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(1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)工學(xué)院,山西太谷 030801; 2.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)文理學(xué)院,山西太谷 030801)
紫花苜蓿是豆科草本植物,品種豐富,種植范圍廣且產(chǎn)量高,資源十分豐富[1]。苜蓿中含有蛋白質(zhì)、膳食纖維、多糖、多酚、總黃酮等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),其氨基酸種類豐富且數(shù)量均衡,可補(bǔ)充人們?nèi)粘9任镏腥鄙俚馁嚢彼?多糖、多酚、總黃酮具有延緩衰老的功能;大量存在的膳食纖維具有預(yù)防便秘、調(diào)節(jié)血糖、降血壓、吸附有害物質(zhì)等功能[2-4]。苜蓿具有很高的食用價(jià)值,但目前在我國(guó)苜蓿主要用做動(dòng)物飼料[5],苜蓿功能食品有待進(jìn)一步開發(fā)。
國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者對(duì)苜蓿中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及其功能性質(zhì)進(jìn)行了研究。Wang等[6]和Xie等[7]對(duì)苜蓿葉蛋白進(jìn)行了研究,得知苜蓿葉蛋白氨基酸比例均衡且泡沫膨脹率高于卵清蛋白。劉華偉等[8]、許英一等[9]、施偉梅等[10]對(duì)苜蓿中多糖、多酚、總黃酮進(jìn)行提取并對(duì)其抗氧化性進(jìn)行了研究,得知苜蓿多糖、多酚、總黃酮清除DPPH自由基的半數(shù)抑制濃度分別為0.573、0.011、0.608 mg/mL,具有良好的抗氧化性。Wang等[11]對(duì)苜蓿膳食纖維進(jìn)行了研究,得知食用添有5%苜蓿粉的飼料時(shí),便對(duì)豬腸道中的微生物和丁酸鹽有顯著影響,有益于維持腸道環(huán)境的健康。但關(guān)于不同粉碎粒度苜蓿莖葉的基本成分、活性成分、功能性質(zhì)研究卻鮮見報(bào)道。
對(duì)苜蓿中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定,是開發(fā)苜蓿功能食品的前提,粉碎又是開發(fā)苜蓿功能食品的重要工序。因此,本文比較了苜蓿不同部位基本成分、活性成分、功能性質(zhì),并對(duì)不同粒度苜蓿粉營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的溶出量和功能性質(zhì)進(jìn)行分析,以期提高苜蓿的利用價(jià)值,為苜蓿功能食品開發(fā)提供理論指導(dǎo)。
紫花苜蓿 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)牧草實(shí)踐教學(xué)基地初花期的金皇后;葡萄糖、蘆丁、沒食子酸、膽固醇 標(biāo)準(zhǔn)品,合肥博美生物科技有限公司;亞硝酸鈉 標(biāo)準(zhǔn)品,北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)責(zé)任有限公司;耐高溫α-淀粉酶液(≥20000 U/mL)、蛋白酶(≥100 U/mg)、淀粉葡萄糖苷酶(≥100000 U/mL) 上海金穗生物科技有限公司;氫氧化鈉、氯化鈉、醋酸鉀 分析純,天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司。
分級(jí)篩邊長(zhǎng)為0.25、0.2、0.16、0.125、0.08、0.063 mm的編織方孔篩 浙江上虞市華豐五金有限公司;SKD-800凱氏定氮儀 上海沛歐分析儀器有限公司;721N分光光度計(jì) 上海重逢科學(xué)儀器有限公司;SC-2542低速離心機(jī) 安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司;PHS-3C型精密pH計(jì) 上海精密科學(xué)儀器有限公司。
1.2.1 樣品的制備
1.2.1.1 不同部位的苜蓿粉 采樣后,以苜蓿底端為起點(diǎn)進(jìn)行測(cè)量,在植株30、60、90 cm處進(jìn)行分段,將植株分為下(0~30 cm)、中(30~60 cm)、上(大于60 cm)三段;分別對(duì)每段進(jìn)行莖葉分離,將植株分為上部葉片、上部莖稈、中部葉片、中部莖稈、下部葉片、下部莖稈6個(gè)部分;分別對(duì)6部分進(jìn)行沖洗、干燥(55 ℃恒溫干燥箱中完全干燥)、粉碎、過篩(80目)得6個(gè)樣品,自封袋內(nèi)避光保存。
1.2.1.2 不同粒度的苜蓿粉 苜蓿粉碎后用邊長(zhǎng)分別為0.25、0.20、0.16、0.125、0.08、0.063 mm的編織方孔篩分級(jí),得G1(粒度在0.2~0.25 mm)、G2(粒度在0.16~0.2 mm)、G3(粒度在0.125~0.16 mm)、G4(粒度在0.08~0.125 mm)、G5(粒度在0.063~0.08 mm)5個(gè)樣品,自封袋內(nèi)避光保存。
1.2.2 基本成分的測(cè)定 水分參照GB 5009.3-2016直接干燥法[12]進(jìn)行測(cè)定;蛋白質(zhì)參照GB 5009.5-2016凱氏定氮法[13]進(jìn)行測(cè)定;灰分參照GB 5009.4-2016灼燒法[14]進(jìn)行測(cè)定;脂肪參照GB 5009.6-2016索氏抽提法[15]進(jìn)行測(cè)定;維生素C參照GB 5009.86-2016滴定法[16]進(jìn)行測(cè)定。
1.2.3 活性成分的測(cè)定 膳食纖維參照GB 5009.88-2014酶重量法[17]進(jìn)行測(cè)定;多糖參照SN 4260-2015苯酚-硫酸法[18]進(jìn)行測(cè)定;總黃酮參照DB 43/T476-2009進(jìn)行測(cè)定[19];總酚參照Blagoj的方法[20]進(jìn)行測(cè)定。
1.2.4 功能性質(zhì)指標(biāo)的測(cè)定
1.2.4.1 持水力的測(cè)定 稱取苜蓿粉0.5 g于15 mL離心管,加10 mL去離子水,漩渦振蕩5 min,37 ℃恒溫靜置4 h,4000 r/min離心15 min,棄其上清液,稱重[21]。持水力的公式如式(1)所示:
式(1)
式中:m-稱取苜蓿粉的質(zhì)量,g;m1-離心管的質(zhì)量,g;m2-離心后的總質(zhì)量,g。
1.2.4.2 持油力的測(cè)定 稱取苜蓿粉0.5 g于15 mL離心管,加4 g植物油,渦旋振蕩5 min,37 ℃恒溫靜置4 h,4000 r/min離心15 min,棄其上層油液,稱重[22]。持油力的公式如式(2)所示:
式(2)
式中:m-稱取苜蓿粉的質(zhì)量,g;m1-離心管的質(zhì)量,g;m2-離心后的總質(zhì)量,g。
1.2.4.3 膨脹力的測(cè)定 稱取0.5 g苜蓿粉于10 mL量筒,記錄自然堆積時(shí)的體積,加水?dāng)嚢枋狗勰┩耆珴駶?rùn),沖洗玻璃棒加水至10 mL刻度線,室溫環(huán)境中密封保存18 h,記錄膨脹后體積[23-24]。膨脹力的公式如式(3)所示:
表1 苜蓿不同部位莖葉的基本成分Table 1 Basic compositions of stems and leaves in different parts of alfalfa
注:同一行數(shù)字肩上的小寫字母不同表示不同部位苜蓿粉的同一指標(biāo)比較差異顯著(P<0.05)。
式(3)
式中:m-稱取苜蓿粉的質(zhì)量,g;v0-自然堆積時(shí)的體積,mL;v1-樣品膨脹后的體積,mL。
1.2.4.4 對(duì)亞硝酸鈉的吸附能力的測(cè)定 亞硝酸鈉用分光光度法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線、進(jìn)行測(cè)定[25]。稱取0.1 g苜蓿粉于離心管,加10 mL 5.0 μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,調(diào)節(jié)溶液pH至7,于37 ℃恒溫振蕩器中振蕩2 h,4000 r/min離心20 min,取1 mL上清液,按上述方法測(cè)其含量[26]。改變?nèi)芤簆H至2,其他條件不變,重復(fù)實(shí)驗(yàn)。對(duì)亞硝酸鈉吸附能力的公式如式(4)所示:
式(4)
式中:c0-吸附前亞硝酸鈉的濃度,(μg/mL);c1-吸附后亞硝酸鈉的濃度,(μg/mL);v-所加亞硝酸鈉的體積,mL;m-稱取苜蓿粉的質(zhì)量,g。
1.2.4.5 對(duì)膽固醇的吸附能力的測(cè)定 參照陸紅佳等[27]的方法,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。蛋黃液的制備:取新鮮雞蛋一個(gè),蛋清分離后,蛋黃中加500 mL去離子水充分打成乳液,取1 mL樣液,按上述方法測(cè)其膽固醇含量。
吸附能力的測(cè)定:稱取0.2 g苜蓿粉于15 mL離心管,加10 mL上述蛋黃液,調(diào)節(jié)溶液pH至7,充分振蕩,于37 ℃恒溫振蕩器中振蕩2 h,4000 r/min離心20 min,取1 mL上清液,按上述方法測(cè)其含量。改變?nèi)芤簆H至2,其他條件不變,重復(fù)實(shí)驗(yàn)。對(duì)膽固醇吸附能力的公式如式(5)所示:
式(5)
式中:m0-所加蛋黃液中膽固醇的總質(zhì)量,mg;m1-離心后上清液中膽固醇的總質(zhì)量,mg;m-稱取苜蓿粉的質(zhì)量,g。
所有的結(jié)果平行測(cè)定3次,Excel 2010進(jìn)行數(shù)據(jù)整理,SAS 9.1進(jìn)行Duncan’s差異性分析(P<0.05),Origin 9.0繪制柱狀圖。
2.1.1 苜蓿不同部位莖葉基本成分的測(cè)定結(jié)果 按照1.2.2的方法測(cè)定苜蓿不同部位莖葉中水分、灰分、脂肪、蛋白質(zhì)、維生素C的含量,結(jié)果見表1。
苜蓿葉片中蛋白質(zhì)、灰分、脂肪、維生素C的含量均高于莖稈,且下部、中部、上部的含量依次升高。苜蓿上部葉片的蛋白質(zhì)含量是28.62%,比下部莖稈高16.33%。苜蓿上部葉片的脂肪含量是6.23%,具有相對(duì)較好的口感。苜蓿上部葉片的水分(鮮樣)、灰分、維生素C含量分別為81.03%、11.35%、0.949 mg/g。這是由于上部葉片光合作用強(qiáng)、生命活動(dòng)活躍、代謝旺盛[28]。相比較而言,苜蓿上部葉片具有更高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
2.1.2 粉碎粒度對(duì)苜蓿葉中蛋白質(zhì)溶出量的影響 蛋白質(zhì)是苜蓿的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之一,通過2.1.1測(cè)定結(jié)果可知,上部葉片的含量最高。因此,對(duì)不同粉碎粒度的上部葉片中蛋白質(zhì)的溶出量進(jìn)行測(cè)定與分析,結(jié)果見圖1。
圖1 不同粉碎粒度苜蓿葉蛋白質(zhì)的溶出量Fig.1 Dissolution of protein from alfalfa leaves with different crushing particle size注:不同小寫字母表示同一指標(biāo)各組間 數(shù)據(jù)差異顯著(P<0.05),圖2~圖6同。
隨著粉碎粒度的減小,苜蓿上部葉片中蛋白質(zhì)的溶出量逐漸增加。當(dāng)苜蓿葉粉碎粒度由0.2~0.25 mm(G1)減小到0.063~0.08 mm(G5)時(shí),蛋白質(zhì)的溶出量由27.98%增加到32.87%。苜蓿葉蛋白質(zhì)的溶出量增加,這是因?yàn)檐俎H~粉碎粒度減小,組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞壁表面結(jié)構(gòu)破壞程度增加,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)更容易溶出[29]。因此,推測(cè)減小苜蓿葉的粉碎粒度,或可提高苜蓿葉蛋白的消化率。
2.2.1 苜蓿不同部位莖葉活性成分的測(cè)定結(jié)果 按照1.2.3的方法測(cè)定苜蓿不同部位莖葉中膳食纖維、多糖、多酚、總黃酮的含量,結(jié)果見表2。
表2 苜蓿不同部位莖葉的活性成分Table 2 Active constituents from stems and leaves of different parts of alfalfa
注:同一行數(shù)字肩上的小寫字母不同表示不同部位苜蓿粉的同一指標(biāo)比較差異顯著(P<0.05)。
苜蓿葉中多糖、多酚、總黃酮的含量均高于莖稈,且下部、中部、上部的含量依次升高。上部葉片中多糖、多酚、總黃酮的含量為20.94、12.45、6.47 mg/g,分別是下部莖稈含量的1.95倍、4.00倍、3.99倍。苜蓿葉片的可溶性膳食纖維含量顯著高于莖稈,且下部、中部、上部的含量依次升高。上部葉片中可溶性膳食纖維含量高達(dá)12.25%,可提供優(yōu)質(zhì)的膳食纖維。莖稈中總膳食纖維的含量顯著(P<0.05)高于葉片,與豆渣微粉的膳食纖維含量相近[30]。
2.2.2 粉碎粒度對(duì)苜蓿葉中活性成分溶出量的影響 通過2.2.1的測(cè)定結(jié)果可知,上部葉片中多糖、多酚、總黃酮的含量最高。對(duì)不同粉碎粒度的上部葉片中多糖、多酚、總黃酮的溶出量進(jìn)行測(cè)定與分析,結(jié)果見圖2。
表3 苜蓿不同部位莖葉的功能性質(zhì)Table 3 Functional properties of stem and leaf in different parts of alfalfa
注:同一行數(shù)字肩上的小寫字母不同表示不同部位苜蓿粉的同一指標(biāo)比較差異顯著(P<0.05)。
圖2 不同粉碎粒度苜蓿葉活性成分的溶出量Fig.2 Dissolution of active ingredientfrom from alfalfa leaves with different crushing particle size
隨著苜蓿葉粉碎粒度由0.2~0.25 mm(G1)減小到0.063~0.08 mm(G5)時(shí),多糖的溶出量由20.72 mg/g增加到22.97 mg/g;多酚的溶出量由12.31 mg/g增加到13.86 mg/g;總黃酮的溶出量由6.42 mg/g增加到7.17 mg/g。粉碎粒度影響了苜蓿葉中活性成分的溶出量,減小粉碎粒度,可提高苜蓿葉中活性成分的溶出量。這是由于苜蓿葉粉碎粒度減小,比表面積增大,表面結(jié)構(gòu)破壞程度增加,接觸面積增大,提高了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的溶出量[29]。
苜蓿中大量存在的膳食纖維,難以被人體消化吸收。人體食用膳食纖維主要是因?yàn)槠渚哂刑厥獾墓δ苄再|(zhì)。因此,對(duì)苜蓿莖葉的功能性質(zhì)進(jìn)行研究。
2.3.1 苜蓿不同部位莖葉功能性質(zhì)指標(biāo)的測(cè)定 按照1.2.4的方法測(cè)定苜蓿不同部位莖葉以下功能特性指標(biāo),結(jié)果如下表3。
苜蓿莖稈的持油力、持水力高于葉片,這是由于莖稈中含有大量的膳食纖維,對(duì)水和油脂有較好的吸附作用。苜蓿莖稈下部、中部、上部的持水力依次增加,持油力依次降低。苜蓿葉的膨脹力高于莖稈,上部葉片的膨脹力最高為3.85 mL/g。苜蓿葉對(duì)亞硝酸鈉和膽固醇的吸附能力高于莖稈,且下部、中部、上部的吸附能力依次增強(qiáng),這是由于葉片中可溶性膳食纖維含量依次增加[31]。苜蓿葉對(duì)亞硝酸鈉和膽固醇的吸附能力跟其所在環(huán)境的酸堿度有關(guān)。苜蓿葉對(duì)亞硝酸鈉在pH=2環(huán)境中的吸附能力是在pH=7環(huán)境中的4~5倍,這是由于酸性條件中,含羧基化合物會(huì)解離,提高了吸附能力[32]。苜蓿葉對(duì)膽固醇在pH=7環(huán)境中的吸附能力是在pH=2環(huán)境中的3~4倍。苜蓿對(duì)有害物質(zhì)進(jìn)行吸附,這可能是由于具有粘性的膳食纖維對(duì)有害物質(zhì)進(jìn)行吸附,內(nèi)容物體積增加,減少了與腸道的接觸,有利于腸道健康[33]。
2.3.2 粉碎粒度對(duì)苜蓿葉功能性質(zhì)的影響 通過2.3.1的測(cè)定結(jié)果可知,苜蓿葉有較好的膨脹力、對(duì)亞硝酸鈉和膽固醇的吸附能力,且上部葉片的功能性質(zhì)最佳。因此,對(duì)不同粉碎粒度的上部葉片的膨脹力、對(duì)亞硝酸鈉的吸附能力、對(duì)膽固醇的吸附能力進(jìn)行測(cè)定與分析,結(jié)果見圖3~圖5。
2.3.2.1 膨脹力 隨著粉碎粒度由0.2~0.25 mm(G1)減小到0.063~0.08 mm(G5)時(shí),苜蓿葉的膨脹力先增大后減小,當(dāng)粉碎粒度為0.125~0.16 mm(G3)時(shí)達(dá)到最大,為4.40 mL/g。這是由于隨著苜蓿葉粉碎粒度減小,表面親水基團(tuán)數(shù)量增加,使得膨脹力增大。但粉碎粒度過小時(shí),苜蓿葉粉表面的空間結(jié)構(gòu)被破壞,對(duì)水分子的束縛力下降,導(dǎo)致膨脹力下降[34]。
圖3 不同粉碎粒度苜蓿葉的膨脹力Fig.3 Swelling capacity of alfalfa leaves with different crushing particle size
2.3.2.2 對(duì)亞硝酸鈉的吸附能力 隨著粉碎粒度由0.2~0.25 mm(G1)減小到0.063~0.08 mm(G5)時(shí),在pH=2環(huán)境中,苜蓿葉對(duì)亞硝酸鈉的吸附能力由437.91 μg/g逐漸增加到501.51 μg/g。在pH=7環(huán)境中,苜蓿葉對(duì)膽固醇的吸附能力由106.43 μg/g逐漸增加到108.02 μg/g,差異顯著(P<0.05)。這是由于隨著粉碎粒度的減小,一方面比表面積增大,更多有效基團(tuán)暴露出來[35];另一方面粉碎破壞了膳食纖維原有的結(jié)構(gòu),部分不溶性膳食纖維鏈狀結(jié)構(gòu)斷裂轉(zhuǎn)化為可溶性膳食纖維,最終使得吸附能力增加[36]。
圖4 不同粉碎粒度苜蓿葉對(duì)亞硝酸鈉的吸附能力Fig.4 Adsorption of alfalfa leaves on sodium nitrite with different crushing particle size
2.3.2.3 對(duì)膽固醇的吸附能力 隨著粉碎粒度由0.2~0.25 mm(G1)減小到0.063~0.08 mm(G5)時(shí),在pH=2環(huán)境中,苜蓿葉對(duì)膽固醇的吸附能力由2.45 mg/g逐漸增加到6.01 mg/g。在pH=7環(huán)境中,苜蓿葉對(duì)膽固醇的吸附能力由7.65 mg/g逐漸增加到9.66 mg/g。這可能是由于粉碎粒度減小,表面有效基團(tuán)數(shù)量增加,苜蓿粉的粘性增加,使得對(duì)膽固醇的吸附能力增強(qiáng)[33]。
圖5 不同粉碎粒度苜蓿葉對(duì)膽固醇的吸附能力Fig.5 Adsorption capacity of alfalfa leaves on cholesterol granularity with different crushing particle size
2.3.3 粉碎粒度對(duì)苜蓿莖稈功能性質(zhì)的影響 通過2.3.1的測(cè)定結(jié)果可知,苜蓿莖稈具有較好的持油力、持水力,且上部莖稈有較好的持水力,下部莖稈有較好的持油力。綜合莖葉分離能耗的問題,對(duì)不同粉碎粒度上部莖稈的持水力、持油力進(jìn)行測(cè)定與分析,結(jié)果見圖6。
圖6 不同粉碎粒度苜蓿莖稈的功能性質(zhì)Fig.6 Functional properties of alfalfa stems with different crushing particle size
隨著粉碎粒度由0.2~0.25 mm(G1)減小到0.063~0.08 mm(G5)時(shí),苜蓿莖稈的持油力由4.86 g/g減小到3.44 g/g;持水力先增大后減小,當(dāng)粉碎粒度為0.125~0.16 mm(G3)時(shí)達(dá)到最大,為6.56 mL/g。這是由于粉碎粒度減小,表面細(xì)胞組織破壞嚴(yán)重,表面親水基團(tuán)數(shù)量增加,導(dǎo)致持水力增大,但粉碎粒度過小時(shí),苜蓿粉空間結(jié)構(gòu)被破壞,對(duì)水分子的束縛力下降,使得持水力下降[35]。隨著粉碎粒度減小,苜蓿粉表面的微孔直徑在逐漸減小,進(jìn)入微孔的油脂分子數(shù)量減小,使得持油力下降。
苜蓿的基本成分、活性成分含量和功能性質(zhì)客觀上反映其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。通過對(duì)苜蓿不同部位基本成分、活性成分、功能性質(zhì)的比較,客觀反映苜蓿不同部位的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。結(jié)果表明,苜蓿上部葉片的蛋白質(zhì)、多糖、多酚、總黃酮等成分含量高,具有較好的膨脹力和吸附特性;上部莖稈具有較好的持水力和持油力。因此,苜蓿的莖葉可分別用于開發(fā)不同的功能食品,苜蓿莖稈可用于開發(fā)促進(jìn)腸道蠕動(dòng)、預(yù)防肥胖的食品。苜蓿葉可用于來開發(fā)強(qiáng)化營(yíng)養(yǎng)、預(yù)防癌癥、吸附有害物質(zhì)的食品,達(dá)到充分利用苜蓿資源的目的。
不同粉碎粒度苜蓿莖葉營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的溶出量及功能性質(zhì),客觀上反映粉碎工藝對(duì)苜蓿營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的影響。針對(duì)苜蓿莖葉營(yíng)養(yǎng)成分和功能性質(zhì)的不同,對(duì)苜蓿莖葉進(jìn)行不同程度地粉碎,測(cè)定與分析其主要營(yíng)養(yǎng)成分溶出量及功能性質(zhì)指標(biāo)。結(jié)果表明,減小苜蓿葉的粉碎粒度可提高蛋白質(zhì)、多糖、多酚、總黃酮的溶出量,也可提高苜蓿葉對(duì)膽固醇、亞硝酸鈉的吸附能力。當(dāng)粉碎粒度為0.125~0.16 mm(G3)時(shí),苜蓿葉的膨脹力,苜蓿莖稈的持水力、持油力達(dá)到最佳。將苜蓿莖葉開發(fā)成不同功能食品的原料,針對(duì)不同的功能食品進(jìn)行不同程度地粉碎,使其具有更高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
通過對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析可推測(cè),對(duì)膽固醇、亞硝酸鈉的吸附機(jī)理與持水力、持油力、膨脹力的機(jī)理不同。對(duì)膽固醇和亞硝酸鈉的吸附能力可能是與苜蓿粉表面的基團(tuán)數(shù)量相關(guān),持水力、持油力、膨脹力可能跟苜蓿粉的空間結(jié)構(gòu)和表面的基團(tuán)數(shù)量相關(guān),具體原因需要進(jìn)一步驗(yàn)證。本文僅對(duì)多糖、多酚、總黃酮的含量進(jìn)行了測(cè)定,未對(duì)其抗氧化指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定,日后可對(duì)這方面進(jìn)一步研究。