結(jié)核病免疫學(xué)實驗室檢測技術(shù)新進展

羅風(fēng)，李曉非

(昆明市第三人民醫(yī)院檢驗科，昆明 650041)

結(jié)核病是一個全球性的公共健康問題，2017年全球共有640萬新發(fā)結(jié)核病例。成功診斷及治療每年可使上百萬結(jié)核病患者避免死亡，最新數(shù)據(jù)顯示，據(jù)估計2000—2017年共避免5 400萬人死亡。但是目前結(jié)核病檢出持續(xù)存在很多漏檢[1]。血清學(xué)分析檢測結(jié)核分枝桿菌特異性抗原(tuberculosis-specific antigen，TBAg)，具有簡單、成本低、操作方便和測定快速等優(yōu)點，被認(rèn)為是篩查結(jié)核病例的有力方法，特別是在中國、印度等資源有限的國家[2-3]。在結(jié)核病診斷血清學(xué)研究領(lǐng)域，國內(nèi)外學(xué)者一直致力于尋找在結(jié)核病患者中能引起強烈抗體反應(yīng)的潛在血清診斷抗原，新的結(jié)核病免疫學(xué)實驗室檢測技術(shù)不斷出現(xiàn)。本文著重介紹近幾年國內(nèi)外關(guān)于結(jié)核病免疫學(xué)實驗室檢測方面的新技術(shù)新進展，以及新技術(shù)的檢測原理及優(yōu)缺點，以期促進優(yōu)良實用的結(jié)核病診斷新技術(shù)在我國各級醫(yī)療機構(gòu)普及推廣。

1 細胞免疫檢測技術(shù)

1.1體外試驗

1.1.1結(jié)核感染T細胞斑點試驗新用法 結(jié)核感染T細胞斑點試驗(T-cell spot of Tuberculosis，T-SPOT.TB)基本檢測原理是利用當(dāng)機體T淋巴細胞再次受到具有毒力的TBAg刺激后，活化為分泌結(jié)核分枝桿菌特異性γ干擾素的效應(yīng)T細胞，檢測并計數(shù)效應(yīng)T細胞數(shù)量，以判斷機體是否被結(jié)核分枝桿菌感染。試驗所使用的TBAg是致病結(jié)核分枝桿菌RD1區(qū)上Rv3874編碼的培養(yǎng)濾液蛋白10(culture filtrate protein-10，CFP-10)和Rv3875編碼的早期分泌靶向抗原6(early secreting antigen target-6，ESAT-6)[4-5]。王婷等[6]利用T-SPOT.TB試驗對378例結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽性患者和824例體檢健康者進行檢測，得出T-SPOT.TB結(jié)果陽性診斷活動性結(jié)核的敏感性為91.0%(344/378)，特異性為75.2%(620/824)；同時該團隊對T-SPOT.TB結(jié)果進行深度分析，發(fā)現(xiàn)TBAg/植物血凝素(phytohaemagglutinin，PHA)斑點數(shù)的比值在區(qū)分活動性結(jié)核和潛伏性結(jié)核感染時，效果優(yōu)于T-SPOT.TB斑點計數(shù)判定陰陽性的結(jié)果，ROC曲線下面積分別為0.881和0.7～0.8，同時認(rèn)為該比值在診斷肺外結(jié)核時也具有一定參考價值。Feng等[7]在同濟醫(yī)院招募1 871例研究對象(包括734例確診肺外結(jié)核患者、1 137例臨床易與肺外結(jié)核混淆的非肺外結(jié)核患者)，分析T-SPOT.TB試驗結(jié)果中TBAg/PHA比值對肺外結(jié)核的診斷及療效監(jiān)測的性能，結(jié)果證明T-SPOT.TB結(jié)果陽性患者中，直接T-SPOT.TB結(jié)果對區(qū)分肺外結(jié)核和疑似肺外結(jié)核的非肺外結(jié)核患者的診斷價值有限，TBAg/PHA比值可能是輔助診斷肺外結(jié)核的有用工具；PHA斑點數(shù)值反映了機體的免疫狀態(tài)，有助于判斷不同免疫狀態(tài)下肺外結(jié)核患者T-SPOT.TB結(jié)果的可信度；TBAg/PHA可用于免疫抑制患者結(jié)核病的輔助診斷，也可能是臨床監(jiān)測肺外結(jié)核抗癆治療效果的有用指標(biāo)。總之，T-SPOT.TB試驗在結(jié)核病診斷方面有較高的作用已得到廣泛驗證[8-9]，且該試驗全球范圍內(nèi)亦得到廣泛應(yīng)用。最新研究對該試驗結(jié)果各指標(biāo)進行深度分析后發(fā)現(xiàn)，該試驗不僅能對結(jié)核病進行診斷，還能有效區(qū)分活動性結(jié)核與潛伏性結(jié)核感染以及對抗癆療效進行監(jiān)測等[7,10-11]。因此，對該經(jīng)典試驗方法不斷改良以及對其試驗結(jié)果進行深度解讀，將使其在臨床結(jié)核病診治方面發(fā)揮更大的作用。

1.1.2T-SPOT.TB相關(guān)改進技術(shù) 新型T細胞檢測方法(ELISPOT-IL-2技術(shù))基本原理是在T-SPOT.TB試驗的基礎(chǔ)上，以原核表達結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株P(guān)PE36-p27蛋白[12-14](其控制基因?qū)儆诮Y(jié)核分枝桿菌RD1區(qū)域高度保守序列，為PPE36基因Rv2108，屬于PPE蛋白家族)為刺激原，刺激機體產(chǎn)生細胞因子IL-2，通過與固相載體上包被的抗人IL-2單克隆抗體和后加入的生物素標(biāo)記IL-2單克隆抗體分別結(jié)合后，最后加入辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)標(biāo)記的鏈霉親合素，形成固相抗人IL-2單克隆抗體-待測抗原-生物素標(biāo)記IL-2單克隆抗體-HRP標(biāo)記的鏈霉親合素復(fù)合物，洗滌去除雜質(zhì)，顯色(以四甲基聯(lián)苯胺為底物)終止反應(yīng)，在顯微鏡下觀察形成的斑點。2018年Della等[15]報道可采用LIOSpot?TB試劑盒來區(qū)分成人患者中潛在結(jié)核病感染和活動性結(jié)核病，同時證明TBAg Ala-DH能刺激活動性肺結(jié)核患者機體產(chǎn)生大量IL-2，而結(jié)核潛伏感染患者產(chǎn)生的該細胞因子量極低，因此該抗原被認(rèn)為是區(qū)分結(jié)核潛伏感染和活性肺結(jié)核的有用工具。該方法在T-SPOT.TB試驗基礎(chǔ)上進行改進，用TBAg Ala-DH誘導(dǎo)機體分泌細胞因子IL-2，然后采用酶聯(lián)免疫斑點試驗檢測斑點數(shù)，來診斷并區(qū)分潛在結(jié)核病感染和活動性結(jié)核病。LIOSpot?TB試劑可以在成人患者中區(qū)分結(jié)核潛伏感染和活動性結(jié)核病，但該報道對該試驗區(qū)分兒童潛在結(jié)核病感染和活動性結(jié)核病的性能，接種卡介苗對該試驗的影響等方面尚未得出明確結(jié)論。T-SPOT.TB的多種改進技術(shù)在后期將會進一步優(yōu)化，以應(yīng)用于結(jié)核病診療，以上新方法尚未進行大量臨床驗證，臨床應(yīng)用價值尚在探索階段[16]。

1.2體內(nèi)試驗：重組蛋白(ESAT-6和CFP-10融合蛋白)皮試試驗 重組蛋白(ESAT-6和CFP-10融合蛋白)皮試試驗是在結(jié)核菌素皮膚試驗(tuberculin skin test，TST)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。由于TST的結(jié)核菌素(包括致病、非致病分枝桿菌及卡介苗)成分中含有多種分枝桿菌共同抗原，而卡介苗接種普及，導(dǎo)致TST特異性很差，不能真正反映機體結(jié)核分枝桿菌感染狀態(tài)，臨床應(yīng)用價值有限[17]。重組蛋白(ESAT-6和CFP-10融合蛋白)皮試試驗采用致病結(jié)核分枝桿菌基因RD1區(qū)上Rv3874編碼的CFP-10抗原和Rv3875編碼的ESAT-6抗原，該TBAg在大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌及所有卡介苗菌株上不存在，此突破性技術(shù)進展提高了試驗的正確性[18]。2018年俄羅斯Slogotskaya團隊[19]對結(jié)核重組變應(yīng)原(含ESAT6-CFP10蛋白)皮膚試驗(Diaskintest)展開研究，收集2013—2016年在莫斯科市基層醫(yī)療機構(gòu)新診斷活動性肺結(jié)核兒童和青少年共441例(其中162例已接種卡介苗)，所有受試者均進行Diaskintest和TST試驗，最終完成Diaskintest試驗421例，完成TST試驗414例，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)硬結(jié)直徑臨界值為5 mm時，Diaskintest和TST試驗的檢測敏感性分別為97.9%(412/421)、98.1%(406/414)，而當(dāng)硬結(jié)直徑臨界值為15 mm時，兩者的檢測敏感性分別為61.1%(257/412)、46.1%(191/414)，由此得出結(jié)論：當(dāng)硬結(jié)直徑臨界值為15 mm時，Diaskintest試驗檢測患有活動性肺結(jié)核的兒童和青少年的敏感性顯著高于TST試驗，且前者在大規(guī)?？ń槊缃臃N條件下具有很高特異性。丹麥哥本哈根Ruhwald博士及其團隊[20]報道了關(guān)于基于ESAT-6和CFP-10抗原的一種新的特異性皮膚試驗(C-Tb)診斷結(jié)核分枝桿菌感染的安全性和有效性研究，該研究自2012年7月24日至2014年10月2日，共招募979名受試者，對受試者行γ干擾素釋放試驗、TST試驗和C-Tb試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著被結(jié)核分枝桿菌感染風(fēng)險的增加，C-Tb檢測呈強陽性趨勢，同時發(fā)現(xiàn)C-Tb的安全性與TST相似，結(jié)論為由于其不受卡介苗接種狀態(tài)的影響，C-Tb皮膚試驗可在TST常用的環(huán)境中提供更準(zhǔn)確的治療指導(dǎo)依據(jù)。目前，我國關(guān)于重組融合ESAT6-CFP10免疫原作為皮膚試驗試劑用于結(jié)核病診斷的Ⅰ、Ⅱa期臨床試驗結(jié)束，相關(guān)數(shù)據(jù)已公布，單劑量1、5、10或20 μg/mL重組ESAT6-CFP10作為結(jié)核分枝桿菌感染診斷的皮膚試驗試劑在中國耐受性好且安全[21-22]，該皮膚試驗似乎是一種安全有效的結(jié)核病診斷方法，將進一步驗證其在鑒別結(jié)核病方面的有效性。綜上，重組蛋白(ESAT-6和CFP-10融合蛋白)皮試試驗具有以下優(yōu)點：對結(jié)核病診斷具有很高的特異性、敏感性，其診斷準(zhǔn)確度與酶聯(lián)免疫斑點試驗相當(dāng)，卻克服了其實驗材料成本高、需配備實驗室、操作繁瑣等弊端，因此非常適用于資源有限地區(qū)醫(yī)療機構(gòu)大規(guī)模篩查結(jié)核病；該試驗無卡介苗及其他非致病性分枝桿菌產(chǎn)生的交叉反應(yīng)，在大規(guī)?？ń槊缃臃N條件下具有很高的特異性，可在TST常用的地區(qū)為臨床提供更準(zhǔn)確的診療指導(dǎo)依據(jù)；重組ESAT6-CFP10免疫原在我國具有良好的耐受性和安全性，目前未有嚴(yán)重不良事件的報道；且在制備過程中，重組融合蛋白ESAT6-CFP10相比其他形式的蛋白質(zhì)更穩(wěn)定、有效，因此其被認(rèn)為是診斷結(jié)核分枝桿菌感染的最佳皮膚試驗試劑。目前，該試驗也存在諸多不足：比如在相關(guān)研究中，納入人群未包含HIV感染者和其他低免疫力人群，也缺乏一定數(shù)量的臨床易與結(jié)核病混淆的非結(jié)核病患者，因此ESAT6-CFP10的敏感性和特異性可能被高估；同時，以上研究尚未對不同人群進行大樣本檢測，以確定該試驗在不同人群中診斷結(jié)核病的最佳閾值；且該試驗區(qū)分活動性結(jié)核與結(jié)核潛伏感染的性能尚不明確，關(guān)于其臨床應(yīng)用價值還需要進一步深入探索研究。

2 體液免疫檢測技術(shù)

2.1TBAg檢測技術(shù)

2.1.1免疫熒光雙標(biāo)法聯(lián)合激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)(laser scanning confocal microscopy，LSCM) 免疫熒光雙標(biāo)法聯(lián)合LSCM技術(shù)檢測腦脊液單核細胞ESAT-6，ESAT-6檢測采用免疫熒光雙標(biāo)法，用LSCM在光源為波長405 nm和635 nm激光器激發(fā)的雙重?zé)晒鈽?biāo)記下，觀察經(jīng)抗熒光猝滅封片液封片的腦脊液細胞玻片單核細胞著色三維成像情況，結(jié)果判定：細胞胞核呈藍色熒光、胞質(zhì)呈紅色熒光，為陽性；細胞胞核呈藍色熒光、胞質(zhì)不著色，為陰性。李美杰等[23]將該方法應(yīng)用于結(jié)核性腦膜炎的早期診斷研究，選取35例確診結(jié)核性腦膜炎患者為病例組，35例其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者為對照組，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)，其診斷結(jié)核性腦膜炎的特異性和敏感性分別為97.14%、80.00%，該抗原檢測方法能為早期結(jié)核性腦膜炎的診斷提供一定依據(jù)。該方法優(yōu)點：(1)檢測致病菌存在的直接證據(jù)TBAg，特異性高；(2)避免間接檢測抗原或抗體時由于患者機體免疫功能低下導(dǎo)致的假陰性結(jié)果；(3)LSCM技術(shù)在熒光成像基礎(chǔ)上增添激光掃描設(shè)置，進一步采用計算機進行圖像集中處理分析，具有高分辨性、多重?zé)晒馔瑫r觀察和三維重建等優(yōu)勢，與免疫熒光雙標(biāo)法配合，充分發(fā)揮出LSCM的優(yōu)勢，是觀察細胞立體結(jié)構(gòu)的有效工具；(4)該試驗可為結(jié)核性腦膜炎臨床早期診斷提供一定依據(jù)。缺點：(1)隨著患者治療時間的延長及病情的好轉(zhuǎn)，檢測結(jié)果可能出現(xiàn)假陰性；(2)無法區(qū)分機體為活動性或潛伏性結(jié)核分枝桿菌感染狀態(tài)；(3)該試驗的相關(guān)研究招募樣本量有限，未對多種不同類型結(jié)核病的診斷性能進行研究，結(jié)果具有一定的局限性。

2.1.2磁珠耦合金納米粒子免疫PCR法(magnetic beads-gold nanoparticles-immuno-PCR，MB-GNP-I-PCR) MB-GNP-I-PCR法[24]檢測純化的結(jié)核分枝桿菌ESAT-6抗原的基本原理是納米技術(shù)結(jié)合I-PCR技術(shù)，其中I-PCR是一種超靈敏的方法，結(jié)合了ELISA的多功能性和PCR的指數(shù)擴增能力[25-26]。該方法的優(yōu)點：(1)該技術(shù)具備納米生物技術(shù)信號放大的作用和I-PCR技術(shù)中ELISA的簡單性和多功能性，以及PCR的指數(shù)放大能力和敏感性，可以檢測出更多的結(jié)核病患者(如涂片陰性肺結(jié)核)，是一種超靈敏的檢測方法，提高了生物標(biāo)記物的檢出限(MB-GNP-I-PCR技術(shù)檢測純化的ESAT-6的檢出限為10 fg/mL，是同類ELISA的1×105倍)；(2)該技術(shù)開創(chuàng)性地提出采用基于納米顆粒的I-PCR技術(shù)檢測TBAg；(3)該方法試驗試劑制備相對簡單、試驗時間相對較短、基質(zhì)效應(yīng)不明顯，在結(jié)核病的臨床診斷方面有廣闊的應(yīng)用前景。不足之處：該方法尚未進行大量臨床驗證，其臨床應(yīng)用價值尚需進一步深入研究。

2.1.3基于石墨烯/聚苯胺修飾絲網(wǎng)印刷電極的多層電化學(xué)免疫傳感器 馬來西亞學(xué)者報道了基于石墨烯/聚苯胺修飾絲網(wǎng)印刷電極的多層電化學(xué)免疫傳感器檢測TBAg CFP-10在結(jié)核病早期診斷中的應(yīng)用[27]。該新檢測平臺在臨床結(jié)核病早期診斷中具有潛在的應(yīng)用價值，檢測原理是基于以石墨烯/聚苯胺(graphene/polyaniline，GP/PANI)為納米復(fù)合材料，在絲網(wǎng)印刷金電極(screen-printed gold electrode，SPGE)上制備一種能快速靈敏檢測相對分子量為10 000的結(jié)核生物標(biāo)志物CFP-10的夾心式電化學(xué)免疫傳感器，用傅立葉變換紅外光譜(fourier transform infrared spectroscopy，F(xiàn)TIR)和場發(fā)射掃描電子顯微鏡(field emission scanning electron microscopy，F(xiàn)ESEM)對制備的GP/PANI納米復(fù)合材料進行表征，分別用拉曼光譜和FESEM結(jié)合能譜儀研究GP/PANI改性SPGE的化學(xué)鍵和形態(tài)，從研究中可以清楚地看出，通過滴注技術(shù)成功地將GP/PANI涂層到SPGE上，然后用循環(huán)伏安法研究改性電極的電化學(xué)性能，GP/PANI改性SPGE的有效表面積比裸SPGE提高了5倍左右，最后用差示脈沖伏安法檢測CFP-10抗原。該檢測平臺具有操作簡單、靈敏度高、標(biāo)本用量少、快速、一次性使用等特點，能在3 h內(nèi)檢測到標(biāo)本中的CFP-10，線性范圍為20～100 g/mL(r2=0.99)，估計檢出限為15 ng/mL；并且檢測成本低，是一種經(jīng)濟的結(jié)核病診斷試驗替代策略。該新方法尚未進行大樣本臨床驗證，臨床應(yīng)用價值尚在探索階段。

2.1.4等離子體酶聯(lián)免疫吸附試驗 等離子體酶聯(lián)免疫吸附試驗平臺是一種超靈敏肉眼可直接判斷結(jié)果的早期結(jié)核病診斷方法，這項技術(shù)利用在過氧化氫存在下過氧化氫酶的生物催化作用，具有不同形態(tài)和光學(xué)性質(zhì)的金納米粒子(GNPs)分別在無靶點或有靶點的情況下產(chǎn)生紅色或藍色溶液，將納米粒子形成有色溶液與是否存在結(jié)核分枝桿菌特異性分析物(該檢測平臺目前主要檢測結(jié)核病早期特異性候選生物標(biāo)記物CFP-10)聯(lián)系起來，以快速對結(jié)核病進行診斷[28]。該技術(shù)采用一種新的信號產(chǎn)生機制，通過肉眼和光譜分析檢測患者痰中CFP-10，克服了傳統(tǒng)ELISA檢測在靶標(biāo)分子濃度偏低時易出現(xiàn)偏差的問題，可將痰標(biāo)本中CFP-10檢出限降低至0.01 μg/mL，且超敏、便攜、成本低、操作簡單、可通過肉眼讀取結(jié)果，不需要任何昂貴的儀器或?qū)I(yè)技術(shù)人員，特別適用于在資源匱乏國家和地區(qū)進行結(jié)核病的早期診斷。其性能穩(wěn)定，檢測結(jié)果不受痰標(biāo)本中復(fù)雜基質(zhì)的干擾，可直接檢測出樣本中是否存在待測物。目前該新方法尚未進行大樣本臨床驗證，臨床應(yīng)用價值尚在探索階段。

2.2多種免疫分子檢測技術(shù)：蛋白質(zhì)芯片技術(shù) 蛋白質(zhì)芯片技術(shù)原理是將不同目標(biāo)蛋白質(zhì)按預(yù)先設(shè)置的排列順序有序地固定于各種載體(載玻片、濾膜或滴定板等)表面做成微陣列檢測芯片，根據(jù)抗原抗體高度特異性結(jié)合的特點，用標(biāo)記了特定熒光物質(zhì)的針對芯片上蛋白質(zhì)的TBAg或抗體與檢測芯片反應(yīng)，進一步洗滌去除未與芯片上蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的熒光抗原或抗體后，利用激光共聚掃描技術(shù)或熒光掃描儀檢測芯片上各點的熒光強度，通過熒光強度分析各種待測樣本中蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)芯片技術(shù)廣泛用于尋找新藥作用的靶點、腫瘤標(biāo)志物檢測(如C-12蛋白質(zhì)芯片檢測)、科研等方面[29]。王麗豪等[30]采用蛋白質(zhì)芯片(美國RayBiotech公司提供的蛋白質(zhì)芯片AAH-CYT-G1000)對腦脊液中120種細胞因子進行篩選，檢出83種細胞因子，通過對62例入組患者(30例結(jié)核性腦膜炎、16例非感染性神經(jīng)系統(tǒng)疾病和16例病毒性腦膜炎)腦脊液細胞因子含量的分析比較，最終篩選出γ-干擾素、IL-8和單核細胞趨化蛋白-2是結(jié)核性腦膜炎的診斷性細胞因子。張仁卿等[31]用南京大淵生物技術(shù)公司提供的結(jié)核分枝桿菌IgG抗體檢測試劑盒對420例結(jié)核病患者血液標(biāo)本進行檢測，結(jié)果其診斷涂陽肺結(jié)核的陽性率最高(76.15%)，得出結(jié)核蛋白質(zhì)芯片固定TBAg蛋白16 000、38 000、結(jié)核分枝桿菌特異性細胞壁脂多糖抗原(LAM)三抗體聯(lián)合檢測可提高結(jié)核病的陽性檢出率和診斷準(zhǔn)確率，該試驗對結(jié)核病具有一定輔助診斷價值。該方法所需檢測樣本量少、高通量(可同時對幾萬個目標(biāo)蛋白質(zhì)進行高通量平行檢測)、能通過標(biāo)準(zhǔn)曲線進行定量檢測、高靈敏度(利用抗原抗體高度特異性結(jié)合的特點)、快速(半小時出結(jié)果)、方便和微型化、人為主觀誤差降低(自動化)，具有檢測出各種待測樣本中蛋白質(zhì)的種類(結(jié)構(gòu))、量和功能的能力，同時亦能檢出小肽、受體、抗體、蛋白質(zhì)-DNA、配體、抗原和蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物等[32]。但也存在一些不足：(1)機體待測抗體的分布和數(shù)量，由于受到患者免疫狀態(tài)及體內(nèi)結(jié)核分枝桿菌數(shù)量的影響，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果出現(xiàn)；(2)無法區(qū)分以往感染或現(xiàn)癥感染者(由于IgG抗體的免疫特點引起)[33]?？傊?，結(jié)核蛋白質(zhì)芯片是近幾年來結(jié)核病血清學(xué)研究中的一種新方法，在結(jié)核病臨床診斷、療效評估及科學(xué)研究等方面具有廣闊的應(yīng)用前景。

3 小結(jié)

綜上，當(dāng)前結(jié)核病免疫學(xué)檢測新技術(shù)已經(jīng)逐步向以下方向發(fā)展：樣本量微量化；樣本類型多樣化(包括血液、尿液、糞便、組織和漿膜腔積液等)；檢測流程自動化；實效性強(床旁檢驗)；兼容性強(實時、遠程、網(wǎng)絡(luò)化)；多學(xué)科交融(如融合基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、納米技術(shù)以及電化學(xué)發(fā)光技術(shù)等)；對結(jié)核病診斷的正確性高，具有一定的抗癆療效評估價值；實驗器材便攜且成本低；操作流程簡單化(無需配備專業(yè)技術(shù)人員)等。當(dāng)前新技術(shù)仍不能準(zhǔn)確區(qū)分不同類型的結(jié)核病(如活動性結(jié)核病與結(jié)核潛伏感染人群)，僅能用于臨床結(jié)核病的輔助診斷，而不能用于確診結(jié)核病，在當(dāng)前眾多新技術(shù)臨床應(yīng)用價值研究中，大部分研究尚未對不同人群、不同類型結(jié)核病等進行大樣本臨床驗證，新技術(shù)臨床診斷性能的普適性尚需進一步深入探討。只有充分研究每一個新技術(shù)的檢測原理、優(yōu)缺點及適用范圍，才能對其做到合理的應(yīng)用，才能最大限度地發(fā)揮其價值。盡管世界衛(wèi)生組織鼓勵對血清學(xué)試驗進行研究，但本綜述中的大多數(shù)結(jié)核病免疫學(xué)診斷新技術(shù)仍不夠成熟，需要進一步深入研究、提煉和優(yōu)化，并進行多中心、多地區(qū)、大范圍和多種族的臨床驗證，以期能更好地為全球結(jié)核病的防治助力。