HPLC雙波長法同時測定珍菊降壓片中氫氯噻嗪、綠原酸的含量

劉曉東

（松原市食品藥品檢驗所，吉林 松原）

0 引言

珍菊降壓片是由野菊花膏粉、珍珠層粉、鹽酸可樂定、氫氯噻嗪、蘆丁五味藥制成的復方制劑[1]，該藥具有降壓作用，是治療高血壓病的常用藥物之一。目前，該藥現行標準的鑒別項目只是針對其中一些成分的，沒有方法進行含量的測量。盡管有研究指出對于其中所含成分的含量[2,3]可應用HPLC方法[4]進行測定，但是應用雙波長法同時對兩種成分的含量進行測定的方法還沒有研究發(fā)現。本次研究中，對氫氯噻嗪和綠原酸的含量應用HPLC雙波長法同時進行測定，該方法簡單方便、快速準確，具有較好的重復性[5,6]，在該制劑的質量控制中非常適用。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（SHIMADZU LC-2010AHT）。

1.2 試藥

氫 氯 噻 嗪（批 號：100309-201103）、綠 原 酸（批 號：110753-201314），以上兩種對照品均購于中國食品藥品檢定研究院；珍菊降壓片（亞寶藥業(yè)集團集團股份有限公司，批號：140514），自制兩批（批號：20140809 ，批號：20140810）；陰性樣品自制，甲醇為分析純，磷酸為分析純，乙腈為色譜純，水為重蒸水（自制）。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備

分別精密稱取干燥至恒重的綠原酸、氫氯噻嗪對照品10.12mg、11.62mg，分別置50ml和25ml量瓶中，分別加（甲醇∶水∶乙腈）（45∶50∶5）稀釋至刻度，搖晃均勻，即得（綠原酸和氫氯噻嗪對照品溶液，濃度分別為0.2024mg/ml、0.4648mg/mL）。

2.2 供試品溶液的制備

取10片樣品，將薄膜衣去除，精密稱定，研細，稱取大約0.52g的細粉，精密稱定，在具塞錐形瓶中放置，精密加入（甲醇∶水∶乙腈）（45∶50∶5）25ml，對重量進行稱定，搖晃，超聲提取30min，將減少的重量補足，在室溫下放置，取上清液，濾過，即得。

2.3 陰性對照溶液的制備

按照一樣的處方比例，制得陰性樣品，其中不含野菊花膏粉、氫氯噻嗪，參照供試品溶液的制備方法對陰性對照溶液進行制備。

2.4 色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗

色 譜 柱：shim-pack VP-ODS C18（250 mm×4.6 mm,5μm批號：3082427）；流動相：乙腈-0.4%磷酸溶液（10:90）；進樣量：10μl；流速1.0 ml/min；檢測器：紫外檢測器。各主成分和相鄰峰間的分離度大于1.5，分離度良好（色譜條件見表1）。

表1 色譜條件

使用高效液相色譜儀進行測定，分別向其中注入對照品、供試品和陰性對照溶液。結果顯示陰性對照液在相應峰位置無任何峰出現，說明該制劑中其他成分無干擾。

2.5 線性關系

精密稱取綠原酸11.54mg、氫氯噻嗪10.28mg、分別置于10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖晃均勻，分別精密吸取0.1ml、0.5ml、1ml、2ml、5ml、10ml置10ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。注入液相色譜儀分析，以峰面積對濃度做線性回歸方程，得各成分回歸方程。結果見表2。

表2 回歸方程、相關系數和線性范圍表(n= 6)

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，根據以上所述色譜條件測定，時間間隔為每4h，總共進樣6次，對其穩(wěn)定性進行測量。結果顯示：綠原酸峰面積的RSD為1.2%、氫氯噻嗪為0.8%。說明在24h內供試品溶液有較好的穩(wěn)定性。

2.7 精密度試驗

對同一混合對照品溶液進行精密吸取，連續(xù)進樣6次，測得綠原酸、氫氯噻嗪峰面積的RSD分別為0.91%、0.45%（n=6），說明此方法具有較好的精密度。

2.8 重復性試驗

取6份同一批號的樣品，參照制備供試品溶液的方法對溶液進行制備并測定，結果綠原酸、氫氯噻嗪含量的RSD分別為1.2%、0.9%（n=6），說明此方法具有較好的重復性。

2.9 回收率試驗

對已知批號為140514的珍菊降壓片樣品進行適量的精密稱取，將適量的對照品加入其中，處理方法參照制備供試品溶液的方法，對各成分的回收率進行計算。結果證實，此方法加樣回收率較好，見表3。

表3 加樣回收率實驗數據

2.10 樣品含量測定

根據供試品溶液項下制備方法和色譜條件，分析3批樣品中的綠原酸、氫氯噻嗪，對含量進行計算，結果見表4。

表4 樣品中各成分含量測定結果

3 結果與討論

3.1 流動相的選擇

參考相關研究資料[4，7]，對乙腈-水、甲醇-水以及乙腈-0.4%磷酸溶液作為流動相進行考察，結果顯示，乙腈-0.4%磷酸溶液（10∶90）作為流動相，色譜峰峰形對稱，分離效果好，分離度大于1.5，理論塔板數高，綠原酸拖尾小且無雜峰干擾。

3.2 檢測波長的選擇

設定波長選擇兩種成分的最大吸收波長，檢測方法為雙波長法，簡單方便、快速準確。

3.3 溶劑的選擇

氫氯噻嗪溶解度稍差一些，采用（甲醇∶水∶乙腈）（45∶50∶5）作為溶劑，溶解效果好。

3.4 提取方法的選擇

本實驗考察了提取方法及時間的條件，結果表明，提取樣品的時候，選擇功率為250W，頻率為50kHz的超聲儀，超聲30 min即可完全提取，在較短的時間即可取得良好的效果，所以制備供試品溶液可以采用此種方法[7,8]。