觀賞魚(yú)腐皮病的診斷與治療

趙振宇，肖 嘯

（云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 650201）

隨著人們生活水平的提高， 觀賞魚(yú)越來(lái)越受到大眾的歡迎，增加了日常生活的樂(lè)趣，豐富了人們的愛(ài)好。 我國(guó)作為較早養(yǎng)殖觀賞魚(yú)的國(guó)家，在觀賞魚(yú)養(yǎng)殖方面取得了一定的發(fā)展。 但在國(guó)際市場(chǎng)的競(jìng)爭(zhēng)下，國(guó)內(nèi)觀賞魚(yú)養(yǎng)殖缺乏行業(yè)組織、養(yǎng)殖技術(shù)水平落后、 疾病防治水平不高等多種問(wèn)題， 從而限制了行業(yè)的發(fā)展。 腐皮病由細(xì)菌感染引起, 不同地區(qū)和四季都有不同程度的流行，近年來(lái)，本病已是常見(jiàn)多發(fā)病，對(duì)魚(yú)的危害較為嚴(yán)重。 魚(yú)感染之后，往往會(huì)較長(zhǎng)時(shí)間不愈，嚴(yán)重影響生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖。 此病的感染率可高達(dá)80%[1]。 但一般以夏、秋較易發(fā)病，28℃～32℃為其流行高峰期。

1 發(fā)病經(jīng)過(guò)

2018 年5 月13 日，某風(fēng)景區(qū)內(nèi)養(yǎng)殖的群體觀賞魚(yú)中，出現(xiàn)了發(fā)病情況， 臨床上主要表現(xiàn)為體表皮膚異常病變， 不斷地腐爛，出現(xiàn)潰瘍病灶，并出現(xiàn)零星死亡。 該風(fēng)景區(qū)和水產(chǎn)部門(mén)聯(lián)系，進(jìn)行疾病診斷。 筆者后來(lái)得知，該批觀賞魚(yú)已經(jīng)出現(xiàn)了較長(zhǎng)時(shí)間的發(fā)病情況，初期臨床癥狀較輕，沒(méi)有引起重視，隨后病情快速傳播蔓延，以至于有1/3 左右的魚(yú)群出現(xiàn)了發(fā)病。 通過(guò)對(duì)水體進(jìn)一步檢查，發(fā)現(xiàn)水質(zhì)普遍較差，水體當(dāng)中的包含氣溶素、溶血素、細(xì)胞毒素、腸毒素、HEC 毒素等含量嚴(yán)重超標(biāo)，各種毒素存在，以及在各種致病源的相互作用之下，加重了疾病的傳播蔓延。

2 臨床癥狀

發(fā)病初期在患病魚(yú)的皮膚和下層肌肉出現(xiàn)紅斑，隨著病情進(jìn)一步加重發(fā)展，魚(yú)的鱗片脫落，肌肉腐爛，病灶的直徑越來(lái)越大，深度加深，形成潰瘍，嚴(yán)重的會(huì)露出骨骼或內(nèi)臟。 病灶呈圓形或橢圓形，周緣充血發(fā)紅，狀似打上了一個(gè)紅色印記，因此又稱(chēng)為打印病[2]。 病情嚴(yán)重的患病魚(yú)身體消瘦，游動(dòng)緩慢，食欲減退，終至衰竭而死。 通過(guò)對(duì)發(fā)病觀賞魚(yú)進(jìn)行目測(cè)觀察可以發(fā)現(xiàn)患病魚(yú)的體色異常，發(fā)紅充血、出血、有紅點(diǎn)斑和黑點(diǎn)斑。 體表異常，掉鱗、腐爛、潰瘍，鰭缺損，無(wú)囊腫和包囊，有零星死亡。 眼睛正常，無(wú)混濁和失明?？谇粺o(wú)潰爛和異常。鰓正常，無(wú)褪色和腐爛[3]。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 細(xì)菌分離與純化

選取患病魚(yú)具有典型癥狀的病灶組織， 體表經(jīng)無(wú)菌水洗滌后， 用手術(shù)刀片將表皮污染物輕輕剝離再用無(wú)菌棉簽粘取皮膚分泌物，接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，“Z”字形三區(qū)劃線，放入37℃的恒溫箱培養(yǎng)24h。 病原菌在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，形成表面濕潤(rùn)、邊緣整齊、光滑、半透明、灰白色至淡黃色的2～3mm 圓形菌落，在綿羊血瓊脂平板上培養(yǎng)出來(lái)的半透明、光滑的菌群，溶血很明顯。 選取形狀、色澤可疑的菌落挑出1～3 個(gè)單菌落進(jìn)行肉湯擴(kuò)菌，之后接種于血平板，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。 將血瓊脂上有溶血情況的細(xì)菌進(jìn)行革蘭氏染色，然后鏡檢，觀察細(xì)菌顏色和形態(tài)。 在鏡檢中，可見(jiàn)為短桿，呈單一或兩兩相連的革蘭氏陰性菌.

3.2 細(xì)菌生化試驗(yàn)

微生物在代謝過(guò)程中， 由于各自產(chǎn)生的酶都具有不同的特性，其分解與合成代謝產(chǎn)物都不相同。 所以利用這些代謝產(chǎn)物不同的生化性質(zhì)進(jìn)行生化試驗(yàn)， 找出試驗(yàn)所需的生化管用小砂輪劃生化管的上部，然后用手掰開(kāi)，將分離純化的菌液用接種環(huán)分別接種到各個(gè)生化管里，塞上無(wú)菌棉球，放恒溫箱37℃培養(yǎng)48h。

深化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該種致病菌能夠發(fā)酵水楊苷、 葡萄糖、 七葉苷、半乳糖，VP 試驗(yàn)陰性。結(jié)合細(xì)菌分離培養(yǎng)和生化實(shí)驗(yàn)，可以判定致病原因嗜水氣單胞菌。

3.3 藥敏試驗(yàn)

取上述純培養(yǎng)物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。在無(wú)菌操作臺(tái)上，在酒精燈火下，用移液槍抽取適量培養(yǎng)物，將細(xì)菌均勻涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，將鑷子在酒精燈火焰滅菌后略停，取藥敏片有規(guī)律的貼到平皿培養(yǎng)基表面，分別進(jìn)行了青霉素、鏈霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、新霉素、強(qiáng)力霉素、頭孢哌酮、頭孢曲松、卡那霉素、丁胺卡那霉素、 頭孢氨芐等抗生素藥敏試驗(yàn)。 之后將平皿培養(yǎng)基置于37℃的溫箱中培養(yǎng)24h 后，分別測(cè)定抑菌圈的直徑。 藥敏實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該種致病菌對(duì)頭孢哌酮、頭孢曲松、環(huán)丙沙星高敏，對(duì)丁胺卡那、頭孢氨芐中敏，對(duì)青霉素、鏈霉素、慶大霉素、新霉素、卡那霉素、強(qiáng)力霉素不敏感。

4 防治

嗜水氣單胞菌感染引起的觀賞魚(yú)腐皮病應(yīng)該結(jié)合藥品實(shí)驗(yàn)，選擇高敏抗生素進(jìn)行對(duì)癥治療。 具體治療方案如下：選用頭孢曲松20～30mg 溶于10kg 水中，將魚(yú)浸泡15～20min，每天一次，連續(xù)一周。 在藥物控制病情后，對(duì)水質(zhì)進(jìn)行調(diào)節(jié)，選用經(jīng)濟(jì)的生石灰15～25g/m3全池潑灑，15d 后進(jìn)行第二次潑灑。 綜合以上治療措施，觀賞魚(yú)感染嗜水氣單胞菌的病情得以控制。 在今后防治過(guò)程中，應(yīng)該嚴(yán)格控制水體質(zhì)量，避免水質(zhì)受到污染，每間隔3～5d 更換一次水，每次水流動(dòng)3～5h，防止魚(yú)群之間相互撕咬。 同時(shí)還應(yīng)該密切觀察整個(gè)魚(yú)群的進(jìn)食和生長(zhǎng)情況，一旦發(fā)現(xiàn)患病魚(yú)，應(yīng)該將其挑出進(jìn)行單獨(dú)隔離養(yǎng)殖，并向整個(gè)魚(yú)池當(dāng)中潑灑15～20倍液的大蒜浸出液?；蛘邼姙?00 倍液的碳酸氫鈉水溶液?；蛘呤褂?0 倍液的EM 菌水溶液，每間隔3～5d 潑灑一次，連續(xù)使用2～3 次，對(duì)防控該種疾病傳播流行有很大幫助。

5 討論

最近幾年， 關(guān)于觀賞魚(yú)腐皮病的病原菌都有很多的研究，已經(jīng)分離到的病原菌包括溫和氣單胞菌、豚鼠產(chǎn)氣單胞菌、維羅納氣單胞菌和無(wú)色桿菌等多種細(xì)菌。 本實(shí)驗(yàn)從患腐皮病的觀賞魚(yú)個(gè)體分離到的病原體， 接種在綿羊血平板上培養(yǎng)24h 出現(xiàn)溶血，進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)室檢查確定，該病是由嗜水氣單胞菌所引起的[4]。

嗜水氣單胞菌不僅會(huì)感染魚(yú)也會(huì)感染其他動(dòng)物和人，是一種典型人-獸-魚(yú)共患病病原菌，因此會(huì)給人類(lèi)的健康帶來(lái)威脅。細(xì)菌獲得耐藥性是因?yàn)槭人畾鈫伟鸀榱诉m應(yīng)外界環(huán)境的變化和抗生素的普遍使用，使耐藥性越來(lái)越嚴(yán)重[5]。 細(xì)菌的天然耐藥性， 是因?yàn)橘|(zhì)粒介導(dǎo)即獲得外源耐藥基因和染色體介導(dǎo)即染色體基因選擇性突變導(dǎo)致， 或著是因?yàn)槎吖餐閷?dǎo)產(chǎn)生對(duì)抗生素的耐藥性。 表明嗜水氣單胞菌對(duì)很多抗生素存在多重耐藥性，并且對(duì)作用性質(zhì)相同的或結(jié)構(gòu)近似的同類(lèi)抗生素具有交叉耐藥性。