FSH劑量及應(yīng)激對文山牛超數(shù)排卵效果的影響

文│朱芳賢 趙俊金（全國畜牧總站）

陸靈勇 陳永波（云南省文山壯族苗族自治州畜牧站）

農(nóng)勝虎 何永定（云南省文山壯族苗族自治州廣南縣畜牧技術(shù)推廣工作站）

馮光杰 念博悠（云南谷多農(nóng)牧業(yè)有限公司）

文山牛是經(jīng)過長期選育的特色地方牛品種，具有適應(yīng)性強、抗病力強、耐粗飼和肉質(zhì)優(yōu)良等特點，其體型優(yōu)美，也是斗牛等文化活動的素材，養(yǎng)殖文山牛是當(dāng)?shù)刂饕?jīng)濟(jì)來源之一。開展文山牛保種胚胎收集保存工作，以避免養(yǎng)殖過程中環(huán)境變化，以及雜交、近交等因素造成的優(yōu)良基因流失，同時也是更好節(jié)約保種成本。胚胎保存了品種的全部基因，可很快恢復(fù)遺傳資源，與其他方法相比具有突出的優(yōu)越性，本文分析了促卵泡素（FSH）劑量及應(yīng)激對文山牛超數(shù)排卵效果的影響，為提高文山牛良種擴(kuò)繁技術(shù)提供參考，對提高云南省乃至西南地區(qū)牛品質(zhì)，提高牛養(yǎng)殖效益具有重要意義。

一、材料與方法

1.供體牛。2016年9～12月，從國家文山牛核心育種群中選擇產(chǎn)犢后37天以上，年齡3～10歲，體重300～450千克的母牛，白天放牧，夜晚舍內(nèi)補飼。

2.主要藥品與器械。黃體酮陰道緩釋劑（CIDR）1.9克/支，新西蘭DEC國際有限公司生產(chǎn)；FSH 400毫克/支，加拿大（CAN）Follitropin生產(chǎn)；日本產(chǎn)FSH 10AU×5支；氯前列烯醇（PG）0.2毫克/2毫升/支，上海市計劃生育科學(xué)研究所生產(chǎn)；普魯卡因40毫克/2毫升/支，北京市永康藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；促黃體素釋放激素A3（促排3號）20微克×10支，寧波三生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；體視顯微鏡；美國AB公司生產(chǎn)的牛用二通式?jīng)_卵管；集卵杯。

3.試驗設(shè)計。應(yīng)激組分Ⅰ組和Ⅱ組，經(jīng)歷氣溫驟變，Ш組為正常組沒有經(jīng)歷氣溫驟變，也是劑量對比試驗的Ш組，這三組都給予相同的日本產(chǎn)FSH 20.0AU劑量；不同F(xiàn)SH劑量試驗為Ш組和Ⅳ組，Ш組15頭；Ⅳ組給予日本產(chǎn)FSH 22AU，6頭。各試驗組采用的超數(shù)排卵程序是第0天放CIDR栓，第9天開始注射FSH，間隔12小時注射FSH 1次，F(xiàn)SH注射量遞減，第5次注射FSH時同時注射0.2毫克PG，第7次注射FSH時撤掉CIDR栓；同時在放CIDR和配種時各注射維生素ADE注射液3毫升，撤栓時用0.9%生理鹽水沖洗陰道，配種時注射促排3號15微克。詳細(xì)超數(shù)排卵程序見表1。

表1 超數(shù)排卵程序

4.供體母牛配種。觀察到供體母牛第1次站立發(fā)情后12小時后配種，連續(xù)配種2～3次，間隔10～12小時。

5.胚胎的采集與質(zhì)量鑒定。第7天采用非手術(shù)法收集胚胎，發(fā)情日為0天。每側(cè)用含1%血清的杜氏磷酸鹽緩沖液（PBS）400～500毫升沖洗子宮角。子宮回流液靜置3～5分鐘后在實體顯微鏡下?lián)斐雎炎踊蚺咛?，并保存在保存液中。按《NY/T1674牛羊胚胎質(zhì)量檢測技術(shù)規(guī)程》進(jìn)行胚胎鑒定分級。

6.數(shù)據(jù)處理。使用SPSS軟件對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素差異顯著性分析。試驗數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，超數(shù)排卵有效而沖卵失敗的個體不作為分析對象。

二、結(jié)果與分析

1.文山牛超數(shù)排卵效果。21頭正常情況下的文山牛，只均黃體數(shù)11.62個，只均獲卵數(shù)8.62枚，只均獲有效胚5.67枚，見表3。

2.應(yīng)激對超數(shù)排卵效果的影響。應(yīng)激Ⅱ組27日發(fā)情，28日配種，之前3天最高溫度26～27℃，溫差僅1℃，應(yīng)激Ⅰ組29日發(fā)情，30日配種，發(fā)情日發(fā)生氣溫驟變，最高溫度由26℃降到16℃，溫差達(dá)10℃。由表2可知，應(yīng)激Ⅰ組只均黃體數(shù)比應(yīng)激Ⅱ組少2.83個（P＜0.05），比正常組（Ш組）少3.00個（P＜0.05），應(yīng)激Ⅱ組只均黃體數(shù)和正常組沒有差異（P＞0.05）；應(yīng)激Ⅰ組只均回收卵數(shù)比應(yīng)激Ⅱ組少3.26個（P＜0.01）、卵子回收率低14%，比正常組少3.13個（P＜0.01）、低11%，應(yīng)激Ⅱ組只均回收卵數(shù)和卵子回收率低與正常組沒有差異（P＞0.05）；應(yīng)激Ⅰ組只均有效胚數(shù)比應(yīng)激Ⅱ組少3.13個（P＜0.01）、有效胚率低31%，比正常組少3.80個（P＜0.01）、低47%，應(yīng)激Ⅱ組只均有效胚數(shù)比正常組少0.67個（P＞0.05）、卵子回收率低16%。

3.不同F(xiàn) S H 劑量超數(shù)排卵效果的比較。由表3可見，Ⅳ組（22.0AU）效果最佳，只均黃體數(shù)、只均回收卵數(shù)、卵子回收率、只均有效胚數(shù)、有效胚率分別為14.0個、10.33個、75%、7.83枚和76%，Ⅳ組只均黃體數(shù)、只均回收卵數(shù)、卵子回收率高于Ш組（P＞0.05），Ⅳ組只均有效胚數(shù)、有效胚率高于Ш組（P＜0.05）。

三、討論

1.文山牛超數(shù)排卵效果。牛的超數(shù)排卵受不同品種和飼養(yǎng)管理等因素影響。朱化彬（2014）報道，美國2002—2011年奶牛和肉牛每次超數(shù)排卵獲得可移植胚胎數(shù)量平均為6.1～6.7枚/次。中國引入肉牛品種體內(nèi)胚胎每頭平均有用胚胎在5.7～7.0枚。地方品種由于環(huán)境、個體差異大，超數(shù)排卵效果差異大，每頭平均有用胚胎在2.0～5.0枚。王木等（2006）報道南陽黃牛頭均有用胚數(shù)2.89枚，朱芳賢等（2016）報道雷瓊牛頭均有用胚數(shù)3.24枚，喬利敏等（2008）報道晉南牛頭均有用胚胎為3.90枚，李金輝等（2007）報道秦川牛有用胚4.20枚，王新莊等（2010）報道郟縣紅牛頭均有用胚數(shù)為4.28枚，胡在鉅等（2013）報道廣西南丹黃牛頭均有用胚數(shù)4.40枚，朱芳賢等（2015）報道復(fù)州牛頭均有用胚數(shù)4.62枚。本試驗中，21頭次文山牛在正常氣候、放牧加補飼條件下獲得了頭均有用胚數(shù)5.67枚，高于雷瓊牛、廣西南丹黃牛兩品種，這三個同屬于含瘤牛血統(tǒng)的品種，都屬于小型牛品種，試驗中考慮文山牛有放牧加補飼等稍好飼養(yǎng)管理條件，與雷瓊牛相比，加大FSH劑量，得到比雷瓊牛好的效果，說明除品種外飼養(yǎng)管理條件也是影響超數(shù)排卵效果的關(guān)鍵因素。

2.應(yīng)激對超數(shù)排卵效果的影響。桑潤滋等（2011）報道氣溫突然降低10℃以上使美利奴超細(xì)毛羊平均獲胚數(shù)降低0.8枚，頭均可用胚數(shù)降低2.7枚，可用胚率降低27.1%，認(rèn)為影響明顯，其原因是環(huán)境突然改變造成機體應(yīng)激反應(yīng)，使母羊體內(nèi)相關(guān)的生殖激素的分泌發(fā)生改變，使下丘腦—垂體—腎上腺皮質(zhì)激素（HPA）軸興奮，使CRH分泌增加，促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）對促性腺激素釋放激素（GnRH）分泌有抑制作用，進(jìn)而影響黃體素（LH）和FSH的分泌，最終影響超排效果。本次試驗中氣溫突然降低10℃，使文山牛平均黃體數(shù)降低3.00個，平均獲卵數(shù)降低3.13個，卵子回收率降低11%，頭均可用胚數(shù)降低3.80枚，可用胚率降低47%。云南潮濕，溫度有變化時感覺明顯，有“雨后便是冬”的感覺，試驗中應(yīng)激Ⅰ組和Ⅱ組經(jīng)歷的氣溫差異的間隔雖然只差1天，超數(shù)排卵效果有明顯差異?？赡苁洽蚪M在氣溫變化前已經(jīng)完成激素更替及分泌量變化，所以排卵多，形成黃體多，最終有效胚胎也多。與Ⅱ組相比，Ⅰ組的牛發(fā)情表現(xiàn)不明顯，活動和爬跨少，內(nèi)部可能也表現(xiàn)為FSH和LH的更替及分泌量受影響，最終造成卵巢排卵少形成黃體少的結(jié)果。試驗中Ⅱ組有效胚率還是低于整個處理過程中都沒有受過應(yīng)激的正常組（Ш組），盡管平均黃體數(shù)和獲卵數(shù)沒有差別，可能是Ⅱ組受氣溫突然改變影響，其黃體發(fā)育也受影響，黃體酮分泌減少，胚胎發(fā)育受阻，有效胚減少。

表2 應(yīng)激對超數(shù)排卵效果影響

表3 不同劑量超數(shù)排卵效果的比較

3.不同F(xiàn)SH劑量超數(shù)排卵效果的比較。本次超數(shù)排卵試驗是生產(chǎn)活動，根據(jù)經(jīng)驗只做了2個劑量組，結(jié)果是22 AU組只均有效胚數(shù)、有效胚率高于20 AU組（P＜0.05），初步說明對于文山牛日本產(chǎn)FSH劑量22 AU優(yōu)于20AU，當(dāng)然最佳劑量待進(jìn)一步的試驗。結(jié)果說明超數(shù)排卵中適宜FSH劑量是取得好的超數(shù)排卵效果的關(guān)鍵因素之一。

四、小結(jié)

超數(shù)排卵中，氣溫發(fā)生氣溫驟變帶來的應(yīng)激影響效果，建議超排工作中要關(guān)注天氣預(yù)報，同時盡量避開一些“節(jié)氣”，通常節(jié)氣都有氣溫變化。

超數(shù)排卵中各種激素更替及量變化是很大，所以注射間隔時間要固定在10～12小時，劑量一定要準(zhǔn)確，注射時漏了要適當(dāng)補足（稍多點）。

利用胚胎和凍精達(dá)到基因保種的目的，是目前優(yōu)良畜禽品種現(xiàn)代保種的好方法。與活體保種相結(jié)合，具有良好效果及具大優(yōu)勢。