高效液相色譜法測定蒙脫石散中香蘭素的含量

謝曉丹

（莆田市食品藥品檢驗檢測中心 福建莆田 351100）

1 前言

蒙脫石散是臨床常用的消化道黏膜保護劑，其主要成分為蒙脫石，輔料為香蘭素、葡萄糖、糖精鈉等，在食道、胃、十二指腸等病癥引起的疼痛癥狀的輔助治療中廣泛應(yīng)用，其對消化道內(nèi)病毒、病菌等有良好的抑制效用，同時還有助于黏膜修復(fù)[1]。 其中，香蘭素是重要的食品藥品添加劑，但需嚴格控制其含量，食用過量會導(dǎo)致惡心、呼吸困難、嘔吐、頭痛等。 為保證藥品質(zhì)量，保障患者用藥安全，通過有效檢測方法準確測定蒙脫石散中香蘭素含量具有重要意義[2]。 近年來，隨著食品藥品檢測技術(shù)創(chuàng)新和發(fā)展，高效液相色譜法（HPLC）作為新型檢測技術(shù)在中西藥有效成分含量測定應(yīng)用廣泛，有著操作便捷、靈敏度高、檢測快、準確度高、重現(xiàn)性佳等優(yōu)勢。本文對HPLC 測定蒙脫石散中的有效性成分香蘭素進行試驗研究，以期為該藥的藥效和質(zhì)量評定提供可靠依據(jù)。

2 材料及儀器

2.1 材料

香蘭素對照品（中國食品藥品檢定研究院，生產(chǎn)批號：20180519）；蒙脫石散（思密達，博福-益普生制藥有限公司，國藥準字H20000690）；乙腈（色譜純，上海吉至生化科技有限公司，生產(chǎn)批號：CX0111180）；磷酸二氫鉀（分析純，蘇州恒程化工科技有效公司）；氫氧化鉀（分析純，上?；瘜W試劑有限公司）；超純水。

2.2 儀器

高效液相色譜儀：Agilent-1200 型，美國安捷倫科技公司，包括G1311A 四元梯度泵、G1313A 自動進樣器、G1316A 柱溫箱、G1315B 二級管陣列檢測器及G1322A 真空脫氣機；ChemStationRevA10.02 色譜工作站；電子天平（感量0.1 mg）：MS205DU 型，北京賽多利斯公司。

3 方法

3.1 溶液制備

對照品溶液制備：精確量取香蘭素對照品20.0mg，通過流動相超聲溶解并定容至50 mL 容量瓶內(nèi)，充分混合均勻并稀釋，制成20 μg/mL 對照品溶液，備用。

供試驗品溶液制備：精確量取市場出售的蒙脫石散0.94 g，用流動相溶解，定容至50 mL 容量瓶中，加30 mL 水，充分混合均勻后，先進行超聲脫氣，然后通過0.45 μm 針頭濾膜進行過濾，備用。

3.2 色譜條件

色譜柱為AgillentSB-C18 （4.6 mm×1 500 mm，3.5 μm）；流動相為0.05 mol/L 磷酸鹽緩沖液（量取磷酸二氫鉀13.6 g 加水溶解并稀釋至2 000 mL，再用8 mol/L 氫氧化鉀溶液將pH 調(diào)至5.0±0.1； 乙腈（97.5∶2.5，V/V）；梯度洗脫，柱溫維持在30℃；流速設(shè)置為1.0 mL/min；檢測波長為279 nm；進樣量為10 μL。

3.3 流動相及檢測波長選擇

將一定濃度對照品溶液于波長200～400 nm 進行紫外光譜掃描，結(jié)果表明在279 nm 處有最大吸收，但是考慮在其他波長檢測中蒙脫石散內(nèi)的輔料會影響到半峰寬度，所以本試驗確定檢測波長為279 nm。

選用不同體積比磷酸二氫鉀溶液與乙氰為流動相，發(fā)現(xiàn)0.05 mol/L 磷酸二氫鉀溶液與乙氰體積比為97.5∶2.5 時，出峰時間短，且色譜峰半峰寬較小。

3.4 方法考察

線性關(guān)系分析：吸取對照品溶液1、2、3、4、5、6 mL通過流動相定容至50 mL 容量瓶中，配制成20、40、60、80、100、120 μg/L 濃度的標準品溶液，充分搖勻。然后分別取以上標準品溶液按10 μL 進樣，于3.2 色譜條件下測定并記錄溶液色譜峰面積，橫坐標為濃度（X）、峰面積（Y）為縱坐標，繪制標準曲線圖，再進行線性回歸分析[3]。

重復(fù)性試驗：精確量取同批號蒙脫石散6 份，均為0.94 mg，按照供試驗品溶液步驟操作，于3.2 色譜條件下對溶液的香蘭素含量進行HPLC 測定。

穩(wěn)定性試驗：精確量取香蘭素對照品溶液20 μL，分別在1、2、4、6、10、12、24 h 于3.2 色譜條件下進樣，記錄保留時間與峰面積，并計算相對標準偏差（RSD）。

精密度試驗：精確量取香蘭素對照品溶液，配制成20、40、60、100 μg/L 標準溶液，按3.2 色譜條件測定，每一種標準溶液重復(fù)進樣測定6 次，計算RSD。

回收率試驗：精密量取香蘭素對照品溶液適量，依照處方量加空白敷料和藥物，混合均勻，進行測定計算回收率[4]。

樣品有效成分量測定：精確量取蒙脫石散樣品3 份，0.94 mg/份，按照供試驗品溶液制備操作，測定峰面積，然后代入回歸方程計算有效成分含量。

4 結(jié)果

4.1 色譜表現(xiàn)

按相應(yīng)色譜條件測定， 得到對照品與供試驗品高效液相色譜圖，顯示有效成分分離度良好，詳見圖1和圖2。

圖1 供試驗品色譜圖

圖2 對照品色譜圖

4.2 線性關(guān)系

通過測定，在5.40～32.19 μg/mL 內(nèi)香蘭素的濃度和峰面積有良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r＞0.972，回歸方程為Y=46342X＋26443（n=6）。

4.3 重復(fù)性

對6 份樣品溶液進行測定，測得峰面積RSD 為1.35%，表明該檢測方法有著良好重復(fù)性，詳見表1。

表1 HPLC 測定蒙脫石散內(nèi)香蘭素含量重復(fù)性

4.4 精密度

于標準曲線項下，平行測定對照品溶液6 次，測得香蘭素標準溶液的峰面積RSD 為1.12%，表明該測定方法有著良好精密度。

4.5 回收率

結(jié)果顯示，蒙脫石散供試驗品溶液中的香蘭素提取回收率為99.56%～100.44%，詳見表2。

表2 HPLC 測定蒙脫石散中的香蘭素回收率

4.6 樣品有效成分含量

通過測定并代入回歸方程計算有效成分平均含量為1.10 mg/g，符合有關(guān)規(guī)定，詳見表3。

表3 蒙脫石散中的香蘭素含量

5 討論

蒙脫石散是一種常見的腹瀉治療藥物，適用于成人和兒童急慢性腹瀉，常用于胃潰瘍、反流性食管炎、急性胃腸炎、小兒病毒性腸炎、慢性功能性腹瀉等治療中[5，6]。香蘭素是該藥物的主要輔助添加成分，應(yīng)為口服藥物，且常用于小兒，因而需嚴格控制用量。因香蘭素分子含有活潑性醛基，易和醇發(fā)生加成反應(yīng)，出現(xiàn)不易識別的濃度峰，影響含量測定，所以在HPLC 測定中通常需添加一定量的乙腈，以確保檢測色譜柱的穩(wěn)定性，保證檢測結(jié)果精確性。

本研究通過HPLC 對西藥蒙脫石散中的香蘭素含量進行測定，結(jié)果顯示香蘭素含量為1.10 mg/g，精密度高，且有良好的重復(fù)性、穩(wěn)定性，符合藥物標準成分測定要求。在應(yīng)用HPLC 檢測時，需要設(shè)置好色譜條件和流動相，后者需要結(jié)合試驗條件將pH控制在標準范圍，以保證在檢測中的分離作用，以便區(qū)分香蘭素含量檢測峰值變化[7]。 另外，進行藥物有效成分檢測時，要在空白藥品中加入標準溶液，用HPLC 色譜測定，不同濃度樣品中藥物的色譜變化也存在差異，且蒙脫石散中的香蘭素的色譜圖含量峰值面積也均不相同，在分析時需要結(jié)合檢查記錄，并通過不同濃度峰面積變化比較，實現(xiàn)蒙脫石散提取物中有效成分含量的回收分析。 在香蘭素含量試驗測定中，為保證檢測結(jié)果的準確性，基于HPLC 檢測的原理，還有柱切法、反相色譜法等檢測方法，可以實現(xiàn)藥物有效成分含量的測定。 但由于儀器設(shè)備的要求和操作復(fù)雜度較高，在實際檢查中應(yīng)用較少。

綜上所述，使用HPLC 對臨床廣泛應(yīng)用的腹瀉制劑蒙脫石散中的香蘭素進行測定有著良好高精密度、重復(fù)性及穩(wěn)定性，符合臨床藥物檢測要求，可作為首選檢測方法，保證藥物的藥效和質(zhì)量。