占異常核型23.4%，其中21三體及嵌合35例（10.9%），標(biāo)記染色體9例（2.8%），Turner綜合征 16例（5.0%），47,XXY及嵌合12例（3.7%），其余3例。染色體結(jié)構(gòu)異常81例，占異常核型25.2%，其中相互易位39例（12.1%），倒位 15例（4.7%），缺失 5例（1.6%），X 染色體結(jié)構(gòu)異常 8例（2.5%），Y倒位 12例（3.7%），其余 2例。染色體多態(tài)性變異165例，占異常核型50.9%，其中Y 多態(tài)性變異 3例（0.9%），inv(9)74例（23.1%），pss 42例（13.1%），qh+28 例（8.7%），p+12 例（3.7%），其余 6例。見(jiàn)表1。

3 討論

相關(guān)資料顯示[1]，人群中染色體異常占比5%左右，該次研究異常染色體共檢出321例，檢出率8.4%，稍高于文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，應(yīng)與該研究人群的入選標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)。異常染色體構(gòu)成中，按占比由低到高依次為染色體數(shù)目異常（23.4%），染色體結(jié)構(gòu)異常（25.2%），染色體多態(tài)性變異（51.4%）。

3.1 染色體數(shù)目異常

該研究共檢出21三體及嵌合染色體核型35例，檢出率0.91%，年齡1 d~6歲，男13例，女20例，女性患兒出生例數(shù)明顯高于男性患兒例數(shù)，與廣州地區(qū)及武漢地區(qū)報(bào)道的男高于女結(jié)果不一致，可能是由于地域差異[4-5]。35例患者中僅1例為嵌合體，其余均為單純型。21三體綜合征（Down’s綜合征、唐氏綜合征）是先天性智力嚴(yán)重發(fā)育不良的一種疾病，是目前能存活至出生最常見(jiàn)的常染色體數(shù)目異常疾病，也是引起兒童智力低下和生長(zhǎng)發(fā)育遲緩的常見(jiàn)原因之一，發(fā)生率約1/800[6]，患者大多智力低下，生活不能自理，發(fā)育緩慢且壽命較短，Down’s綜合征目前仍無(wú)徹底根治的辦法，只能對(duì)癥治療[7]，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。該文結(jié)果提示該地區(qū)生育人群也存在出生21-三體患兒的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)高齡和唐氏篩查高風(fēng)險(xiǎn)孕婦及早進(jìn)行染色體核型及B超檢查，必要時(shí)增加無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)技術(shù)（NIPT），可有效減少唐氏患兒的出生。

3.2 染色體結(jié)構(gòu)異常

3.2.1 平衡易位 染色體平衡易位指2條或以上非同源染色體分別發(fā)生斷裂，斷片相互交換并重接，因重接后的染色體無(wú)明顯的遺傳物質(zhì)的丟失，故平衡易位攜帶者的表型和智力常發(fā)育正常，但在其形成的18種配子中，僅1種正常及1種相互易位配子可與正常配子結(jié)合并存活，其余16種遺傳物質(zhì)不平衡配子與正常配子結(jié)合后多發(fā)生流產(chǎn)、死胎或畸形兒[8]。該研究共檢出平衡易位39例，占異常核型12.1%，為異常核型中（除多態(tài)外）占比最高的類型，涉及除19號(hào)染色體以外的所有染色體，其中涉及13號(hào)染色體易位的核型最多，為10例（男2例，女8例），其次是涉及5號(hào)的9例（男4例，女5例），涉及14號(hào)的9例（男2例，女7例），其余均少于6例。該研究中39例平衡易位患者中，成人38例，表現(xiàn)出生殖和妊娠相關(guān)問(wèn)題的32例，占比82.1%，證實(shí)染色體平衡易位是早期胚胎流產(chǎn)的主要原因之一[9]，32例患者中，1次不良孕史9例 （28.1%），2次不良孕史9例（28.1%），3次不良孕史8例（25.0%），4次不良孕史2例（6.3%），不孕 3例（9.4%），無(wú)精癥 1例（3.1%）。 男性 16例，女性16例，未表現(xiàn)出明顯性別傾向。

表1 321例異常染色體核型及臨床表現(xiàn)

3.2.2 倒位 倒位指同一條染色體發(fā)生兩處斷裂，中間片段翻轉(zhuǎn)180°后重新連接在一起，遺傳物質(zhì)一般不會(huì)無(wú)丟失，但若斷裂點(diǎn)正好處于結(jié)構(gòu)基因區(qū)，則會(huì)發(fā)生相應(yīng)的癥狀。該研究共檢出倒位16例，涉及1,2,3,5,7,8,9,10,11,16,18號(hào)染色體，其中46,XY,inv(1)(p13q25)2例，1例表現(xiàn)為無(wú)精癥，46,XX,inv(7)(p22q22)2例，1例表現(xiàn)為自閉癥伴發(fā)育遲緩，46,XX,inv(18)(p11.2q21.1)1例，臨床表現(xiàn)為先天性心臟病，多趾，并指，尿道下裂，46,XX,inv(3)(q21q26.2),inv(9)(p12q12)t(11;18)(q21;q11.2)1例，臨床表現(xiàn)為腳趾畸形，46,XY,inv(2)(p21q14.2),inv(9)(p12q12)和 46,XY,inv(11)(p15q13)各 1例，均出現(xiàn)生殖孕育問(wèn)題，其余病例未發(fā)現(xiàn)明顯臨床癥狀。表現(xiàn)出明顯臨床癥狀病例占比37.5%（6/16），應(yīng)引起重視。

3.3 多態(tài)性

該研究共檢出多態(tài)核型165例，檢出率4.3%。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為[10]，染色體多態(tài)現(xiàn)象屬于正常變異，多態(tài)性不具有轉(zhuǎn)錄活性，不引起表型的異常變化，不具有臨床意義,但近年來(lái)有越來(lái)越多的學(xué)者提出多態(tài)性對(duì)生殖和妊娠有著不可忽視的影響[11],可能與異染色質(zhì)中高度重復(fù)的DNA在減數(shù)分裂的過(guò)程中出現(xiàn)重組異常進(jìn)而影響基因調(diào)節(jié)和細(xì)胞分化，導(dǎo)致胚胎發(fā)育異常。該研究165例多態(tài)患者中，有生殖和妊娠相關(guān)癥狀的47例，發(fā)生率28.5%（47/165），其中少弱精6例，不孕不育14例，1次不良孕史9例，2次不良孕史14例，3次及以上不良孕史5例，明顯高于普通人群的發(fā)生率，與前述學(xué)者觀點(diǎn)相符[10-11]， 47 例患者中，inv(9)多態(tài) 23 例（13.9%），qh+ 多態(tài) 10例（6.1%），pss多態(tài) 10例（6.1%），p+多態(tài)3例（1.8%）。除生殖和妊娠相關(guān)癥狀，165例多態(tài)患者中另有14例患者表現(xiàn)為發(fā)育遲緩或先天畸形，核型分布為inv(9)7例（4.2%），占比最高，其次分別為qh+3例（1.8%），pss 2例（1.2%），p+2例（1.2%）。其余病例未發(fā)現(xiàn)明顯臨床癥狀。165例多態(tài)患者中，inv(9)多態(tài)74例，占比 44.8%（74/165），其次為 pss多態(tài) 42例，占比25.5%(45/165)，51例有明顯臨床癥狀患者中，inv(9)多態(tài) 30例，占比58.8%(30/51)，其次為qh+多態(tài)13例，占比25.5%(13/51),可見(jiàn)，inv(9)多態(tài)的發(fā)生率和疾病相關(guān)率明顯高于其他類型多態(tài)的比率，且主要表現(xiàn)在生殖相關(guān)問(wèn)題，然而有研究指出[12-14]，inv(9)多態(tài)與生育異常無(wú)太大關(guān)系，inv(9)多態(tài)的臨床意義還需進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，遺傳咨詢患者染色體異常發(fā)生率較高，多表現(xiàn)為生殖問(wèn)題，同時(shí)也可能出現(xiàn)精神發(fā)育遲緩、先天畸形、智力障礙等。加強(qiáng)高危人群染色體核型分析，科學(xué)篩查，對(duì)疾病診斷和指導(dǎo)優(yōu)生優(yōu)育、降低缺陷兒出生率及提高我國(guó)出生人口素質(zhì)具有重要意義。