試論HPLC法測(cè)定阿苯片中苯巴比妥含量

朱巖

哈藥集團(tuán)三精兒童大藥廠 150000

試論HPLC法測(cè)定阿苯片中苯巴比妥含量

朱巖

哈藥集團(tuán)三精兒童大藥廠 150000

目的：建立一種使用高效液相色譜法進(jìn)行阿苯片中苯巴比妥的含量的測(cè)定方法。方法：使用液相色譜柱；流動(dòng)相為醋酸鹽緩沖液-甲醇，醋酸鹽緩沖液中的PH值是4.5，甲醇的比重是60:40，檢測(cè)的波長(zhǎng)是254mm，在流速上也是1.0ml/min。結(jié)果：苯巴比妥在濃度范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)出良好的關(guān)系，r=0.9984，苯巴比妥的濃度范圍是0.08—0.48mg/ml，精確度是0.32%，平均的回收率是98.63%。結(jié)論：這種方法在檢測(cè)的過(guò)程中，方便、快捷，在結(jié)果上也比較準(zhǔn)確。

HPLC法，高效液相色譜法；苯巴比妥，含量測(cè)定

阿苯片中的苯巴比妥含量測(cè)定是非常重要的，這種測(cè)定方法主要使用的是滴定法，在本次研究的過(guò)程中，使用的含量測(cè)定方法是高效液相色譜法，在測(cè)定的過(guò)程中，一定要了解測(cè)定的細(xì)節(jié)，具體的了解高效液相色譜法，這樣在阿苯片中苯巴比妥含量測(cè)定的過(guò)程中，才能夠保證含量測(cè)定的準(zhǔn)確性和便捷性，對(duì)測(cè)試結(jié)果也有著嚴(yán)格的要求，現(xiàn)在這種測(cè)定方式已經(jīng)取得了滿意的效果。除此之外，還要在一起的測(cè)定上進(jìn)行具體的分析，這樣對(duì)相關(guān)的試驗(yàn)有著重要的作用。

一、儀器與試藥

1）阿苯片，必須要是市售的。2）苯巴比妥的對(duì)照品，是中國(guó)藥品生物制品檢定所。3）苯巴比妥的批號(hào)是171222-200303。4）選用的甲醇是色譜醇，其他的試劑是分析純。

二、實(shí)驗(yàn)的方法與結(jié)果

（一）色譜條件

流動(dòng)相：需要使用醋酸鹽緩沖液—甲醇，這種緩沖液的 PH值是4.5，其中甲醇使用的是60:40的含量。柱溫是20℃，流速是1.0ml/min，檢測(cè)的波長(zhǎng)是254nm，進(jìn)樣量是20μl，理論板數(shù)需要按照苯巴比妥峰計(jì)不能夠低于2500。

（二）線性關(guān)系考察

要稱取一定數(shù)量的苯巴比妥的對(duì)照品，苯巴比妥的對(duì)照品含量是20mg，需要放在25ml的容量瓶中，使用流動(dòng)相進(jìn)行溶解，還要稀釋到一定的刻度進(jìn)行搖勻處理，直到達(dá)到相應(yīng)的刻度值。之后在配置成為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液要按照0.8mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行配置，在配置之后，還要精密的量取相應(yīng)的溶液：1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml和6.0ml，將這些溶液分別放置在10ml的容量瓶中，使用流動(dòng)相進(jìn)行稀釋，達(dá)到相應(yīng)的刻度配置成為一定濃度的對(duì)照品溶液，如果是按照上述色譜條件進(jìn)行處理，精密進(jìn)樣 20μl，縱坐標(biāo)是峰面積，橫坐標(biāo)是濃度，在計(jì)算的時(shí)候使用的回歸方程是:

結(jié)果表明苯巴比妥在 0.08～0.48mg／ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

（三）精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液(濃度為0.2mg／m1)，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次2Ou1，測(cè)定苯巴比妥的峰面積，RSD為0.32%，說(shuō)明該方法的精密度良好。

（四）穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一批次供試品溶液，按本文色譜條件于0、2、4、6、8、10、16、24h進(jìn)樣2Ou1，測(cè)定苯巴比妥的峰面積，RSD為0．65 %：表明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

（五）重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批號(hào)的阿苯片樣品6份，照含量測(cè)定方法測(cè)定含量，結(jié)果測(cè)得平均含量為98．6%，RSD為0．95%。

（六）加樣回收試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品9份，每份約重0．2g，置于lOml量瓶中，分 O別加入苯巴比妥對(duì)照品 lOg、12mg、14mg，加 m流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，分別取20u1注入液相色譜儀，計(jì)算苯巴比妥低、中、高三種濃度回收率(n=3)分別為98．87%(RSD=0.34%)，99．25%(RSD=0.56%)，98．63%(RSD=0.66 %)：平均回收率(n：9)為98．92%；說(shuō)明此方法得到的測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

三、樣品的測(cè)定

（一）供試品溶液的制備

取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉(約相當(dāng)于苯巴比妥2O～g)置100M量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)。

（二）對(duì)照品溶液的制備

精密稱取對(duì)照品20mg置l0ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

（三）測(cè)定法

分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各201，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中苯巴比妥的含量。

（四）化學(xué)滴定法與高效液相色譜法對(duì)3批樣品含量測(cè)定的比較

用化學(xué)滴定法對(duì)3批阿苯片中苯巴比妥的含量進(jìn)行測(cè)定，并與高效液相色譜法的含量測(cè)定進(jìn)行比較，結(jié)果顯示3批樣品含量測(cè)定的RSD值用化學(xué)滴定小于1．2%，用HPLC法時(shí)小于0.8%，具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表1表1樣品測(cè)定結(jié)果。

表1：樣品測(cè)定結(jié)果

四、討論

苯巴比妥主要是用于焦慮不安、高血壓、煩躁嗜睡、固性失眠癥、抗驚厥、治療新生嬰兒高膽紅素血癥，還有著抗癲癇的作用。這種藥物的理化性性質(zhì)如下：味道微苦、無(wú)臭，是白色的有光澤的結(jié)晶粉末。一般可以在乙醚或者是乙醇中被溶解，在水中是微溶，熔點(diǎn)是174.5—178℃。這種藥物是長(zhǎng)效巴比妥類，對(duì)于樞性抑制作用而言，與劑量有關(guān)。從藥物的性質(zhì)上來(lái)看，有著抗驚厥、催眠和鎮(zhèn)靜的作用，在抗癲癇上，如果是局部發(fā)作或者是大發(fā)作有用，其他的病癥是沒(méi)有任何的療效的，如果是精神運(yùn)動(dòng)性的癲癇是不會(huì)起到作用的。苯巴比妥還可以從來(lái)解熱鎮(zhèn)痛，一般使用的方法是注射或者是口服。

苯巴比妥進(jìn)入人腦組織會(huì)極慢，但是對(duì)于人腦組織中的濃度卻是最高的?？诜臅r(shí)間是0.5—1h，如果是靜脈注射，需要15min才能夠有良好的療效在，2—18h藥物的濃度才能夠達(dá)到相應(yīng)的效果。由于規(guī)格不同，在使用的過(guò)程中，會(huì)產(chǎn)生很大的差異，具體的使用方法需要按照醫(yī)生的囑咐服用。這種藥物也存在著一些不良反應(yīng)：1）用藥之后，可能會(huì)出現(xiàn)困倦、頭暈等現(xiàn)象，如果使用的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)產(chǎn)生依賴性，如果多次使用，一定要注意蓄積性中毒現(xiàn)象的發(fā)生。2）有些患者還可能會(huì)出現(xiàn)剝脫性皮炎、皮疹和藥熱等現(xiàn)象。

（1)與對(duì)乙酰氨基酹合用可引起肝臟毒性。(2)與對(duì)乙酰氨基酚、雙香豆素、氫化可的松、地塞米松、睪酮、雌激素、孕激素、口服避孕藥、氯丙嗪、氯霉素、多西環(huán)素、灰黃霉素、地高辛、洋地黃毒苷、苯妥英鈉及環(huán)孢素合用時(shí)，苯巴比妥使它們代謝加速，療效降低。(3)合用時(shí)使環(huán)磷酰胺在體內(nèi)活化的藥物作用增加。(4)合用時(shí)使乙琥胺、卡馬西平的血藥濃度降低，t1/2縮短。(5)合用時(shí)使丙戊酸鈉縮短，肝毒性增加，而苯巴比妥血藥濃度增高。(6)合用時(shí)增強(qiáng)鈣離子拮抗劑的降壓作用。

阿苯片呼吸抑制及卟啉病患者禁用。喘息、鼻息肉綜合征、對(duì)阿司匹林及對(duì)其他解熱鎮(zhèn)痛藥過(guò)敏者禁用。血友病、血小板減少癥、活動(dòng)性出血性疾病患者禁用。嚴(yán)重肝腎功能不全患者禁用。較常見(jiàn)的有惡心、嘔吐、上腹部不適或疼痛等不良反應(yīng)。較少見(jiàn)的有支氣管痙攣性過(guò)敏反應(yīng)。皮膚過(guò)敏反應(yīng)，表現(xiàn)為皮疹、蕁麻疹、皮膚瘙癢等。某些兒童應(yīng)用本藥可能引起反常的興奮。

本法采用高效液相法測(cè)定阿苯片中苯巴比妥含量，方法簡(jiǎn)便，快速，結(jié)果更準(zhǔn)確，可以推廣使用。

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1672-5018（2016）10-268-02