全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)在無償獻(xiàn)血者血液檢測中的應(yīng)用及其臨床價(jià)值探討

宋飛峰 吳安明 張柳英 歐靖 楊倩

(黔南州中心血站 1.行政科，2.檢驗(yàn)科，貴州黔南 558000)

對無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本中的不規(guī)則抗體、Rh(D)、ABO 血型檢測是血站血液篩查的重點(diǎn)工作，Rh(D)血型、ABO 血型鑒定的要求是準(zhǔn)確率100%，因其會(huì)對輸血患者的生命安全造成直接的影響。ABO 定型的方法主要有梯型板法、U 型板法、試管法、紙片法等。常規(guī)的試管法、紙片法檢測效率較低，且結(jié)果容易受到主觀因素影響，另外，不能進(jìn)行較長時(shí)間的保存，也無法進(jìn)行批量血型檢測[1]。全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)不僅可以提高血液標(biāo)本檢測效率，而且還能減少由于人為原因?qū)е碌牟铄e(cuò)發(fā)生，有利于保證輸血患者的生命安全。因此，應(yīng)用高效率、高通量、結(jié)果精確的自動(dòng)化檢測系統(tǒng)對于提高血液標(biāo)本質(zhì)量非常重要。全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)省時(shí)省力，可以減少人為失誤的發(fā)生，使最終的結(jié)果判斷更加直接、客觀，數(shù)據(jù)可以長時(shí)間進(jìn)行保存，近幾年在無償獻(xiàn)血標(biāo)本中應(yīng)用越來越廣泛[2]。我站在無償獻(xiàn)血者血液檢測中，使用全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

選取2019 年本站無償獻(xiàn)血者2 634 例，對所有獻(xiàn)血者的血液樣本進(jìn)行全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測、試管法檢測、U 形微板法檢測。2 634 例獻(xiàn)血者中，男1 661 例，女973 例；年齡18～55 歲，平均年齡（33.3±1.2）歲；均知曉并同意此次檢測。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑

試劑主要有血清抗A、抗B（上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供）；Rh(D)（德國Biotest 公司提供）；A 細(xì)胞、B 細(xì)胞、O 細(xì)胞懸液（2%，北京金豪制藥股份有限公司提供）[3]。

1.2.2 儀器、材料

全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)、預(yù)稀釋板、0LYMPUS120孔V 型梯度板。

1.2.3 試管法

嚴(yán)格按照全國臨床檢驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行此操作，應(yīng)用可調(diào)微量移液器在試管中加入自制的血漿、新鮮紅細(xì)胞，離心1min 后進(jìn)行輕微震蕩觀察，如果存在細(xì)沙狀或者是凝塊則為凝集，反之為不凝集[4]。

1.2.4 U 形微板法

U 型微板法又叫做半自動(dòng)法，主要是根據(jù)紅細(xì)胞通過微板在鹽水介質(zhì)中凝集的原理進(jìn)行，在U 型微板上經(jīng)過全自動(dòng)樣本加樣儀(ML-STAR)對標(biāo)本與試劑進(jìn)行處理。反定型板布局為Oc、Bc、Ac，每塊樣板檢測標(biāo)本30 份，正定型布局抗-A、抗-B，每塊樣板檢測標(biāo)本44 份；Rh(D)檢測在單獨(dú)的微板上，Rh(D)與正、反定型檢測樣本與試劑的比例為30μL :50μL[5]。完成分配微板手工后將其轉(zhuǎn)入到孵育振蕩器中，選擇轉(zhuǎn)速400r、振蕩6min、振幅3F；手工轉(zhuǎn)移到平板離心機(jī)中，選擇500r 轉(zhuǎn)速離心1min；后將其轉(zhuǎn)移到孵育振蕩器中，選擇轉(zhuǎn)速1000r、振蕩2min、振幅1F，后靜置3min，使用HT3 酶標(biāo)儀進(jìn)行判讀，同時(shí)通過ITSWELL 軟件對結(jié)果進(jìn)行分析與判斷，同時(shí)用肉眼對結(jié)果符合性進(jìn)行判斷[6]。對可疑的標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測，如果仍然無法對結(jié)果進(jìn)行明確，后送到血型室進(jìn)行確認(rèn)。

1.2.5 全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)

編制加樣程序，按照ABO 正、反定型、不規(guī)則抗體、Rh(D)檢測。①Xantus 加樣：取樣本血漿13μl 加入3 孔，分別為不規(guī)則抗體1 孔、反定型2孔，分別加入30μl 的O 細(xì)胞懸液(2%)、B 細(xì)胞懸液(2%)、A 細(xì)胞懸液(2%)。②將16μl 紅細(xì)胞樣本與450μl 生理鹽水混合，使之形成紅細(xì)胞懸液，再分別取25μl 加入到兩孔中，再次加入生理鹽水對抗A、抗B 血清進(jìn)行稀釋，各25μl[7]。③Rh(D)在另一塊V 型梯度板中單獨(dú)進(jìn)行，將稀釋好的紅細(xì)胞懸液25μl 加入到V 型板孔中，再次加入生理鹽水1 :20 稀釋25μl 的Rh(D)試劑。④加樣完成后充分振蕩10s，放到室溫下靜置1h 后自動(dòng)對結(jié)果進(jìn)行判讀[8]。

1.2.6 結(jié)果判斷

U 形微板法、試管法：陽性：有凝集；陰性：無凝集。全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)：對血型進(jìn)行自然沉降反應(yīng)，根據(jù)孔底透光率對結(jié)果進(jìn)行判斷。陽性：細(xì)胞均勻的分布在V 型孔底；陰性：細(xì)胞沉降且主要聚集在孔底中央；Rh(D)血型、ABO 正反定型血型相同且正常后對血型進(jìn)行判斷，如果結(jié)果不相同，則進(jìn)行進(jìn)一步鑒定[9]。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）比較試管法與全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果符合率。

（2）比較全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測與U 形微板法檢測結(jié)果。

（3）比較全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測與U 形微板法Oc 凝集發(fā)現(xiàn)的鹽水不規(guī)則抗體參比結(jié)果。

（4）比較全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測與U 形微板法對倍比稀釋后血漿反定型檢測結(jié)果。

（5）比較全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測與U 形微板法對溶血、脂血標(biāo)本檢查結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 18.0 進(jìn)行分析，其中計(jì)數(shù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05 提示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 試管法與全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果符合率對比

從2 634份樣本中抽取480份樣本的Rh(D)血型、ABO 正反定型血型進(jìn)行試管法與全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測，符合率為100%，見表1。

2.2 全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測與U 形微板法檢測結(jié)果對比

在2 634 份樣本中，有10 份樣本正反定型不符，通過血型室檢測有2 份為亞型，其中的1 份送至相關(guān)血液中心血液研究所，發(fā)現(xiàn)該標(biāo)本為少見的cisAB 型，通過PCR-SSP 分型法進(jìn)行進(jìn)一步檢測發(fā)現(xiàn)，該標(biāo)本確定為cisAB 中的01 型，同時(shí)進(jìn)行DNA 基因測序后，發(fā)現(xiàn)該獻(xiàn)血者的血型為001 型與cisAB01 型雜合，同時(shí)發(fā)現(xiàn)該標(biāo)本中有cisAB01型的803G＞C、467C＞T、467C＞T 典型變異，同時(shí)還有724C＞T 的突變，抗體減弱有1 份，不規(guī)則抗體陽性6 份；檢出的Rh(D)陰性有3 份，通過血型室確定為陰性，一次結(jié)果判斷準(zhǔn)確性為100%。U 形微板法檢出的正反定型不符有43 份，有38 份經(jīng)過試管法檢測與全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測與判讀結(jié)果相同，還有3 份經(jīng)過血型室確定為不規(guī)則抗體陽性；Rh(D)陰性檢出2 份，經(jīng)過血型室確定為陰性，見表2。

2.3 全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測與U 形微板法Oc 凝集發(fā)現(xiàn)的鹽水不規(guī)則抗體參比結(jié)果對比

全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測Oc 凝集結(jié)果與正反定型不符的例數(shù)多于U 形微板法檢測結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

2.4 全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測與U 形微板法對倍比稀釋后血漿反定型檢測結(jié)果對比

隨著稀釋倍數(shù)的增加，全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測的陽性率比U 形微板法檢測的陽性率高，見表4。

2.5 全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測與U形微板法對溶血、脂血標(biāo)本檢查結(jié)果對比

全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)判斷正確率高于U 形微板法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表5。

表1 試管法與全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果符合率對比（例）

表2 U 形微板法檢測與全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果對比（例）

表3 全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測與U 形微板法Oc 凝集發(fā)現(xiàn)的鹽水不規(guī)則抗體參比結(jié)果對比[例（%）]

表4 全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測與U 形微板法對倍比稀釋后血漿反定型檢測結(jié)果對比

表5 全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測與U 形微板法對溶血、脂血標(biāo)本檢查結(jié)果對比[例（%）]

3 討論

3.1 臨床血液標(biāo)本檢測現(xiàn)狀

隨著無償獻(xiàn)血人數(shù)的不斷增加，提高血液標(biāo)本檢測質(zhì)量非常重要，血液的安全對輸血患者的生命安全有直接的影響，且Rh(D)血型、ABO 血型的準(zhǔn)確率必須達(dá)到100%[10]。

3.2 全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測在無償獻(xiàn)血標(biāo)本檢測中的應(yīng)用

無償獻(xiàn)血標(biāo)本檢測在臨床上屬于重要工作，臨床上一般鑒定血型的方法為試管法，該方法是鑒定Rh(D)血型、ABO 血型的經(jīng)典方法，結(jié)果比較準(zhǔn)確、可靠，但是操作步驟不夠規(guī)范、科學(xué)，很容易使大量的樣本無法很好地處理與長時(shí)間保存[11]。U 型微板法是臨床上檢測血液血型的常規(guī)方法，主要用于血站血型鑒定，但是，該方法的全自動(dòng)加樣儀需要試劑與標(biāo)本，還需要一系列其他的步驟,比如結(jié)果比對、比色、振蕩、微板離心等都需要人為進(jìn)行操作，操作人員的操作水平與臨床經(jīng)驗(yàn)會(huì)對最終的血型鑒定結(jié)果造成直接的影響[12]。全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)是近些年興起的一種血型檢測方法，不管是加樣還是判定，整個(gè)過程都是通過血型儀完成，同時(shí)在進(jìn)行試驗(yàn)的期間，CCD 成像結(jié)果、凝集結(jié)果會(huì)進(jìn)行自動(dòng)保存，全部過程都可以進(jìn)行監(jiān)控，可以真正達(dá)到全自動(dòng)血型檢測，有效減少了人為因素導(dǎo)致的誤差發(fā)生[13]。本研究顯示，從2 634 份樣本中抽取480 份樣本的Rh(D)血型、ABO 正反定型血型進(jìn)行試管法與全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測，符合率為100%，這就說明，在無償獻(xiàn)血者血液檢測中，應(yīng)用全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測，檢測結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，且有效減少了由于人為原因所導(dǎo)致的誤差發(fā)生。

研究顯示，隨著稀釋倍數(shù)的增加，全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測的陽性率比U 形微板法檢測的陽性率高，這就說明，在無償獻(xiàn)血者血液檢測中，應(yīng)用全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測，檢測結(jié)果準(zhǔn)確度、靈敏度較高，且對每一份標(biāo)本均進(jìn)行全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測，有效降低了血型試劑成本，提高了準(zhǔn)確率。

紅細(xì)胞血型不規(guī)則抗體是導(dǎo)致輸血患者發(fā)生交叉配型困難、血型鑒定困難、輸血出現(xiàn)不良反應(yīng)的主要原因[14]。臨床為了提高輸血標(biāo)本的質(zhì)量，減少為輸血患者輸注不規(guī)則抗體血液，保證患者生命安全，使用全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測，檢測結(jié)果顯著，可以檢出血液中的鹽水不規(guī)則抗體，提高了血液標(biāo)本安全性[15]。本研究顯示，全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測Oc 凝集結(jié)果與正反定型不符的例數(shù)多于U 形微板法檢測結(jié)果(P＜0.05)，在2 634 份樣本中，有10份樣本正反定型不符，通過血型室檢測有2 份為亞型，其中的1 份送到了相關(guān)血液中心研究室，發(fā)現(xiàn)該標(biāo)本為少見的cisAB 型，通過PCR-SSP 分型法進(jìn)行進(jìn)一步檢測，該標(biāo)本確定為cisAB 中的01 型，同時(shí)進(jìn)行DNA 基因測序后，發(fā)現(xiàn)該獻(xiàn)血者的血型為001 型與cisAB01 型雜合，同時(shí)發(fā)現(xiàn)該標(biāo)本中有cisAB01 型的803G＞C、467C＞T、467C＞T 典型變異，同時(shí)還有724C＞T 的突變，抗體減弱有1 份，不規(guī)則抗體陽性6 份。檢出的Rh(D)陰性有3 份，通過血型室確定為陰性，一次結(jié)果判斷準(zhǔn)確性為100%。U 形微板法檢出的正反定型不符有43 份，有38 份經(jīng)過試管法檢測與全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測與判讀結(jié)果相同，還有3 份經(jīng)過血型室確定為不規(guī)則抗體陽性；Rh(D)陰性檢出2 份，經(jīng)過血型室確定為陰性。這就說明，對無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本進(jìn)行檢測時(shí)，應(yīng)用全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測，可以對鹽水不規(guī)則抗體進(jìn)行初篩，更容易檢出血液標(biāo)本中的鹽水不規(guī)則抗體，從而提高了血液標(biāo)本質(zhì)量，保證了輸血患者生命安全。

3.3 全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測在無償獻(xiàn)血標(biāo)本檢測中對準(zhǔn)確率的影響

研究顯示，全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)判斷正確率高于U 形微板法(P＜0.05)，這就說明，對無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本進(jìn)行檢測時(shí)，應(yīng)用全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)檢測，可以提高結(jié)果判讀準(zhǔn)確性。常規(guī)檢測方法出現(xiàn)判讀誤差后，需要工作人員進(jìn)一步進(jìn)行試管法確定，這從一定程度上增加了工作人員的工作量，同時(shí)還延誤了報(bào)告的輸出時(shí)間。應(yīng)用全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)，可以顯著提高溶血標(biāo)本、脂血標(biāo)本的檢測準(zhǔn)確率，這主要與全自動(dòng)血型儀所使用的試劑量較少、標(biāo)本血漿量較少、反應(yīng)體積較小、生理鹽水的稀釋都有很大的關(guān)系，從而降低了結(jié)果判讀誤差率。另外,全自動(dòng)血型儀判讀時(shí)從板底進(jìn)行，有效降低了上清液的渾濁程度，提高了判讀結(jié)果準(zhǔn)確性。

綜上所述，無償獻(xiàn)血者血液檢測中，全自動(dòng)血型檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，應(yīng)該在臨床上廣泛推廣與應(yīng)用。