HPLC法測(cè)定養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿中梓醇的含量

何鳳蘭　鄭曉陽　馮麗萍　黃文鋒

【摘 要】 目的：建立HPLC法測(cè)定養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿中梓醇的含量。方法：用高效液相色譜法Diamonsil? TM-C18（4.6mm×150mm，0.5μm）色譜柱，以乙腈-0.1%磷酸溶液（1∶99）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。結(jié)果：梓醇的線性范圍為2～18μg·mL-1（r=0.9996）;平均回收率為 99.4%（n=6），RSD=0.6%。結(jié)論：該方法專屬性強(qiáng)，快速、方便，分離度好，無其他成分干擾，適合于養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿中梓醇的含量測(cè)定，值得推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 HPLC;養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿;梓醇

【中圖分類號(hào)】R284.2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2020）23-0021-03

Determination of Catalpol in Yangyin Runfei Syrup by HPLC

HE Fenglan1 ZHENG Xiaoyang1 FENG Liping1 HUANG Wenfeng2

1.Department of Pharmacy， Yangjiang Peoples Hospital of Guangdong， Yangjiang 529500， China;

2.Guangdong Yangjiang Testing and Inspection Center， Yangjiang 529500， China

Abstract：Objective To establish an HPLC method for the determination of catalpol in Yangyin Runfei Syrup.Methods A Diamonsil TM-C18 （4.6mm×150mm，0.5μm） chromatographic column was used for high performance liquid chromatography with acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution （1∶99） as the mobile phase. The detection wavelength was 210nm.Results The linear range of catalpol was 2～18μg·mL-1 （r=0.9996）; the average recovery was 99.4% （n=6） and RSD=0.6%. Conclusion This method has strong specificity， fast， convenient， good resolution and no interference from other components. It is suitable for the determination of catalpol in Yangyin Runfei Syrup， and it is worthy of popularization and application.

Keywords：HPLC;Yangyin Runfei;Syrup Catalol

養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿是我院自擬處方中成藥制劑，由地黃、麥冬、玄參、川貝母、白芍、牡丹皮等8味藥材組成[1]，深得廣大患者的認(rèn)可，銷量較大。養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿主治陰虛肺熱引起的咳嗽、咽干、喉痛聲啞、痰中帶血等癥，療效顯著。但其自擬標(biāo)準(zhǔn)中還沒有含量測(cè)定項(xiàng)目，地黃在該處方中屬君藥，針對(duì)地黃的有效成份是梓醇進(jìn)行檢測(cè)，以控制其內(nèi)在有效成分，同時(shí)將其作為養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿的質(zhì)量控制指標(biāo)，保證產(chǎn)品質(zhì)量，提高療效，故增加含量測(cè)定項(xiàng)目。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法，能有效分離養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿中地黃的主要成分梓醇[2]，很好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SHIMADZU—LC20A型高效液相色譜儀（日本島津，UV檢測(cè)器）;FA135S型電子分析天平（上海精密儀器儀表有限公司）;KQ-3200DV型數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）及各種玻璃儀器[3]。

1.2 試藥 梓醇對(duì)照品（批號(hào)：110808-200508，中國(guó)藥品生物制品檢定所）;供試品：養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿（批號(hào)：180327，180417，180424），缺地黃的養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿（批號(hào)：180314，陽江市人民醫(yī)院）;乙腈（色譜純）、磷酸（分析純）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 梓醇照高效液相色譜法[4]（通則0512）[5]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，TM-C18（4.6mm×150mm，0.5μm），流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（1∶99）;流速：1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm;柱溫：25℃。進(jìn)樣量10μL，流速1mL·min-1。結(jié)果在上述色譜條件下，理論塔板數(shù)按梓醇峰計(jì)算不低于5000，梓醇分離良好，陰性無干擾，如圖1～3所示。

取供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀中，檢測(cè)，記錄供試品色譜圖，結(jié)果測(cè)得梓醇峰理論塔板數(shù)為5230，分離度為2.431，拖尾因子為1.03，符合規(guī)定。

2.2 對(duì)照溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的梓醇對(duì)照品10.0mg，加流動(dòng)相定容至50mL，搖勻，得0.2mg/mL的梓醇對(duì)照品溶液;精密量取上述溶液0.5mL，置10mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得濃度為10μg/mL的梓醇對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿2.0mL，加流動(dòng)相定容至50mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.4 陰性對(duì)照液的制備 本院的投料處方去掉地黃，制法： 按照本院投料處方與工藝，制成缺地黃的養(yǎng)陰潤(rùn)肺陰性對(duì)照糖漿1000mL（批號(hào)：180314，陽江市人民醫(yī)院），再按“2.3供試品溶液的制備”方法制備缺地黃的陰性對(duì)照溶液，注入高效液相色譜儀中，測(cè)定，結(jié)果陰性糖漿在梓醇峰相應(yīng)保留時(shí)間位置沒有干擾，如圖3所示。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取上述制得的0.2mg/mL的梓醇對(duì)照品溶液1、3、5、7、9mL分別置100mL容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得2μg/mL、6μg/mL、10μg/mL、14μg/mL、18μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。分別吸取10μL，注入高效液相色譜儀中，測(cè)量峰面積A。以對(duì)照品溶液濃度C為橫坐標(biāo)（X），峰面積A為縱坐標(biāo)（Y）[6]，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：Y=5815.5X-3439.1，r=0.9996。結(jié)果梓醇在2～18μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定梓醇的峰面積A，結(jié)果平均峰面積為13616.3，RSD=0.14%，結(jié)果表明精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)（180327，含量為0.2765mg/mL）的養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿6份，按“2.3供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，注入高效液相色譜儀中，測(cè)定，結(jié)果RSD為0.5%，表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿（批號(hào)：180327）供試品溶液，分別于供試品溶液制備后的0、2、4、6、8h進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果RSD=0.05%，表明供試品溶液在制備后8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 準(zhǔn)確度（加樣回收率）試驗(yàn) 取已知含量的養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿（批號(hào)：180327、0.2765mg/mL）各6份，置50mL量瓶中，再分別加入梓醇對(duì)照品適量，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得加樣回收供試品溶液。吸取供試品溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀中，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.4%（n=6），RSD=0.6%，表明本法準(zhǔn)確度良好，見表1。

2.10 含量測(cè)定 取3批養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿，分別按“2.3 供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，吸取供試品溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀中，測(cè)定并計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

3 討論

由于梓醇性質(zhì)的影響，檢測(cè)波長(zhǎng)選擇210nm;梓醇的吸收峰較大且干擾小，效果較好，故選擇210nm波長(zhǎng)。

文獻(xiàn)報(bào)道[7]梓醇 HPLC 圖譜中梓醇色譜峰形不太好，與相鄰峰的分離度不高，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性易造成影響。本實(shí)驗(yàn)通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了合理調(diào)整，確定實(shí)驗(yàn)的流動(dòng)相條件以乙腈-0.1%磷酸溶液（1∶99）為流動(dòng)相。由于供試品雜質(zhì)峰比較多，可在供試品制備過程中，先加10mL甲醇，過微孔濾膜（0.45μm），揮干，再加流動(dòng)相溶解并定容至50mL，供試品雜質(zhì)濃度降低，達(dá)到更理想的分離效果。

本方法快速、方便，分離度好，無其他成分干擾，適合于養(yǎng)陰潤(rùn)肺糖漿中梓醇的含量測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

[1]陳華國(guó)，陳慶，周欣，等.HPLC測(cè)定養(yǎng)陰清肺膏中梓醇含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育雜志，2007，5（9）：36.

[2]李云，孫利偉，趙小順，等.不同品種地黃干莖中梓醇含量比較[J]. 臨床醫(yī)藥實(shí)踐雜志， 2009，18（8）：1931-1933.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015：125.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（四部）[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015：59.

[5]莫慧貞，許則省.對(duì)芒果止咳片中馬來酸氯苯那敏的含量測(cè)定[J].今日藥學(xué)雜志，2009，19（4）：40-41.

[6]羅燕燕，張紹青，索建政，等.高效液相色譜法測(cè)定地黃中梓醇的含量[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志，1994，29（1）：38-40.

（收稿日期：2020-07-02 編輯：程鵬飛）

作者簡(jiǎn)介：何鳳蘭（1969-），女，漢族，?？疲鞴芩帋?，研究方向?yàn)樗幤焚|(zhì)量控制。E-mail：he2013lan@126.com