抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜增生和滑膜血管新生中藥的研究進(jìn)展*

★ 趙艷紅 金晨 周彩虹 程玉瑤 陳康 張凌（.江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 南昌330004；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)現(xiàn)代中藥制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南昌 330004）

類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以累及周?chē)P(guān)節(jié)為主的多系統(tǒng)性炎癥性免疫疾病，主要侵犯手足小關(guān)節(jié)，多呈對(duì)稱(chēng)發(fā)作，臨床表現(xiàn)為受累關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、變形、功能下降，病變呈持續(xù)、反復(fù)發(fā)作過(guò)程，晚期可關(guān)節(jié)強(qiáng)直或畸形，功能?chē)?yán)重受損。該病主要病理變化為關(guān)節(jié)滑膜炎癥、積液、血管翳形成、軟骨及骨組織受到侵蝕，造成關(guān)節(jié)進(jìn)行性破壞。發(fā)病原因不明，可能與感染、免疫、遺傳、雌激素水平、勞累和環(huán)境等因素有關(guān)。中醫(yī)認(rèn)為該病屬于“痹證”“歷節(jié)”“尪痹”等范疇，總屬邪實(shí)正虛，分為活動(dòng)期和緩解期，活動(dòng)期多以邪實(shí)為主，緩解期或中晚期多屬正虛邪戀或虛實(shí)夾雜，正虛多為肝腎虧虛、氣血不足，邪實(shí)則多見(jiàn)痰濁、瘀血等［1-3］。據(jù)報(bào)道，RA的患病率隨著年齡增長(zhǎng)而逐漸增加，65歲以上人群患病率最高，女性略高于男性，成年人的患病率為0.2%～0.8%，其致殘率較高。RA患者生存期普遍縮短3～18年，并且每經(jīng)過(guò)一個(gè)10年的跨度，死亡率總體危險(xiǎn)性就會(huì)增加1.3～2倍［4］。RA的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，研究表明滑膜增生和滑膜血管新生是RA發(fā)生、發(fā)展形成血管翳及破壞關(guān)節(jié)的基礎(chǔ)，臨床研究發(fā)現(xiàn)，RA關(guān)節(jié)內(nèi)新生血管增生的程度與患者的病情、滑膜增生及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)的程度成正相關(guān)，通過(guò)抑制血管生成的藥物可以緩解RA的病情［5-6］。隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，以細(xì)胞因子為作用靶點(diǎn)的分子信號(hào)通路及細(xì)胞層面對(duì)其發(fā)病機(jī)制探討成為研究熱點(diǎn)，而中藥（含復(fù)方及其單體成分）在調(diào)控這些細(xì)胞因子方面亦取得了一些進(jìn)展［7-9］。筆者根據(jù)近年來(lái)文獻(xiàn)報(bào)道，現(xiàn)就抑制滑膜增生和滑膜血管新生中藥及作用通路綜述如下，為從中藥中篩選治療RA藥物提供一定的依據(jù)。

1 中藥復(fù)方

1.1 風(fēng)濕祛痛膠囊 劉春芳等［10］取正常SD大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)，經(jīng)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）體外誘導(dǎo)，用風(fēng)濕祛痛膠囊（二妙散及蜂房、烏梢蛇、金錢(qián)白花蛇、蘄蛇、土鱉蟲(chóng)、全蝎、蜈蚣、地龍等多味蟲(chóng)蛇類(lèi)藥組成）干預(yù)，觀察血管環(huán)芽出的新生血管數(shù)目、長(zhǎng)度和面積；同時(shí)，采用SD大鼠建立Ⅱ型膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（CIA）模型，以甲氨蝶呤為陽(yáng)性對(duì)照，風(fēng)濕祛痛膠囊作用觀察炎癥關(guān)節(jié)滑膜中血管形態(tài)和分析血管密度，免疫組化檢測(cè)滑膜中血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物血小板-內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子（CD31）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和VEGF受體2（VEGFR2）的表達(dá)，免疫熒光雙染觀察滑膜中CD31和α平滑肌肌動(dòng)蛋白（αSMA）的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β信號(hào)通路（TGF-β），血小板衍生因子（PDGF）和VEGFR2的含量。結(jié)果該膠囊可顯著降低 VEGF 誘導(dǎo)升高的血管環(huán)芽出的血管數(shù)量、長(zhǎng)度和面積，使CIA模型組大鼠炎癥血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物CD31表達(dá)明顯降低，TGF-β、PDGF等相關(guān)因子亦顯著降低，表明該膠囊具有抑制CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織血管新生以及離體血管環(huán)生成的作用，并揭示該作用可能與血管新生調(diào)控因子的含量有關(guān)。

1.2 清熱活血方 劉鵬霄等［11］建立CIA大鼠模型，用清熱活血方（土茯苓、金銀花、蒼術(shù)、黃柏、革薜、丹參、莪術(shù)等組成）干預(yù)，從關(guān)節(jié)腫脹度、關(guān)節(jié)病理切片、滑膜病理切片、微血管密度（MVD） 、血清中致炎因子干擾素（INF）-γ及血管疾病相關(guān)指標(biāo)組織型纖溶酶原激活因子（tPA）和內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）的影響各指標(biāo)，探討抑制CIA 大鼠血管新生的機(jī)制。結(jié)果表明該方能明顯緩解CIA大鼠關(guān)節(jié)腫脹，抑制關(guān)節(jié)內(nèi)滑膜的增生，延緩關(guān)節(jié)軟骨與骨的破壞?；げ±砬衅@示，滑膜組織內(nèi)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)減輕，且微血管密度降低；大鼠血清中INF-γ，tPA，eNOS的表達(dá)大幅度減少，表明該方可以減少滑膜增生，抑制促血管生成因子的表達(dá)，從而減少新生血管的數(shù)量，控制類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病程。

1.3 溫經(jīng)活絡(luò)方 Wu X等［12］對(duì)治療風(fēng)寒濕痹型RA的溫經(jīng)活絡(luò)方（決明子、肉桂、芍藥、防風(fēng)和鐵線蓮組成）進(jìn)行研究，通過(guò)CIA小鼠模型，證實(shí)該方可以降低致炎細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17）的表達(dá)，明顯減輕CIA的進(jìn)展，減輕踝關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)炎評(píng)分、病理改變及骨質(zhì)破壞。實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-timeQPCR）檢測(cè)結(jié)果表明，可不同程度上下調(diào)JAK2mRNA、STAT3mRNA、IL-17A mRNA和RORγt mRNA的表達(dá)，并顯著增加Foxp3mRNA、OPGmRNA和SOCS3mRNA的表達(dá)。能抑制JAK2/STAT3的表達(dá)，并能調(diào)節(jié)JAK2/STAT3通路，提高骨保護(hù)蛋白和Foxp3 mRNA水平，降低脾細(xì)胞中Th17細(xì)胞比例。

1.4 三妙方 Zhu F等［13］對(duì)三妙方（北蒼術(shù)，黃柏，牛膝組成）進(jìn)行研究，建立了由草酸鉀與冷水浴聯(lián)合誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)產(chǎn)生的RA動(dòng)物模型，同時(shí)結(jié)合軟骨細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)，證實(shí)對(duì)IL-1β和TNF-α均有抑制作用。此外，該方能夠降低基質(zhì)金屬蛋白酶-3（MMPs）-3和ADAMTS-4的表達(dá)，這兩種酶被認(rèn)為是軟骨基質(zhì)降解的關(guān)鍵酶，同時(shí)減少組織金屬蛋白酶抑制劑（TIMPs）-1和（TIMPs）-3在關(guān)節(jié)和軟骨細(xì)胞中的表達(dá)。

1.5 芍甘附子湯加味 柳洋等［14］采用CIA大鼠模型，測(cè)定芍甘附子湯加味（黑順片、白芍、甘草、雞血藤、青風(fēng)藤、牛膝組成）各組大鼠足趾腫脹體積，進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）評(píng)分，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜組織的表達(dá)。結(jié)果大劑量治療組足趾腫脹體積有所降低、AI評(píng)分明顯降低；大、中劑量治療組HIF-1α和Ang-1表達(dá)均出現(xiàn)顯著降低，Ang-2表達(dá)呈降低趨勢(shì)。說(shuō)明該方可通過(guò)降低膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎中滑膜組織HIF-1α、Ang-1和Ang-2的表達(dá)，抑制滑膜血管新生，從而起到治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用。

1.6 清絡(luò)飲 范為民等［15］對(duì)國(guó)醫(yī)大師李濟(jì)仁基于“從絡(luò)、從瘀論治”理論創(chuàng)制的治療RA的方劑清絡(luò)飲（苦參、青風(fēng)藤、萆薢、黃柏組成）進(jìn)行研究，建立大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）模型，觀察其對(duì)血管新生相關(guān)的重要指標(biāo)白細(xì)胞介素-6（IL-6）、IL-10、VEGF、環(huán)氧化酶 -2（COX-2）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶（AKT）的影響，結(jié)果表明該方能夠改善大鼠血管新生COX-2、PI3K、AKT指標(biāo)，說(shuō)明該方治療作用可能與抑制PI3K/AKT通路有關(guān)。

1.7 麝香烏龍丸 麝香烏龍丸（SWP）起源于宋朝，為治療關(guān)節(jié)疼痛而制定的“原麝”由麝香、制川烏、地龍、全蝎，川烏、黑豆等19味藥組成。Zhang Z等［16］研究SWP對(duì)CIA小鼠模型關(guān)節(jié)病變有明顯改善，影像學(xué)評(píng)估證實(shí)SWP能保護(hù)骨組織免受CIA誘導(dǎo)的骨侵蝕，并增加骨密度。同時(shí)SWP降低小鼠血清TNF-α、IL-6、IFN-α水平，表明該方能有效減輕CIA小鼠關(guān)節(jié)腫脹，抑制滑膜組織增生，減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，延緩骨破壞。王志文等［17］研究SWP可以調(diào)控大鼠滑膜中VEGF/ES的平衡，抑制滑膜組織血管生成，改善AA大鼠的炎癥發(fā)生。熊衛(wèi)標(biāo)等［18］研究SWP證實(shí)其能有效緩解RA患者的主要癥狀，降低患者IL-18、FKN/CX3CL1、ESR、CRP的表達(dá)。

1.8 新風(fēng)膠囊 張曉軍等［19］觀察新風(fēng)膠囊（黃芪、薏仁、雷公藤、蜈蚣等組成）對(duì)AA大鼠滑膜PI3K/AKT/mTOR通路的影響，采用免疫組化法檢測(cè)滑膜微血管密度（MVD）表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)IL-6、IL-10、HIF-1α、VEGF-A 表達(dá)，免疫印跡法檢測(cè)PI3K、AKT1、p-AKT1、mTOR、ES蛋白在滑膜血管中表達(dá)，結(jié)果表明該膠囊通過(guò)調(diào)節(jié)PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路、HIF-1α、ES表達(dá)改善AA滑膜血管新生。

2 中藥單體成分

2.1 扁蒴藤素 扁蒴藤素為過(guò)山楓（Celastrus aculeatusMerr.）屬于衛(wèi)矛科（Celastraceae）南蛇藤屬植物的活性成分，對(duì)血管新生的抑制作用是通過(guò)抑制VEGF誘導(dǎo)HUVECs的VEGFR2以及下游PI3K-AKT-mTOR、ERK1/2、JUK和P38信號(hào)通路相關(guān)蛋白的磷酸化水平而實(shí)現(xiàn)的。它能通過(guò)誘導(dǎo)AA-FLS細(xì)胞周期的G0/G1期阻滯及誘導(dǎo)AA-FLS細(xì)胞凋亡，從而能抑制AA-FLS細(xì)胞增殖。同時(shí)還通過(guò)調(diào)控凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，促進(jìn)Pro-Caspase-3的剪切，増加促凋亡活性的Cleave-Caspase-3蛋白的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)誘導(dǎo)AAFLS凋亡，無(wú)論抑制AA-FLS細(xì)胞増殖和誘導(dǎo)AAFLS凋亡均呈劑量依賴(lài)性［20-21］。

2.2 人參皂苷代謝產(chǎn)物-K C-K是人參（Panax ginsengC. A. Mey）中人參皂苷在體內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物。Wang R等［22］采用CIA小鼠模型，給予C-K治療，結(jié)果表明，C-K可抑制巨噬細(xì)胞吞噬功能，降低M1的比例；C-K可降低CIA小鼠腹腔巨噬細(xì)胞β-arrestin2、G-αⅠ、TLR4和NF-κB的過(guò)度表達(dá)，增加G-αs的表達(dá)。此外，C-K通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞中的α-arrestin2，促進(jìn)TLR4-Gα的偶聯(lián)，抑制TLR4-G的βI偶聯(lián)，從而降低巨噬細(xì)胞M1與M2的比例，改善CIA小鼠的預(yù)后。通過(guò)激活糖皮質(zhì)激素受體（GRs）抑制β-arrestin2的表達(dá)而發(fā)揮抗炎作用。

2.3 京尼平苷酸 京尼平苷酸（GA）是梔子（Gardenia jasminoidesEllis）中的單體成分。金鑫等［23］通過(guò)Wistar大鼠AA模型，證實(shí)GA可抑制AA大鼠繼發(fā)性炎癥，降低血清TNF-α，IL-1β水平，體外可抑制AA大鼠滑膜細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，作用機(jī)制與其下調(diào)Bcl-2和上調(diào)Bax基因mRNA表達(dá)有關(guān)。

2.4 白花丹醌 白花丹醌是白花丹（Plumbago zeylanica L）中的單體成分。鐘毓娟等［24］采用大鼠CIA模型，原代培養(yǎng) CIA-FLS，MTT法檢測(cè)藥物對(duì) CIA-FLS 增殖的影響，結(jié)果顯示能抑制脂多糖誘導(dǎo)的CIA-FLS的增殖，并能通過(guò)下調(diào)TNF-α、IL-1β和MMP-3的表達(dá)而抑制脂多糖誘導(dǎo)CIA-FLS的炎癥反應(yīng)。

2.5 大黃素 大黃素是大黃（Rheum palmatumL.）中的成分。彭菲菲等［25］探討大黃素對(duì)體外培養(yǎng)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者FLS增殖及轉(zhuǎn)移的影響，結(jié)果不同濃度的大黃素對(duì)體外培養(yǎng)RA-FLS的轉(zhuǎn)移及增殖能力具有抑制作用，且具有一定的量效和時(shí)效關(guān)系。

2.6 奇壬醇 奇壬醇（Kirenol）是菊科植物豨薟（Siegesbeckia orientalisL）中的一種二萜類(lèi)成分。Lu Y等［26］通過(guò)建立CIA大鼠模型，運(yùn)用流式細(xì)胞儀、RT-PCR法、ELISA法體外檢測(cè)CII誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖。結(jié)果表明其能顯著抑制關(guān)節(jié)炎癥、軟骨和骨的破壞，還能上調(diào)Foxp3mRNA的表達(dá)，增加CD4+CD25+Foxp3+和IL4+CD4+T細(xì)胞的數(shù)量，降低INFγ+CD4+T細(xì)胞的數(shù)量；降低關(guān)節(jié)滑液中腫瘤壞死因子-α、IL-17A、IL-6和血清腫瘤壞死因子-α、IL-17A、INF-γ水平，升高血清IL-4、IL-10和TGFβ-1水平。此外，與CIA大鼠相比，其在體外具有抑制CII誘導(dǎo)脾細(xì)胞、PBMC和淋巴結(jié)細(xì)胞增殖的能力。

2.7 虎杖苷 虎杖苷為虎杖（Reynoutria japonicaHoutt.）的單體成分。曾家順等［27］通過(guò)AA大鼠模型研究虎杖苷的作用機(jī)制，結(jié)果表明其可顯著降低RA大鼠的關(guān)節(jié)炎評(píng)分和足爪腫脹評(píng)分，改善關(guān)節(jié)腔炎癥狀態(tài)，降低血清TNF-α、IL-1β水平及FLS中的Wnt4、GSK-3β、β-catenin m RNA和蛋白及Bcl-2m RNA的表達(dá)，并升高FLS中Bax、caspase3 m RNA的表達(dá)，說(shuō)明他可有效抑制RA大鼠滑膜增殖，促進(jìn)滑膜細(xì)胞凋亡，控制關(guān)節(jié)炎癥狀態(tài)，其機(jī)制可能與抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路的激活有關(guān)。

2.8 鴉膽子苦醇 鴉膽子苦醇為鴉膽子（Bruceajavanica）的單體成分。余璨［28］的研究表明，它可抑制RA-FLS的增殖、促進(jìn)RA-FLS的凋亡，并且抑制RA-FLS的遷移、侵襲和變形與運(yùn)動(dòng)能力，同時(shí)其通過(guò)上調(diào) Caspase-3、Caspase-8和Nrf2的表達(dá)，抑制 ERK 的磷酸化水平，下調(diào) CHI3L1、MMPs、N-WASP、肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白和整合素的表達(dá)，促進(jìn)RA-FLS的凋亡，從而抑制RA-FLS的增殖。

3 小結(jié)與展望

當(dāng)前對(duì)于RA的發(fā)病機(jī)制尚無(wú)確切的定論，各種基于實(shí)驗(yàn)研究的推測(cè)層出不窮，從抗RA研究論文數(shù)量來(lái)看，抗RA研究工作越來(lái)越受到重視，從研究成果來(lái)看，中醫(yī)藥防治RA的機(jī)制主要集中在抑制滑膜細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制血管新生，調(diào)節(jié)免疫抑制，炎癥介質(zhì)生成等，緩解RA進(jìn)程是在多種信號(hào)通路的上下調(diào)控，抑制炎癥反應(yīng)發(fā)生。從本文選擇的8個(gè)中藥復(fù)方和8味中藥單體成分的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究來(lái)看，藥物通過(guò)對(duì)Wnt/βcatenin、ATX-LPA、ERK、JAK/STAT、MAPK、NF-kB、TLRs、RANKL/RANK/OPG等通路進(jìn)行有效調(diào)控，調(diào)控通路中主要因子的磷酸化過(guò)程，抑制滑膜組織異常增生，減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，延緩骨破壞，誘導(dǎo)RA-FLS凋亡等作用，從而達(dá)到治療RA的目的。中醫(yī)藥在防治RA機(jī)制研究方面取得較大進(jìn)展，但中藥多成分、多層次、多途徑、多靶點(diǎn)協(xié)同作用在研究中還未能完全體現(xiàn)，研究方式還不能很好體現(xiàn)中醫(yī)整體辨證論治的思維和方法，因此，下一步在中醫(yī)藥理論體系指導(dǎo)下，應(yīng)進(jìn)一步創(chuàng)新研究思路與研究方法技術(shù)，運(yùn)用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的代謝組學(xué)、基因組學(xué)、蛋白組學(xué)等組學(xué)研究方法和先進(jìn)儀器設(shè)備結(jié)合，從中藥復(fù)方及其單體成分中開(kāi)發(fā)抗RA藥物，充分發(fā)揮中醫(yī)藥對(duì)人類(lèi)健康事業(yè)的貢獻(xiàn)。