中西結(jié)合對非洲豬瘟治療性試驗(yàn)的失敗教訓(xùn)

吳曉林，付錦楠，吳珂超，周華嬌，陳金興,李龍瑞，汪太春

(1.江西新天地藥業(yè)有限公司，江西峽江331409；2.江西省科學(xué)院微生物研究所，江西南昌330029；3.江西生物科技職業(yè)學(xué)院，江西南昌330200；4.江西省獸藥飼料監(jiān)察所，江西南昌330029）

1 概述

非洲豬瘟（ASF），簡稱“非瘟”，自2018年在江西爆發(fā)以來，對江西養(yǎng)豬業(yè)已造成毀滅性打擊；85%以上養(yǎng)豬戶已經(jīng)銷聲匿跡了，15%左右的養(yǎng)豬戶仍然在提心吊膽；因?yàn)槿魏嗡幬?、保健品和疫苗都是無用的，要有真正的非瘟疫苗至少要等5-10年才有希望的；而且一旦發(fā)生非瘟，均以死亡而告終。

非瘟是由非洲豬瘟病毒（ASFV）感染家豬、疣豬、歐洲野豬和非洲野豬的一種傳染性極強(qiáng)的出血性疾病，所有年齡的豬都易感。 有特急性、急性、亞急性和慢性四種臨床表現(xiàn)形式；非瘟的嚴(yán)重程度與病毒毒株、 豬種和流行時(shí)間長短有關(guān)。急性型以高熱、食欲廢絕、皮膚發(fā)紺和網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)出血為特征，發(fā)病后2-10 天內(nèi)死亡，病死率達(dá)100%。 臨床上與古典豬瘟非常相似，很難區(qū)別。

非洲豬瘟病毒是非洲豬瘟病毒科中唯一成員，兼有虹彩病毒和痘病毒的某些特征，是唯一核酸為DNA 的蟲媒病毒，只有一個(gè)血清型，22 個(gè)基因型。 非瘟病毒的基因組大，是藍(lán)耳病病毒的12 倍，豬瘟病毒的15 倍，口蹄疫病毒的24 倍。非瘟病毒的生存能力特別強(qiáng)，在凍肉中可存活數(shù)年至幾十年，在未熟肉品、腌肉、泔水中可長期存活；但乙醚、氯仿等脂溶劑中可破壞囊膜使其失活。 軟蜱的叮咬是直接接觸傳染的主要形式。

難道沒有一種措施能防控非瘟嗎？ 除了千方百計(jì)消滅非瘟的傳染源，想方設(shè)法阻斷非瘟的傳播途徑，就沒有辦法來提高易感豬的抵抗力嗎？或許可以通過經(jīng)口服中草藥、 注射給藥的方式，清除體內(nèi)的病毒、調(diào)理體內(nèi)臟腑功能、提高體內(nèi)各臟腑的抵抗力； 或許可以通過體外帶豬消毒、欄舍內(nèi)外仍至空氣進(jìn)行徹底消毒的方法，以清除環(huán)境中病毒，至少可以清除到?jīng)]能使豬發(fā)病的環(huán)境病毒量呢？ 帶著這樣一種想法，對正在患非瘟的豬，嘗試一下治療性試驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告如下，望同仁參考。

2 非瘟治療性試驗(yàn)

2.1 試驗(yàn)豬場一曾某

2.1.1 試驗(yàn)豬場一現(xiàn)狀：生產(chǎn)母豬77 頭，產(chǎn)房乳豬223 頭，保育豬790 頭，育肥133 頭，全場1257頭。 做試驗(yàn)的3 號育肥欄內(nèi)有15-20kg 吃乳豬料的豬有351 頭，35-40kg 吃小豬料的豬有57 頭，合計(jì)408 頭。 在福建省南平市動(dòng)物疫病檢測站檢測，全場豬群6月28日開始發(fā)生非瘟，當(dāng)時(shí)母豬存欄200 多頭，全場存欄近5000 頭。 免疫用藥情況：豬從7月份起一律不用任何疫苗，飼料中長期添加替米、氟苯、阿莫、強(qiáng)力、林可，豬堅(jiān)強(qiáng)，多維、枯草、黃芪多糖、驅(qū)蟲和驅(qū)蠅等藥物。 8月12日-8月21日進(jìn)駐豬場試驗(yàn)，9月1日-9月2日進(jìn)入豬場檢查臨床試驗(yàn)效果，并采病料送廣東農(nóng)科院作實(shí)驗(yàn)室檢測，以確定病原和抗體。

2.1.2 試驗(yàn)用藥：輝清好伙伴（豬只每6kg 體重用本品1g，一天2 次，用20 天；一天一次，用8 天）；輝清好幫手（豬只每35kg 體重用本品1g，一天一次，用3 天，停3 天，用3 天）；超強(qiáng)堿離子水；輝清佐劑液（100ml/瓶）；輝清混懸液（100ml/瓶）。

2.1.3 用藥方法

2.1.3.1 拌料：①輝清好伙伴：從打第1 針開始，連續(xù)用20 天，每500kg 飼料中添加2kg+ 葡萄糖3kg。 以后每500kg 料中添加1kg+葡萄糖3kg，用8-10 天。

②輝清好幫手：從打第1 針到第11 天開始，連續(xù)用3 天，停3 天，再用3 天，每500kg 料中添加1kg+葡萄糖3kg。

2.1.3.2 消毒：超強(qiáng)堿離子水：按1：40 比例對欄舍內(nèi)外并帶豬消毒，隔天，消毒一次，長期使用。

2.1.3.3 肌注：必須注射第1 天、3 天、5 天、7 天四針，用輝清佐劑液、輝清懸液和2.5%恩諾沙星：按1：3：3 比例混勻，試驗(yàn)豬進(jìn)行肌肉注射，10kg 注2ml，20kg 注3ml，30kg 注4ml，35kg 注5ml，35kg以上注8ml，50kg 以上注10ml。 必須用12×20 號針頭，一頭豬用一個(gè)針頭。

2.1.4 試驗(yàn)操作：兩人準(zhǔn)備藥水，兩人注射，一人攔豬。 配好藥水混均后放入寬口瓶中，一頭豬用一個(gè)消毒好的針頭。 執(zhí)行第1 天、3 天、5 天、7 天四針操作。 注：當(dāng)時(shí)天氣溫度35-39℃。

2.1.5 每天觀察記錄：試驗(yàn)豬和非試驗(yàn)豬，每天上下午各觀察一次：發(fā)病情況、死亡情況、皮膚眼睛糞尿情況、采食情況等外觀；病死豬的胸腹腔、心肺肝膽脾腎膀胱大小腸等內(nèi)臟變化。 用藥情況、消毒情況等。

2.1.6 試驗(yàn)結(jié)果

注：8月25日開始出現(xiàn)典型的圓環(huán)病毒?。?月12日到9月16日總共死亡193 頭豬。

隨機(jī)采4 頭沒用上述藥的豬全血，4 頭用過上述藥的豬全血，2 頭沒用藥的豬（合伙豬，50kg以上豬，一頭發(fā)燒，一頭不發(fā)燒）全血，共10 支全血；剖檢4 頭病死豬，采脾和腹股淋巴結(jié)作為送檢病料。 其中兩頭病變見胸腔心毛絨狀，肺膿腫和纖維素狀，腹股溝淋巴結(jié)腫大，白色，初診為圓環(huán)病毒?。涣韮深^豬肝、腎、淋巴結(jié)腫大、水腫，腸、胃、膀胱出血，肺、胰、心包和心、脾、皮及皮下廣泛出血，初診為非瘟，將病料送廣東農(nóng)科院檢測。

2.2 試驗(yàn)豬場二王某

在福建省南平市動(dòng)物疫病檢測站檢測，6月15日全場發(fā)后非瘟；8.12 選擇準(zhǔn)備淘汰瘦弱的豬，56 頭20kg 重的豬，使用上述藥，注射到第2針，認(rèn)為豬漸漸瘦小，沒有得到改善，就淘汰28頭，還剩28 頭繼續(xù)使用上述藥。 另外，又購買比較好的20kg 的豬134 頭，重新使用上述藥物，至9月1日，前者28 頭豬，己經(jīng)使用了4 針，后者134 頭己經(jīng)使用2 針。 同時(shí)，剖檢了2 頭，一頭用了4 針，一頭用了2 頭。 都疑似非瘟，采脾和淋巴結(jié)，送廣東農(nóng)科院待檢。

2.3 試驗(yàn)豬場三姜某

在福建省南平市動(dòng)物疫病檢測站檢測，7月5日全場發(fā)后非瘟，除200 多頭用過豬瘟疫苗，沒有進(jìn)行試驗(yàn)外，其余豬共計(jì)1070 頭，都使用上述藥物試驗(yàn)，己經(jīng)使用2 針，同時(shí)采全血，2 頭母豬，4 頭小豬，4 頭中豬，共10 支，同時(shí)采病死豬脾和腹股溝淋巴結(jié)作病料，一同送廣東省農(nóng)科院待檢。

3 實(shí)驗(yàn)室檢測

3.1 檢測報(bào)告

樣品名稱 豬血清及組織樣品 樣品數(shù)量 血清20+組織9送檢單位 福建豬場 樣品狀態(tài) 良好樣品來源方式 自送 托運(yùn) 其他 送檢日期 2020年09月03日檢測環(huán)境條件 環(huán)境溫度18-25 ℃；環(huán)境濕度50-60%RH 檢驗(yàn)日期 2020年09月03日檢驗(yàn)項(xiàng)目 ASFV-Ag 檢測方法 熒光定量PCR

注:“-”表示陰性，“±”表示可疑，“+”表示陽性，“/”為不測項(xiàng)?；浺呖兀?018）51 號：《非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室檢測操作程序》。ASFV-Ag 為非洲豬瘟病毒抗原。 CP 值≥40 為陰性，CP 值＜40 為陽性。ASFV-Ab 為非洲豬瘟病毒抗體,使用的試劑盒為INGEZIM(P72)公司產(chǎn)品?？贵w水平用X 值[陰性值-樣品值/陰性值-陽性值]*100%表示, 大于或等于50%為陽性，40%-50%之間為可疑，小于或等于40%為陰性。檢測結(jié)論 詳細(xì)結(jié)果請見附表。備 注 主要儀器為實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀，規(guī)格型號為ROCHE Lightcycle 480 Ⅱ。本檢測結(jié)果只對本次送檢樣品負(fù)責(zé)，僅供防疫參考。檢驗(yàn)依據(jù)

3.2 檢測結(jié)果

3.2.1 抗原檢測結(jié)果

編號 CP 值 判定結(jié)果 編號 CP 值 判定結(jié)果2-A-1 ＞40.00 - 姜2-201 ＞40.00 -2-B-1 ＞40.00 - 姜2-202 ＞40.00 -2-1-3 ＞40.00 -血清王-1 31.65 +2-1-4 ＞40.00 - 王-2 31.19 +2-2-3 ＞40.00 - 姜-1 29.63 +2-2-4 ＞40.00 - 姜-2 34.38 +姜1-1.1 27.31 + 姜-3 28.67 +姜1-1.2 33.17 + 曾-1 36.32 +姜1-1.3 35.42 + 曾-2 ＞40.00 -姜1-1.4 33.72 +組織

3.2.2 抗體檢測結(jié)果

編號 阻斷率 判定結(jié)果 編號 阻斷率 判定結(jié)果(P72) (P72)2-1-1 10-2 11- 2-2-4 13 -2-1- 姜1-1.5 11 -2-1-3 21 - 姜1-1.6 39 -2-1-4 93 + 姜1-1.7 8 -2-2-1 15 - 姜1-1.8 13 -2-2-2 15 - 姜2-201 51 +2-2-3 21 - 姜2-201 26 -

4 結(jié)果分析

4.1 試驗(yàn)豬場一曾某

抗原檢測血清：沒用過藥的菜豬2-2-3、2-2-4，2-A-1、2-B-2；用過藥的菜豬2-1-3、2-1-4，均為陰性，即均沒有非瘟抗原。

抗原檢測組織：曾-1 為陽性，即有非瘟抗原，曾-2 為陰性，即沒有非瘟抗原。

抗體檢測：沒用過藥的菜豬2-2-1、2-2-2、2-2-3、2-2-4；用過藥的菜豬：2-1-1、2-1-2、2-1-3 均為陰性，即沒有非瘟抗體；而2-1-4 為陽性，即有非瘟抗體。

從上述檢測結(jié)果看，場內(nèi)非瘟基本消失，全部試驗(yàn)豬非瘟抗原陽性轉(zhuǎn)為陰性。 合作豬場沒有感染非瘟：檢測數(shù)量太少。

9.26 電話回訪，試驗(yàn)的408 頭，陸續(xù)豬死的差不多了，只剩4 頭豬。

4.2 試驗(yàn)豬場二王某

抗原檢測組織：王-1、王-2 均為陽性，即均為有非瘟抗原。

從上述檢測結(jié)果看,場內(nèi)仍有嚴(yán)重非瘟。

9.26 電話回訪，豬134 頭全部死亡，豬28 頭的只剩2 頭。

4.3 試驗(yàn)豬場三姜某

抗原檢測血清：菜豬姜1-1.1, 姜1-1.2,姜1-1.3,姜1-1.4,均為陽性，即有非瘟抗原。

抗原檢測組織：菜豬姜1，2，3，均為陽性，即有非瘟抗原。 而姜2-201，姜2-202 均為陰性，即沒有非瘟抗原。

抗體檢測：姜1-1.5, 姜1-1.6, 姜1-1.7,姜1-1.8,姜2-201 均為陰性,即沒有非瘟抗體.而姜2-202 為陽性,即有非瘟抗體.

從上述檢測結(jié)果看,場內(nèi)有嚴(yán)重非瘟，母豬非瘟正在侵入。

9.26 電話回訪，200 多頭用過豬瘟疫苗的豬，全部死亡，其它豬除中途賣了180 多頭外，其余全部死亡，母豬還剩9 頭。

5 失敗教訓(xùn)

5.1 本試驗(yàn)所用藥物

中草藥1：輝清好伙伴，主要由黃芪、芍藥、桂枝、辣蓼、甘草等組成，具有溫經(jīng)益氣、祛風(fēng)散寒功效。 這樣有助于烈性疫病所致豬體五臟六腑的功能恢復(fù)。

中草藥2：輝清好幫手，主要由梔子、大黃、茵陳蒿、牡丹皮、黃連、水牛角、牛黃等組成，具有清熱利濕、涼血解毒、燥濕退黃的功效。 這樣有助于消濕退黃，提高免疫力。

超強(qiáng)堿離子水：是一種PH 為13.2 的消毒劑，可帶豬噴霧消毒，也可欄舍內(nèi)外、地面墻壁噴霧消毒，還可空氣凈化消毒。

輝清佐劑液、 輝清混懸液和2.5%恩諾沙星：按比例混合的混懸液，進(jìn)行第1 天、3 天、5 天和第7 天注射，目的是控制豬感染病毒的數(shù)量，增強(qiáng)豬的抵抗能力，防治繼發(fā)感染。

從上述的檢測報(bào)告可以看出，在治療期間豬還較穩(wěn)定，陽性豬群基本上轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮载i群，從試驗(yàn)開始算起，1 個(gè)月左右，豬的死亡越來越多，除了發(fā)現(xiàn)豬場一曾某的試驗(yàn)豬群繼發(fā)了圓環(huán)病毒病外，豬場二王某和豬場三姜某的豬群并沒有發(fā)現(xiàn)有繼發(fā)感染，到后來所有試驗(yàn)豬基本上全部死亡，這只能說明試驗(yàn)豬所采取的用藥方案，對非瘟的防控沒有起到作用，至少?zèng)]有起到延遲作用。 非瘟病毒始終還在豬體內(nèi)，一旦用藥不到位，或用時(shí)不準(zhǔn)確，或用量不到位，非瘟病毒又大量的繁殖，而造成感染而致病。

5.2 在不同情況下，豬感染ASFV 的臨床表現(xiàn)是：高熱（40-41℃）、高致死率、廣泛出血、肺水腫和淋巴結(jié)廣泛壞死（Medus,1988;G0mez-Villamand0s等，1995）。 有時(shí)，ASF 與豬霍亂、豬丹毒表現(xiàn)相似的臨床癥狀和病理變化。 ASFV 雖不能在T、B 細(xì)胞中復(fù)制，但ASFV 確實(shí)能在單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中復(fù)制，因此：一是造成的免疫抑制作用不明顯；二是ASFV 有很好的抗原性，在感染后4 天和6-8 天的血清中能查到IgM、IgG，而且能維持很長時(shí)間；三是ASFV 抗體能延遲臨床癥狀的出現(xiàn)、減輕病毒血癥、并保護(hù)感染豬不會(huì)死亡；四是實(shí)驗(yàn)表明，實(shí)驗(yàn)感染和自然感染ASFV 的豬的血清中沒有中和抗體，并ASFV 不影響體液免疫反應(yīng)。所以做好生物安全，控制豬場內(nèi)ASFV 的數(shù)量，減輕病毒血癥，保護(hù)感染豬不死亡，是養(yǎng)殖專業(yè)戶唯一能做的事情。

5.3 家豬經(jīng)以下途經(jīng)感染ASFV 病毒：口，鼻腔，蜱叮咬，皮膚劃痕，肌肉、靜脈、皮下和腹腔注射。ASFV 感染從扁桃體和下頜淋巴結(jié)的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞開始，隨淋巴液和血液到達(dá)靶器官如淋巴結(jié)、骨髓、脾、肺、肝和腎，感染后6-8 天出現(xiàn)病毒癥，而且病毒血癥將存在很長時(shí)間。 自然感染ASFV 的潛伏期4-19 天不等，實(shí)驗(yàn)感染ASFV 的潛伏期較短，2-5 天，潛伏期長短與病毒數(shù)量和感染途經(jīng)有關(guān)。 ASF 大體病變見于：脾、淋巴結(jié)、腎、心臟。 脾：紅黑色、腫大、梗死、變脆，脾大量出血。淋巴結(jié)：出血、水腫、變脆。象黑紅色的血腫。切面大理石樣。腎：腎皮質(zhì)和腎盂點(diǎn)狀出血。腎大量出血。 心：心內(nèi)外膜出血點(diǎn)或出血斑，出血性漿液性心包積水。 還見：腹腔內(nèi)出血性漿液，整個(gè)消化道水腫和出血；肝和膽出血；膀胱粘膜出血點(diǎn)。 胸腔積水，胸膜出血點(diǎn)；肺水腫；腦膜腦組織充血，間質(zhì)性肺炎。

所以環(huán)境安全、生物安全是目前防控ASF 的最佳選擇。

5.4 軟蜱是ASFV 的保毒者和傳播者，實(shí)驗(yàn)證明，非洲的一個(gè)新種軟蜱----O.Savignyi 能將ASFV傳染給家豬（Mellor 和Wilkinson,1985）。家畜中只有家豬能自然感染ASFV。 感染ASFV 的野豬的組織中含有少量的病毒和表現(xiàn)低水平或不能檢查病毒血癥，然而，即使很少的ASFV 也足以通過軟蜱傳播給家豬。感染ASFV 的康復(fù)豬和帶毒豬，這兩種豬在ASF 的流行病學(xué)中所起的作用是制定消滅非洲豬瘟的計(jì)劃時(shí)應(yīng)該主要考慮的問題。從流行病學(xué)方面看，有ASFV 傳播到無ASFV 的國家與通過國際空港和海港進(jìn)口大量感染ASFV的未煮熟的豬肉有關(guān)，在這些港口的垃圾中發(fā)現(xiàn)了未煮熟的廢物中含有豬肉并用來飼喂豬只。 一旦ASFV 感染家豬，ASFV 帶毒豬將是隨后病毒傳播的重要來源。 至今ASF 無有效疫苗原因一是ASFV 分離株間變異太大； 二是與ASFV 參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞復(fù)制有關(guān)。 所以目前防控ASF 的措施是：①服從統(tǒng)一指揮，依靠科學(xué)。 ②統(tǒng)一監(jiān)測，病死尸體深埋。 ③特別是隱性或慢性ASF 的檢測。 如低毒力病毒株和不能產(chǎn)生血細(xì)胞吸附現(xiàn)象的病毒株。 ④群防群動(dòng)，滅蜱與疣豬，消滅傳染源。 ⑤群防群動(dòng)，滅空港和海港的污染ASFV 垃圾，消滅傳播途經(jīng)。 ⑥患ASF 的豬不會(huì)產(chǎn)生免疫抑制，對ASF 慢性、隱性、病毒攜帶者，通過運(yùn)用中草藥，合理的配伍，科學(xué)的炮制，達(dá)到提高豬群整體抵抗力，改善豬群的臟腑功能，讓豬群慢慢地適應(yīng)，豬群與環(huán)境共生共存的自然狀態(tài)。 只有這樣，才是目前防控ASF 的唯一選擇。