常德本地泥鰍與大鱗副泥鰍雜交育種的可行性探究

付瑩，馮宗友，陸娟娟，胡海燕，李洋洋，劉葉，皮杰

（湖南應(yīng)用技術(shù)學(xué)院，湖南 常德 415100）

我國(guó)傳統(tǒng)養(yǎng)殖的泥鰍包括了泥鰍（Misgurnus anguillicaudatus）（俗稱青鰍）和大鱗副泥鰍（Paramisgurnus dabryanus）（俗稱黃板鰍），分屬花鰍亞科中的泥鰍屬（Misgurnus）和副泥鰍屬（Paramisgurnus）[1]。泥鰍和大鱗副泥鰍是近年來最為熱門的名特養(yǎng)殖品種之一，營(yíng)養(yǎng)豐富，有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、藥用價(jià)值和保健功能[2-5]。國(guó)際市場(chǎng)對(duì)我國(guó)泥鰍的需求量逐年增加，尤其是日本、韓國(guó)，年需求量超過100 000 t[6]。隨著需求的不斷增加，對(duì)泥鰍苗種的需求也逐步增加。因此，人工繁育苗種成為促進(jìn)泥鰍養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重點(diǎn)。泥鰍和大鱗副泥鰍的人工繁育技術(shù)已經(jīng)較為成熟[7-10]，為泥鰍養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展提供了保證。隨著養(yǎng)殖技術(shù)的不斷提高，集約規(guī)模化、園區(qū)工廠化養(yǎng)殖發(fā)展迅猛，養(yǎng)殖過程中出現(xiàn)的病害問題也日漸凸顯，如水質(zhì)惡化，細(xì)菌性疾病、病毒、病蟲害等，直接造成經(jīng)濟(jì)損失[11]。目前，我國(guó)利用遠(yuǎn)緣雜交方法在魚類雜交優(yōu)勢(shì)利用上已經(jīng)取得系列成果[12]。泥鰍在一些含氧量低、水質(zhì)較差的惡劣環(huán)境中適應(yīng)能力很強(qiáng)，是一種有很大生產(chǎn)潛力的低碳養(yǎng)殖品種[13]，大鱗副泥鰍生長(zhǎng)快、抗逆性強(qiáng)[14-15]，可通過遠(yuǎn)緣雜交獲得可供養(yǎng)殖的、生長(zhǎng)速度快的雜交泥鰍新品種[16]。

該研究主要是利用大鱗副泥鰍（P♀）×泥鰍（M♂）和大鱗副泥鰍（P♂）×泥鰍（M♀）開展研究，通過雜交育種的方法為泥鰍養(yǎng)殖培育新品種提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 親本的來源與飼養(yǎng)

用于繁殖的大鱗副泥鰍購(gòu)買于江西省余江縣宏鑫特種水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，雌性2 000尾，雄性1 000尾。泥鰍購(gòu)買自常德水產(chǎn)市場(chǎng)，雌性2 000尾，雄性1 000尾。將購(gòu)買的親本在湖南應(yīng)用技術(shù)學(xué)院校水產(chǎn)養(yǎng)殖基地進(jìn)行飼養(yǎng)。親本投喂商品飼料（粗蛋白≥36.0，粗脂肪≥3.0，賴氨酸≥1.9，粗纖維≤8.0，水分≤10，灰分≤15，食鹽≤3.5，鈣≤1.0～4.5，總磷≥0.8～2.5），同時(shí)每天投喂少量的蚯蚓和蠅蛆。

1.2 親本的選擇

選擇親本2—4齡，進(jìn)行雜交試驗(yàn)。大鱗副泥鰍雌性選擇體長(zhǎng)20～26 cm，體質(zhì)量90～140 g以上的個(gè)體；雄性選擇體長(zhǎng)14～16 cm，體質(zhì)量120～130 g以上的個(gè)體。常德本地泥鰍雌性和雄性均選擇體質(zhì)量45～80 g，體長(zhǎng)12～16 cm以上的個(gè)體。此外，雌鰍要求腹部膨大、富有彈性，腹部明顯向外突出，將雌鰍腹部朝上，可看到明顯的卵巢輪廓，隱約可見腹中卵粒，生殖孔圓形外翻，呈粉紅色，用手輕壓腹部，有卵粒流出；雄鰍要求腹部沒有明顯膨大，生殖孔狹長(zhǎng)凹陷，呈暗紅色，輕壓腹部有乳白色精液流出，胸鰭追星明顯，尾部上1/3處有狹長(zhǎng)的隆起[13，17-18]。

1.3 懷卵量測(cè)定

挑選用于雜交試驗(yàn)的大鱗副泥鰍和常德本地泥鰍雌性親本各18尾，其中大鱗副泥鰍體重平均體質(zhì)量為（121.45±12.51）g，平均體長(zhǎng)為（23.75±1.94）cm；常德本地泥鰍平均體質(zhì)量為（58.45±4.67）g，平均體長(zhǎng)（15.48±0.52）cm，用麻醉劑間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽（MS-222）麻醉后，用清水洗凈，毛巾擦干后稱重并解剖，統(tǒng)計(jì)絕對(duì)懷卵量，并計(jì)算相對(duì)懷卵量。

1.4 催產(chǎn)

將大鱗副泥鰍（P♀）×常德本地泥鰍（M♂）的雜交模式分為6組，每組親本30尾（雌雄比1∶1）放入裝有曝氣后自來水的塑料箱81 cm×59 cm×51 cm）中，水深 40 cm；大鱗副泥鰍（P♂）×泥鰍（M♀）也分為 6組，每組親本30尾（雌雄比1∶1）放入裝有曝氣后自來水的塑料箱（81 cm×59 cm×51 cm）中，水深40 cm。催產(chǎn)劑選用DOM、HCG、LRH－A2三種組合，用量為 DOM 0.25 mg＋LRH－A23μg＋HCG 150 IU[19]。采用兩次注射催產(chǎn)，第一次注射時(shí)間為20：30，采用肌肉注射，在背鰭后緣針頭與軀體成45°，注射深度為0.2～0.3 cm。每尾雌鰍注射0.5 mL，雄鰍劑量減半，將打過催產(chǎn)針的雄鰍和雌鰍放入不同的水箱。12 h后第2次注射，注射劑量與第1次相同，注射后的雌雄個(gè)體按1∶1放入同一水箱中。催產(chǎn)期間水溫 21～22 ℃，溶氧 4.2～5.7 mg/L，pH 值 7.1～7.5。每8 h換水1次，換水量為總量的1/3。

1.5 人工授精

當(dāng)雄性個(gè)體追逐雌性個(gè)體，輕壓雌性腹部有卵粒流出，輕壓雄性有白色精液流出時(shí)。采用干法人工授精，將親本撈出，使毛巾擦干，將2～3條雌鰍的卵粒擠入消毒干凈的白瓷碗中。同時(shí)，殺死雄鰍，取出精巢，剪碎研磨，制成精液，隨后倒入瓷碗中，用羽毛輕輕攪動(dòng)，然后用清水沖洗幾次，用羽毛將受精卵輕輕劃入孵化設(shè)備中。

1.6 人工孵化

受精卵采用120目、容積為30 cm×20 cm×25 cm的充氣式網(wǎng)箱孵化，網(wǎng)箱懸掛于81 cm×59 cm×51 cm的水箱中，水深40 cm。放卵密度為80 000粒/m3，每4 h換水1次，每次換水量為總量的1/3。孵化期間水溫 22～24℃，溶氧 5.0～6.5 mg/L，pH 值為 7.0～7.2。

1.7 苗種培育

池塘提前進(jìn)行消毒，7 d后注水，利用微生態(tài)產(chǎn)品培育開口餌料。當(dāng)孵出的幼苗平游后，轉(zhuǎn)移至池塘進(jìn)行培育。幼苗下塘后7 d，利用粉狀商品飼料加水稀釋后全池潑灑，早晚各1次。當(dāng)幼苗長(zhǎng)至3 cm左右時(shí)，投喂粒徑0.5 mm的膨化商品飼料。

1.7 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)測(cè)得的數(shù)據(jù)用Excel 2016進(jìn)行初步整理，用SPSS22進(jìn)行單因素方差分析，所有數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 懷卵量

大鱗副泥鰍和常德本地泥鰍的相對(duì)懷卵量與絕對(duì)懷卵量結(jié)果見表1。結(jié)果表明，大鱗副泥鰍絕對(duì)懷卵量顯著高于本地泥鰍（P＜0.05），而大鱗副泥鰍的相對(duì)懷卵量顯著低于本地泥鰍（P＜0.05）。

表1大鱗副泥鰍和常德本地泥鰍的相對(duì)懷卵量與絕對(duì)懷卵量

2.2 受精率與孵化率

大鱗副泥鰍（P♀）×泥鰍（M♂）的產(chǎn)卵量5 940～8 193粒/尾，平均為7 279±1 024 粒/尾。受精率為6.40～29.00%，平均為15.00%±9.02%；孵化率為6.30～35.90%，平均為 22.10±4.25%（表 2）。

泥鰍（M♀）×大鱗副泥鰍（P♂）的產(chǎn)卵量為5 430～8 760粒/尾，平均為 7 184粒/尾。受精率為4.00%～34.40%，平均為17.63±12.92；孵化率為 5.00%～36.10%，平均為21.63%±5.50%（表 2）。泥鰍與大鱗副泥鰍正反交受精率和孵化率差異不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

雌性親本懷卵量是苗種繁育數(shù)量的多少的前提條件。研究表明，12～15 cm體長(zhǎng)的大鱗副泥鰍雌鰍懷卵約1～1.5萬粒；20 cm體長(zhǎng)的親鰍懷卵達(dá) 2.4萬粒以上[20]。本地泥鰍體長(zhǎng)8 cm的雌鰍，懷卵量約2 000粒，10 cm的懷卵量為7000粒，12 cm的懷卵量1～1.4萬粒，體長(zhǎng)15 cm的懷卵量為1.2～1.8萬粒，體長(zhǎng)20 cm的懷卵量為2.4萬粒[20]。個(gè)體越大，泥鰍和大鱗副泥鰍的平均絕對(duì)懷卵量越大[6，13]。楊興麗研究表明，四倍體泥鰍為父本與大鱗副泥鰍為母本雜交的到的三倍體泥鰍多項(xiàng)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)明顯高于大鱗副泥鰍[22]。該試驗(yàn)結(jié)果表明，大鱗副泥鰍的絕對(duì)懷卵量顯著大于常德本地泥鰍（P＜0.05），因此，選擇常德本地泥鰍作為父本，大鱗副泥鰍作為母本是比較優(yōu)選的雜交育種方案。

李懋等[23]和趙振山等的研究表明[24]，泥鰍與大鱗副泥鰍遠(yuǎn)緣雜交具備可行性，且無論以泥鰍為母本，還是以大鱗副泥鰍為母體，雜交子代都可正常發(fā)育，且有較高成活率，這一現(xiàn)象反映兩者雜交具有較高親和性[21]。該研究的結(jié)果也表明，大鱗副泥鰍與常德本地的泥鰍進(jìn)行雜交育種是可行的。但泥鰍和大鱗副分屬花鰍亞科中的泥鰍屬和副泥鰍屬[1]，泥鰍的染色體有2n=100和2n=50兩種，其染色體組型分別為四倍體和二倍體[5，16]，而大鱗副泥鰍的染色體只有n=48一種，染色體倍性為二倍體[25]。泥鰍和大鱗副泥鰍兩者進(jìn)行雜交，為不同屬間的遠(yuǎn)緣雜交[26]。方禮豹研究表明，用二倍體泥鰍與大鱗副泥鰍進(jìn)行正反交，其受精率與孵化率分別為87.32%±2.29%、61.41%±3.45%和84.64%±2.21%、74.46%±4.19%；用四倍體泥鰍與大鱗副泥鰍進(jìn)行正反交，其受精率與孵化率分別為，85.66%±2.54%、55.91%±5.42%和82.62%±3.11%、63.34%±4.39%[25]。不同地區(qū)分布的泥鰍群體有所不同，其染色體倍性不盡相同[27]，該研究并未對(duì)本地泥鰍的染色體倍性進(jìn)行鑒定，可能存在兩種染色體數(shù)目不同的精子與同一種卵子受精（P♀ ×M♂）或2種不同染色體數(shù)目的卵子與同一種精子受精（M♀ ×P♂）的情況，有可能存在受精混亂，進(jìn)而導(dǎo)致泥鰍與大鱗副泥鰍雜交受精率和孵化率極低。因此，在后期研究中需要鑒別泥鰍的染色體倍性。

4 結(jié)論

該研究表明，大鱗副泥鰍與常德本地泥鰍進(jìn)行雜交育種是可行的，但需要對(duì)常德本地泥鰍的染色體倍性進(jìn)行鑒定。大鱗副泥鰍的絕對(duì)懷卵量顯著大于常德本地泥鰍，可選擇大鱗副泥鰍為母本，常德本地泥鰍作父本進(jìn)行雜交育種。