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    金線蓮應(yīng)答高溫脅迫的蛋白質(zhì)組學(xué)分析

    2020-02-22 02:54梅瑜王繼華蔡時可陳棟
    江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報 2020年6期

    梅瑜 王繼華 蔡時可 陳棟

    摘要:金線蓮是傳統(tǒng)的名貴中藥材,以耐熱品系金線蓮NYJ2為研究對象,分析其在蛋白質(zhì)水平上對高溫脅迫的響應(yīng)。通過比較高溫脅迫前后NYJ2葉片蛋白質(zhì)組學(xué)的變化,獲得二級圖譜326 478個,匹配到34 376個,鑒定到肽段9 804個,蛋白質(zhì)2 534個,大多數(shù)肽段分布的長度在7~25 aa。通過對高溫脅迫前后蛋白質(zhì)數(shù)量和種類的差異分析,共獲得143個差異表達(dá)的蛋白質(zhì),其中,40個蛋白質(zhì)上調(diào)表達(dá),103個下調(diào)表達(dá),HSP20家族的基因(HSP17.4)編碼蛋白質(zhì)、病程相關(guān)蛋白質(zhì)(PR)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GSTF1)、過氧化氫酶(CAT)的表達(dá)差異較多。另外,在KOG功能分類中發(fā)現(xiàn)有112個功能不明確的蛋白質(zhì),223個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制蛋白質(zhì)。通過分析NYJ2在蛋白質(zhì)組學(xué)層面對熱脅迫的響應(yīng),為金線蓮耐熱栽培提供了參考依據(jù)。

    關(guān)鍵詞:金線蓮;高溫脅迫;耐熱資源;蛋白質(zhì)組學(xué)

    中圖分類號:Q816;S567文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:1000-4440(2020)06-1389-09

    Abstract:Anoectochilus roxburghii is a kind of precious Chinese herbal medicine. In this study, the heat-resistant A. roxburghii strain NYJ2 was used as the research object to study its response to high temperature stress at protein level. 326 478 second-order spectra were got by comparing the difference of protemics for the leaves of NYJ2 before and after high temperature stress. After filtering, 34 376 spectra were matched, 9 804 peptides and 2 534 proteins were identified. The length range of most peptides was 7-25 aa. 143 differentially expressed proteins were got by analyzing the number and species differences of the proteins before and after high temperature stress, 40 of which were significantly up-regulated and 103 were significantly down-regulated. There were many expressional differences in the HSP20 family gene (HSP17.4) encoded protein, pathogenesis-related (PR) protein, glutathione S-transferase (GSTF1) and catalase (CAT). In addition, 112 proteins with ambiguous functions were found during functional classification of KOG, and 223 proteins were related to signaling mechanism. References are made for the heat-resistant cultivation of A.roxburghii by analyzing the response of NYJ2 to high temperature stress at protemics level.

    Key words:Anoectochilus roxburghii;high temperature stress;heat resistant resources;proteomics

    金線蓮[Anoectochilus roxburghii(Wall.) Lindl],又名金線蘭、金線虎頭蕉等,為蘭科開唇蘭屬多年生植物,是一種傳統(tǒng)的名貴中藥材,主要分布于中國、日本、斯里蘭卡、印度和尼泊爾等國家,在中國主要分布在廣東、廣西、云南、福建和臺灣等地區(qū)[1]。金線蓮以全草入藥,具有清熱涼血、消炎解毒、強(qiáng)心利尿、扶正固本、養(yǎng)壽延年的功效,對癌癥、糖尿病、高血壓、心臟病、婦科疾病、小兒發(fā)熱以及蛇毒咬傷等有很好的療效,享有“藥中之王”的美譽(yù),是珍稀名貴的中藥材[2]。高溫脅迫是限制植物生長和發(fā)育的主要非生物脅迫因子。金線蓮喜陰涼濕潤環(huán)境,對高溫敏感,人工栽培的金線蓮難以越夏,因此高溫嚴(yán)重制約著金線蓮產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。噴施外源激素可提高蘭科植物鐵皮石斛的耐熱性,但其調(diào)控響應(yīng)機(jī)制的研究還未見報道[3]。藥用植物蛋白質(zhì)組學(xué)是開展功能基因挖掘、化合物代謝通路及功能機(jī)制等研究的有效工具[4]。對藥用植物進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究,通過蛋白質(zhì)差異表達(dá)譜的分析比較,能夠獲得藥用植物不同組織部位的蛋白質(zhì)表達(dá)差異,更準(zhǔn)確地獲得有效成分,也能夠揭示其活性成分在植物生長過程中的累積變化規(guī)律;在臨床研究方面,通過比對分析用藥前后模式動物組織中蛋白質(zhì)表達(dá)譜的差異,可以獲得對治療有效的蛋白質(zhì),從而尋找到植物中的活性成分,有助于發(fā)現(xiàn)藥用植物體內(nèi)有效成分組成及作用機(jī)制。利用蛋白質(zhì)組學(xué)研究擬南芥(Arabidopsis thaliana)、大豆[Glycine max (Linn.) Merr.]、水稻(Oryza sativa L.)、小麥(Triticumaestivum L.)、馬齒莧(Portulacaoleracea L.)和半夏(Pinelliaternata)等不同耐熱類型植物對高溫脅迫的響應(yīng)發(fā)現(xiàn),蛋白質(zhì)的表達(dá)模式變化各異,大多涉及應(yīng)答網(wǎng)絡(luò)體系中重要的信號與代謝通路(如熱激蛋白、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、脅迫防御和光合作用等) [5]。其中,應(yīng)激反應(yīng)性蛋白植物熱激蛋白70(Heat shock protein 70, HSP70) 是一類高度保守的蛋白,與植物抗逆性具有密切的關(guān)系,HSP70蛋白家族的遺傳學(xué)和生化功能研究被廣泛關(guān)注[6]?;ㄩ睒淙~片在熱處理1 h時,SpHSP70-1表達(dá)量達(dá)到最高值,而后開始顯著下降,在熱處理24 h 內(nèi),其表達(dá)量變化差異達(dá)到上百倍[7]。藥用植物應(yīng)答逆境脅迫時次生代謝產(chǎn)物相關(guān)的蛋白質(zhì)組學(xué)變化也是研究的熱點(diǎn)[8]。本研究分析了金線蓮如何在蛋白質(zhì)水平上對高溫脅迫進(jìn)行響應(yīng),將有助于了解脅迫因子對植物的傷害機(jī)制及植物的適應(yīng)機(jī)制,為耐熱金線蓮品種選育及栽培技術(shù)提高提供幫助。

    1材料與方法

    1.1供試材料

    試驗(yàn)材料為廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所篩選出的耐熱金線蓮品系NYJ2。

    1.2試驗(yàn)方法

    1.2.1材料處理方法將NYJ2的組培苗經(jīng)馴化后,定植于泥炭土∶蛭石=1∶1(體積比)的培養(yǎng)缽內(nèi),放于晝/夜(12 h/12 h)溫度為25 ℃/18 ℃、光照度為2 000 lx、相對空氣濕度為80%±5%的人工氣候培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每天上午澆水1次,每株澆水20 ml。培養(yǎng)15 d后,挑選生長狀態(tài)一致的金線蓮進(jìn)行45 ℃高溫脅迫,在脅迫0 h、1 h時進(jìn)行取樣,每處理2個重復(fù),每處理取金線蓮不同部位的葉片,迅速裝入凍存管并灌入液氮,待葉片冷凍后迅速放入-80 ℃冰箱保存。

    1.2.2葉片蛋白質(zhì)的提取方法葉片蛋白質(zhì)的提取參照蛋白質(zhì)提取試劑盒(BSP001, Sang Biotech Co., Ltd.)的操作規(guī)程。

    1.2.3同位素標(biāo)記相對和絕對定量(iTRAQ)測序流程將樣品進(jìn)行還原烷基化處理,將二硫鍵打開以便于充分酶解蛋白質(zhì);按照2D-quant-kit操作方法進(jìn)行蛋白質(zhì)濃度測定,等體積進(jìn)行SDS(十二烷基硫酸鈉)電泳;37 ℃下用胰蛋白酶將提取的蛋白質(zhì)水解過夜;用iTRAQ試劑來標(biāo)記肽段;然后將標(biāo)記后的肽段進(jìn)行等量混合,使用強(qiáng)陽離子交換色譜進(jìn)行預(yù)分離;最后通過液相串聯(lián)質(zhì)譜對標(biāo)記肽進(jìn)行分析,獲取差異表達(dá)肽段。

    1.2.4iTRAQ數(shù)據(jù)分析根據(jù)iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析流程,將質(zhì)譜獲得的肽段進(jìn)行峰識別,建立參考數(shù)據(jù)庫;利用Mascot2.3.02蛋白質(zhì)鑒定軟件,通過NCBInr數(shù)據(jù)庫選擇適合的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫對獲得的肽段和蛋白質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析,并進(jìn)行GO功能注釋、KEGG代謝通路注釋、KOG注釋,對獲得的差異蛋白質(zhì)進(jìn)行相關(guān)功能注釋。

    2結(jié)果與分析

    2.1金線蓮應(yīng)答高溫脅迫的蛋白質(zhì)組學(xué)測序基本信息

    對高溫脅迫前后NYJ2葉片蛋白質(zhì)表達(dá)譜進(jìn)行分析,結(jié)果(圖1)顯示,二級圖譜總數(shù)量為326 478個,經(jīng)過數(shù)據(jù)過濾,匹配到的圖譜數(shù)量為34 376個;其中,匹配到的特有肽段圖譜數(shù)量為30 458個,能夠鑒定到的肽段有9 804個,特有肽段序列數(shù)量為9 034個,鑒定到的蛋白質(zhì)數(shù)量為2 534個。

    2.1.1蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量從高溫脅迫前后金線蓮葉片中蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量大小來看,鑒定出來的蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量主要集中在10 000~80 000,其數(shù)量約占總蛋白質(zhì)數(shù)量的83.94%,其中相對分子質(zhì)量為20 000~30 000和30 000~40 000的蛋白質(zhì)數(shù)量分別為439個和429個,分別占總蛋白質(zhì)數(shù)量的17.32%和16.93%;相對分子質(zhì)量為0~10 000的蛋白質(zhì)數(shù)量占總蛋白質(zhì)數(shù)量的3.28%,相對分子質(zhì)量為80 000~100 000的蛋白質(zhì)數(shù)量占總蛋白質(zhì)數(shù)量的5.25%,相對分子質(zhì)量>100 000的蛋白質(zhì)數(shù)量占總蛋白質(zhì)數(shù)量的7.54%左右(圖2)。

    2.1.2肽段長度分布從高溫脅迫前后金線蓮葉片中肽段的序列長度(圖3)來看,大多數(shù)肽段長度在7~25 aa,約占總肽段數(shù)的96.50%,其中長度在11~15 aa的肽段數(shù)所占總肽段數(shù)的比例較大,特別是長度為12 aa的肽段數(shù)量最多。

    2.1.3肽段序列覆蓋度分析肽段序列覆蓋度可知,蛋白質(zhì)肽段覆蓋度在40%~100%的有222個,占總蛋白質(zhì)數(shù)量的8.76%;其余91%左右的肽段覆蓋度≤40%,覆蓋度在0~10%的蛋白質(zhì)數(shù)量最多,有1 051個,占總蛋白質(zhì)數(shù)量的41.48%,其次是覆蓋度為10%~15%的蛋白質(zhì)數(shù)量,有376個,占總蛋白質(zhì)數(shù)量的14.84%;覆蓋度在15%~40%的蛋白質(zhì)數(shù)量占總蛋白質(zhì)數(shù)量的34.93%。

    2.1.4肽段數(shù)量分布由鑒定到的蛋白質(zhì)所含肽段的數(shù)量分布情況(圖4)看出,含有1個肽段的蛋白質(zhì)數(shù)量最多,有858個,占總鑒定蛋白質(zhì)數(shù)量的33.86%;其次是含有2個肽段的蛋白質(zhì)數(shù)量,有491個;大于11個肽段的蛋白質(zhì)數(shù)量有182個;1~10個肽段的蛋白質(zhì)數(shù)量隨著匹配肽段數(shù)量的增加而減少。

    2.2金線蓮應(yīng)答高溫脅迫的蛋白質(zhì)組學(xué)蛋白質(zhì)的功能注釋

    2.2.1KEGG注釋在生物體內(nèi),不同蛋白質(zhì)相互協(xié)調(diào)行使其生物學(xué)行為,為了獲得高溫脅迫下金線蓮葉片蛋白質(zhì)參與活動的主要代謝途徑以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的途徑,對獲得的蛋白質(zhì)進(jìn)行代謝通路分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)獲得的2 534個蛋白質(zhì)對應(yīng)的1 193個基因被注釋到115個通路中,按注釋基因數(shù)量大小依次列出10個通路(表1),其中在碳代謝通路中注釋的蛋白質(zhì)數(shù)量最多,為161個,占注釋總數(shù)的13.50%;其次是氨基酸合成通路,被注釋的蛋白質(zhì)有124個,占注釋總數(shù)的10.39%;其他包括核糖體(78個,6.54%)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白質(zhì)加工(76個,6.37%)、糖酵解(61個,5.11%)、氧化磷酸化(59個,4.95%)等代謝通路。

    2.2.2GO注釋對高溫脅迫前后獲得的所有金線蓮葉片的蛋白質(zhì)進(jìn)行GO功能注釋,主要對分子功能、生物學(xué)過程和細(xì)胞組分中所涉及的GO條目及相應(yīng)的蛋白質(zhì)ID和數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計分析,并略去沒有相應(yīng)蛋白質(zhì)的GO條目。結(jié)果顯示,所有鑒定到的蛋白質(zhì)被注釋到41個GO條目中(圖5)。在生物學(xué)過程中,注釋蛋白質(zhì)數(shù)量較多的是代謝過程、細(xì)胞過程和單一生物體過程,分別為1 584個、1 342個、1 205個;在分子功能中,催化活性和結(jié)合的注釋蛋白質(zhì)數(shù)量較多,分別為1 317個和1 135個;在細(xì)胞組分中,細(xì)胞和細(xì)胞器的注釋蛋白質(zhì)數(shù)量較多,分別為1 470個和1 207個。

    2.2.3KOG注釋將高溫脅迫獲得的2 534個金線蓮葉片蛋白質(zhì)與KOG數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對,對這些蛋白質(zhì)的功能進(jìn)行預(yù)測,并對其做功能分類統(tǒng)計。結(jié)果(圖6)顯示,這些蛋白質(zhì)被注釋到25個功能類群中。其中,翻譯后修飾、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換、伴侶類群的蛋白質(zhì)數(shù)量最多,為690個,占所有注釋蛋白質(zhì)數(shù)量的27.23%;其次,一般功能預(yù)測有549個蛋白質(zhì),占所有注釋蛋白質(zhì)數(shù)量的21.67%;另外,發(fā)現(xiàn)未知功能的蛋白質(zhì)有112個;信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的蛋白質(zhì)有223個,占所有注釋蛋白質(zhì)數(shù)量的8.80%。

    2.3高溫脅迫前后差異蛋白質(zhì)的表達(dá)分析

    為了進(jìn)一步揭示高溫脅迫對金線蓮葉片生理生化的影響及耐高溫調(diào)控機(jī)制,對獲得的蛋白質(zhì)進(jìn)行高溫脅迫前后差異蛋白質(zhì)表達(dá)分析。依據(jù)蛋白質(zhì)豐度水平,當(dāng)差異倍數(shù)達(dá)到1.2倍以上,且經(jīng)統(tǒng)計檢驗(yàn)其P值小于0.05時,視為差異蛋白。對高溫脅迫前后的蛋白質(zhì)表達(dá)量進(jìn)行分析,對照樣本和高溫脅迫處理樣本共鑒定到143個差異表達(dá)蛋白質(zhì),其GO功能注釋如圖7所示。其中,上調(diào)表達(dá)的蛋白質(zhì)有40個,下調(diào)表達(dá)的蛋白質(zhì)有103個,說明金線蓮在應(yīng)答高溫脅迫時,葉片的蛋白質(zhì)作用以負(fù)調(diào)控為主。尤其是HSP20家族的17 400熱激蛋白和葉綠體中的牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸(Geranylgeranyl pyrophosphate synthase,GGPP)蛋白質(zhì)的表達(dá)量在高溫脅迫后顯著下調(diào);顯著上調(diào)的是病程相關(guān)蛋白質(zhì)(Pathogenesis-related protein,PR)、葉綠體的Fructokinase-6(果糖激酶二硫鍵異構(gòu)酶)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(Glutathione S-transferase,GSTF1)等蛋白質(zhì)表達(dá)量。

    2.3.1差異表達(dá)蛋白質(zhì)的KEGG富集分析對高溫脅迫后金線蓮樣本和脅迫前金線蓮樣本的差異表達(dá)蛋白質(zhì)以KEGG通路為單位,通過超幾何檢驗(yàn),尋找差異表達(dá)蛋白質(zhì)顯著富集途徑。通過通路的顯著性富集來確定高溫脅迫前后金線蓮葉片的差異表達(dá)蛋白質(zhì)參與高溫脅迫的主要生化代謝途徑和信號傳導(dǎo)途徑。結(jié)果發(fā)現(xiàn),差異表達(dá)蛋白質(zhì)被注釋到52個通路中,表2為注釋差異表達(dá)蛋白質(zhì)最多的前20條通路。

    其中,差異表達(dá)蛋白質(zhì)較多的通路是碳循環(huán)途徑、卟啉和葉綠素代謝途徑、氨基酸合成途徑等(表2),且卟啉和葉綠素代謝途徑的基因表達(dá)量顯著上調(diào)。

    2.3.2差異表達(dá)蛋白質(zhì)的GO富集分析將金線蓮高溫脅迫前后葉片的差異表達(dá)蛋白質(zhì)通過GO顯著性富集分析,與所有鑒定得到的蛋白質(zhì)進(jìn)行比較,獲得差異表達(dá)蛋白質(zhì)與生物學(xué)功能相關(guān)性(表3)。

    從分組間差異表達(dá)蛋白質(zhì)來看,GO生物學(xué)過程富集的條目最多,有506條。差異表達(dá)蛋白質(zhì)有106個,被注釋的蛋白質(zhì)有1 863個,按富集數(shù)量依次列出較多的10個通路(表3):代謝過程、細(xì)胞過程、有機(jī)物代謝過程、細(xì)胞代謝過程、單有機(jī)體過程、初級代謝過程、單有機(jī)體細(xì)胞過程、單有機(jī)體代謝過程、高分子代謝過程、生物合成過程。

    其次是GO分子功能富集過程,共有132個通路,富集較多的前10個通路(表4)為催化活性、結(jié)合、有機(jī)環(huán)狀化合物結(jié)合、雜環(huán)化合物結(jié)合、小分子結(jié)合、離子結(jié)合、陽離子結(jié)合、核苷結(jié)合、嘌呤核苷酸結(jié)合、核糖核苷酸結(jié)合等。

    GO細(xì)胞組分過程富集的通路最少,共有92條,差異基因富集較多的前10個通路(表5)為細(xì)胞、細(xì)胞部分、細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞內(nèi)部分、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器、細(xì)胞器、細(xì)胞內(nèi)膜結(jié)合細(xì)胞器、膜細(xì)胞器、細(xì)胞質(zhì)部分、細(xì)胞質(zhì)。

    差異表達(dá)蛋白質(zhì)的GO注釋結(jié)果如圖7所示,在生物學(xué)過程中,代謝過程的差異表達(dá)蛋白質(zhì)較多,顯著上調(diào)的有23個,顯著下調(diào)的有69個;細(xì)胞過程中的差異表達(dá)蛋白質(zhì),顯著上調(diào)的有21個,顯著下調(diào)的有68個;單有機(jī)體過程中顯著上調(diào)的蛋白質(zhì)有18個,顯著下調(diào)的蛋白質(zhì)有54個;其他條目逐漸減少。在分子功能富集過程中,催化活性條目的差異表達(dá)蛋白質(zhì)最多,顯著上調(diào)的有17個,顯著下調(diào)的有57個;結(jié)合條目中顯著上調(diào)的蛋白質(zhì)有17個,顯著下調(diào)的蛋白質(zhì)有53個,其他條目較少。細(xì)胞組分中,差異表達(dá)蛋白質(zhì)較多的條目是細(xì)胞和細(xì)胞部分,顯著上調(diào)的蛋白質(zhì)均為27個,顯著下調(diào)的蛋白質(zhì)為59個;其次是細(xì)胞器條目,顯著上調(diào)的蛋白質(zhì)有26個,顯著下調(diào)的蛋白質(zhì)為46個,其他條目的蛋白質(zhì)數(shù)量相對較少。

    3討論

    高溫脅迫會導(dǎo)致植物的膜蛋白變性、膜組分發(fā)生變化、產(chǎn)生自由基等,使細(xì)胞膜脂過氧化程度加劇、內(nèi)細(xì)胞器或膜結(jié)構(gòu)破壞,影響植物的正常代謝[9-13]。熱激蛋白(HSP)是植物受高溫脅迫產(chǎn)生的一類溫度響應(yīng)蛋白質(zhì),主要以分子伴侶蛋白的形式幫助其他多肽折疊、組裝或者轉(zhuǎn)移,它本身不參與蛋白質(zhì)的形成,能夠積累受損蛋白、維護(hù)細(xì)胞內(nèi)平衡、降低熱害[14]。通過iTRAQ技術(shù)對高溫脅迫下金線蓮葉片的蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定分析,共得到326 478張總圖譜,其中34 376張可與數(shù)據(jù)庫匹配,特有肽段圖譜數(shù)量為30 458個,鑒定得到的肽段有9 804個。通過對差異蛋白質(zhì)的分析,143個蛋白質(zhì)中有40個上調(diào)、103個下調(diào),GGPP編碼基因在高溫脅迫后顯著下調(diào);病程相關(guān)蛋白質(zhì)(PR)、葉綠體的果糖激酶二硫鍵異構(gòu)酶、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶等蛋白質(zhì)的表達(dá)量則顯著上調(diào),尤其是HSP17.4在高溫脅迫后表達(dá)量差異顯著。

    HSP20家族為小分子熱激蛋白(sHSPs,相對分子質(zhì)量為15 000~40 000),在植物生長發(fā)育中受到高溫脅迫或滲透脅迫時,小分子熱激蛋白編碼基因會被誘導(dǎo)表達(dá),增強(qiáng)植物對非生物脅迫的抗性,該蛋白質(zhì)的保守性較低[15]。本研究獲得的HSP17.4屬于HSP20蛋白質(zhì)家族,其相對分子質(zhì)量為17 400,基因的開放閱讀框(ORF)長度為453 bp、編碼150個氨基酸。Zhou等[16]將蓮NnHSP17.5基因轉(zhuǎn)入擬南芥,結(jié)果顯示該基因的過表達(dá)提高了擬南芥種子的萌發(fā)活力和幼苗的耐熱性;李敏等[17]將月季Rchsp17.8基因轉(zhuǎn)入煙草,顯著提高了煙草的耐熱性。在高溫脅迫過程中大多數(shù)小分子熱激蛋白參與了保護(hù)植物PSⅡ的反應(yīng),從而提高了植物抵抗高溫脅迫的能力[18-19]。當(dāng)植物細(xì)胞中的活性酶受高溫脅迫影響變性而喪失原來的功能時,小分子熱激蛋白還可以與其他熱激蛋白進(jìn)行復(fù)合來修復(fù)已損傷的蛋白質(zhì)[20]。MsHsp16.9在高溫脅迫下表達(dá)量的增加與新疆野蘋果的超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)和過氧化氫酶(CAT)等酶的活性增強(qiáng)一致,同時抑制植株體內(nèi)MDA含量的升高[21]。轉(zhuǎn)入VvHSP17基因的植株在高溫脅迫后MDA含量增幅較小,脯氨酸積累量顯著增加,SOD活性同樣顯著增加 [20]。金線蓮HSP17.4基因與同為蘭科的鐵皮石斛HSP17.3基因和白芨BsHsp17.3基因具有較高的同源性,同時具有抵抗高溫脅迫和冷脅迫的功能[15]。金線蓮的脯氨酸含量、SOD和CAT活性會隨高溫脅迫時間的延長而增強(qiáng),耐熱品系MDA含量的增幅小于不耐熱品系[22]。HSP17.4可能在金線蓮抵御高溫脅迫中發(fā)揮著重要作用。

    生物通過信息交流來控制和調(diào)節(jié)體內(nèi)細(xì)胞的生長發(fā)育、增殖、代謝,且細(xì)胞會對生理和非生理的信號產(chǎn)生應(yīng)答來適應(yīng)環(huán)境。KEGG注釋結(jié)果顯示,高溫脅迫對金線蓮的碳循環(huán)和光合作用有較大的影響。通過KOG注釋發(fā)現(xiàn)112個功能不明確的蛋白質(zhì),可能是還沒有被發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì);還有223個蛋白質(zhì)被注釋到信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制中。因此,在今后的研究中需要進(jìn)一步關(guān)注這些蛋白質(zhì)并深入挖掘它們的信息。

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    (責(zé)任編輯:陳海霞)

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