甲狀腺細針穿刺細胞學聯(lián)合BRAF基因檢測在甲狀腺結節(jié)良惡性鑒別診斷中的意義

郜靜

(許昌市中心醫(yī)院 病理科，河南 許昌 461000)

近年來，隨著醫(yī)療技術的不斷發(fā)展與國民健康意識的增強，我國的甲狀腺結節(jié)檢出率也在逐年增加。目前，經(jīng)超聲引導下行甲狀腺細針穿刺細胞學(fine-needle aspiration biopsy，F(xiàn)NAB)檢查較常應用，但由于多個方面的局限性(檢查方法、技術等)，致使部分甲狀腺結節(jié)未能確定其準確性[1]。研究發(fā)現(xiàn)，甲狀腺癌變通常與編碼RAF家族絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶的BRAF基因緊密相關[2]。故本研究進一步分析FNAB聯(lián)合BRAF基因檢測在甲狀腺結節(jié)良惡性鑒別診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2018年4月至2019年4月許昌市中心醫(yī)院收治的72例疑似惡性病變甲狀腺結節(jié)患者，其中男29例，女43例；年齡19～62歲，平均(38.26±11.23)歲。本研究已獲醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核批準。

1.2 入選標準納入標準：(1)行手術治療者；(2)自愿簽署知情同意書者。排除標準：(1)甲狀腺癌術后復發(fā)、轉(zhuǎn)移者；(2)既往接受過甲狀腺手術者；(3)研究前3個月接受相關藥物治療者。

1.3 檢測方法(1)FNAB：仰臥位，墊高頸部，頭部后仰，暴露穿刺部位，常規(guī)消毒與鋪巾，利多卡因局麻后，采用彩色多普勒超聲診斷儀(Esaote My Lab90，LA523探頭)對甲狀腺常規(guī)掃查，找出最佳的穿刺切面，經(jīng)超聲引導應用八光22G 70 mm穿刺針穿刺取樣。適宜調(diào)整聚焦部位、增益、深度，以囊壁、微小鈣化及囊實性結節(jié)作為重點取樣部位，行5次以上的反復抽吸提插。將樣本送至病理科行涂片鏡檢，參照2010年國家發(fā)布的甲狀腺病理細胞學的Bethesda報告系統(tǒng)中的6個診斷標準。(2)BRAF基因檢測：應用上述同樣方法穿刺取樣，選用上海星科生物科技有限公司提供的人類BRAF基因V600E突變檢測試劑盒檢測。通過UCSC Genome Bioinformatics行BRAF基因序列檢索操作，引物設計，上游為5’-TCA TAA TGC TTG CTC TGA TAG GA-3’，下游為5’-GGC CAA AAA TTT AAT CAG TGG A-3’，經(jīng)常規(guī)反轉(zhuǎn)錄后生成cDNA。根據(jù)試劑盒說明書進行聚合酶鏈式反應試驗，混合液解凍后與待測DNA樣本、Taq酶以20∶5∶0.25的比例調(diào)配，放入美國ABI2720PCR擴增儀中擴增。擴增要求：5 min、95 ℃；15個循環(huán)(95 ℃、25 s，62 ℃、20 s，72 ℃、20 s)；31個循環(huán)(93 ℃、25 s，58 ℃、35 s，72 ℃、20 s)。在58 ℃時收集HEX與FAM信號。樣本Ct在28及以上表示陰性，樣本Ct在28以下表示陽性。

1.4 觀察指標以手術病理檢查結果為金標準，分析FNAB、BRAF基因單一及聯(lián)合檢測的診斷效能。

1.5 統(tǒng)計學方法采用SPSS 25.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，檢測的敏感性、特異性和準確度以率(%)表示，行χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

病理檢查結果顯示，72例疑似惡性病變甲狀腺結節(jié)患者中，良性甲狀腺結節(jié)為24例，惡性甲狀腺結節(jié)為48例；FNAB聯(lián)合BRAF基因檢測中的靈敏度與準確度均高于單一的FNAB、BRAF基因檢測，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1～4。

表1 FNAB檢查結果(n)

表2 BRAF基因檢測結果(n)

表3 FNAB+BRAF基因檢測結果(n)

表4 FNAB、BRAF基因檢測與兩者聯(lián)合診斷效能比較(%)

3 討論

甲狀腺結節(jié)屬于臨床較為常見的疾病，目前臨床中鑒別良、惡性甲狀腺結節(jié)的主要診斷依據(jù)為病變范圍、結節(jié)大小、功能變化及囊實性等，但由于目前各診斷方法均有一定局限性，故積極尋找出有效的診斷與治療辦法是目前亟待解決的任務之一[3-4]。

本研究結果顯示，F(xiàn)NAB聯(lián)合BRAF基因檢測的靈敏度與準確度均高于單一的FNAB與BRAF基因檢測。這表明應用FNAB聯(lián)合BRAF基因檢測在甲狀腺結節(jié)良惡性鑒別診斷中有較高的診斷價值。分析原因在于FNAB中通過應用穿刺細針進入病灶，吸取少許細胞成分進行涂片檢查，其穿刺獲得的細胞新鮮且無自溶變性，利于在鏡下進行觀察，但由于吸取物較小，檢查過程中仍會存在一定假陰性，且無法對某些組織結構異常的惡性腫瘤進行診斷，故在診斷中存在一定的局限性[5]。V600E點突變?yōu)锽RAF基因中較為常見的遺傳病變，與侵襲性疾病有較高的關聯(lián)性，且由于機體分子病理學發(fā)生改變時間較細胞形態(tài)學改變早，對分子病理標志物實施檢測，能夠在一定程度上彌補FNAB的診斷誤差。故FNAB聯(lián)合BRAF基因檢測能夠較好地發(fā)揮各自診斷優(yōu)勢，提高甲狀腺結節(jié)良惡性診斷的準確率。

綜上所述，應用FNAB聯(lián)合BRAF基因檢測在甲狀腺結節(jié)良惡性鑒別診斷中靈敏度及準確度較高，值得推廣。