病原微生物快速檢測(cè)的臨床研究進(jìn)展概述

高靜 天津市武清區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 （天津 301700）

內(nèi)容提要：病原微生物快速檢測(cè)屬于臨床較為常用的檢測(cè)技術(shù)，伴隨多種類型微生物的出現(xiàn)，具備周期較長(zhǎng)、操作較為繁雜、特異性較差特征的傳統(tǒng)微生物檢測(cè)方式，并不能夠滿足現(xiàn)代診斷治療的需求。在人們傳統(tǒng)檢測(cè)方式基礎(chǔ)之上，不斷地發(fā)展以及提高，能夠探索出多類新型微生物檢測(cè)方式，具備快速、準(zhǔn)確且安全性較高的特征，從而促進(jìn)微生物檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展。本次研究傳統(tǒng)生物法培養(yǎng)鑒定技術(shù)與免疫學(xué)，而另一個(gè)方面對(duì)新型檢測(cè)方法進(jìn)行分析。比如分子生物學(xué)、生物傳感器與生物芯片等等，對(duì)此進(jìn)行綜合性概述。

隨著環(huán)境污染的不斷加重，感染性疾病呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢(shì)，對(duì)人們的身體健康產(chǎn)生嚴(yán)重威脅[1]。導(dǎo)致感染病原微生物主要是霍亂弧菌、鼠疫耶爾森菌與分歧桿菌之類傳統(tǒng)病原微生物重新繁殖，并且病原微生物的種類不斷增多、耐藥性相對(duì)增強(qiáng)，增大臨床診斷與治療困難的程度。隨著人口的流動(dòng)不斷增大，加大了傳染病疾病的感染[2]。因此，微生物檢驗(yàn)技術(shù)要快速且準(zhǔn)確，能夠早發(fā)現(xiàn)、早診斷與早隔離、治療，有助于減少感染性疾病的不斷傳播。本文主在探討病原微生物快速檢測(cè)屬于臨床較為常用的檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)展，現(xiàn)綜述如下。

1.采用生化方式對(duì)病原微生物實(shí)施檢測(cè)

生化方式對(duì)病原微生物進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)質(zhì)上是對(duì)微生物特異性酶進(jìn)行測(cè)定，因?yàn)楦黝愇⑸锼邆涿赶到y(tǒng)并不完全相同，對(duì)多重物質(zhì)分解的能力并不相同[3]。所以采用不同的底物所產(chǎn)生不同代謝產(chǎn)區(qū)能夠?qū)ξ⑸锩高M(jìn)行間接性檢測(cè)，至此達(dá)到檢測(cè)特定微生物目的。李春鳳[4]等人的研究顯示，沙門氏菌可以產(chǎn)生辛酯酶，這一種性能是除了沙門氏菌以外各類屬腸桿菌科的細(xì)菌所不具備的。按照這一種特征，對(duì)沙門氏菌采用快速檢測(cè)辛酯酶法，這種方式是通過4-甲基傘形酮辛酯作為底物，通過沙門氏菌酶降解之后，釋放出4MU，在紫外燈下對(duì)所發(fā)出藍(lán)色熒光進(jìn)行觀察。這種方法簡(jiǎn)單易行，從而將底物加入到紫外燈下進(jìn)行觀察，結(jié)果則只要幾分鐘便能夠完成。檢測(cè)的靈敏度與特異度達(dá)到95%、90%。對(duì)底物與H2S反應(yīng)為陽(yáng)性的沙門氏菌則這類檢查方式更為靈敏，靈敏度與特異度接近100%。

2.血清免疫學(xué)檢測(cè)方法

免疫檢測(cè)學(xué)技術(shù)主要是采用特異性抗原抗體反應(yīng)，對(duì)組織細(xì)胞、特定抗原定性與定量技術(shù)進(jìn)行觀察。為顯示與觀察相應(yīng)的抗原抗體反應(yīng)，要將相應(yīng)的標(biāo)記物結(jié)合至相應(yīng)的抗體上，借用標(biāo)記物熒光或者酶有色性反應(yīng)、放射性或者高電子密度，通過在光鏡、電鏡下實(shí)施定性、定位或者定量的研究[5]。各類形式免疫分析方式，例如放射性免疫分析法、酶免疫分析法、間接性酶聯(lián)免疫吸附法、熒光免疫分析方式、生物發(fā)光免疫分析法、化學(xué)發(fā)光免疫分析法，直接或者間接對(duì)微生物的成分進(jìn)行檢測(cè)，這種檢測(cè)方式在臨床上得到廣泛運(yùn)用。

2.1 熒光抗體技術(shù)法

熒光抗體技術(shù)主要是按照抗原抗體的反應(yīng)具備較高特異性，將熒光素當(dāng)做抗原標(biāo)記物，通過在熒光顯微鏡下的檢查，顯示出熒光特異性抗原抗體的復(fù)合物與抗原抗體所存在的位置。熒光抗體技術(shù)主要特征是特異性較強(qiáng)、速度較快、靈敏度相對(duì)較高，同時(shí)也會(huì)存在較多缺點(diǎn)，若沒有特異染色問題，則需要按照完全解決、操作程序相對(duì)繁瑣、需要特殊昂貴儀器與染色標(biāo)本不能夠長(zhǎng)期的進(jìn)行保存。采用快速檢測(cè)法對(duì)病原菌進(jìn)行檢測(cè)多采取直接檢測(cè)法與間接檢測(cè)法。直接檢測(cè)法主要是在檢測(cè)的樣品上面直接獲得特異性的熒光抗血清，通過洗滌之后則可在熒光顯微鏡之下進(jìn)行觀察[6]。間接檢測(cè)方法主要是在檢測(cè)樣品上滴加相應(yīng)的細(xì)菌特異性抗體，等到出現(xiàn)作用后進(jìn)行洗滌，加入熒光標(biāo)記第二抗體。

2.2 酶聯(lián)免疫技術(shù)

酶聯(lián)免疫技術(shù)法主要是按照抗原-抗體免疫反應(yīng)和酶高效催化作用的原理進(jìn)行有機(jī)的結(jié)合，經(jīng)酶催化底物，從而出現(xiàn)一系列化學(xué)性反應(yīng)，讓溶液顯現(xiàn)顏色性變化，表明抗原抗體特異性反應(yīng)明顯存在。隨著酶聯(lián)免疫技術(shù)不斷應(yīng)用，可以大幅度提高檢測(cè)敏感度與特異度，并且被廣泛應(yīng)用在多種病原微生物的檢測(cè)當(dāng)中。唐俊妮[7]等人的研究顯示，MP膜結(jié)合蛋白抗原制備相應(yīng)的MP單抗建立相應(yīng)的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫檢測(cè)肺炎支原體抗原的方式，和PCR檢測(cè)方式的符合度達(dá)到95%。

3.分子生物學(xué)檢測(cè)法

隨著分子生物學(xué)與分子遺傳學(xué)不斷發(fā)展，讓人們對(duì)于微生物認(rèn)識(shí)逐漸由外部的結(jié)構(gòu)特征轉(zhuǎn)向內(nèi)部的基因結(jié)構(gòu)，微生物檢測(cè)從生化與免疫的方式逐漸轉(zhuǎn)向到基因水平進(jìn)行檢測(cè)[8]。

4.生物傳感器實(shí)施病原微生物檢測(cè)

生物傳感器屬于新興傳感器技術(shù)與分子診斷技術(shù)結(jié)合屬于新型的檢測(cè)技術(shù)。生物傳感器主要是分子識(shí)別器件與換能器。待測(cè)物質(zhì)、識(shí)別器件與轉(zhuǎn)換器件之間通過生物、化學(xué)與生化、物理性作用之間相互聯(lián)系[9]。因?yàn)樯飩鞲衅鳈z測(cè)相對(duì)準(zhǔn)確、操作相對(duì)簡(jiǎn)單，在相關(guān)的領(lǐng)域取得相對(duì)較大的進(jìn)展。但是生物傳感器還是存在靈敏度不足、極易遭受干擾等缺陷，需要進(jìn)一步改善[10]。

5.結(jié)論

綜上所述，病原檢測(cè)的方式相對(duì)較多，各類方式均存在優(yōu)缺點(diǎn)，為彌補(bǔ)相應(yīng)檢測(cè)方式的缺陷，需要進(jìn)一步的提高靈敏度與特異度，需要采用多種方式聯(lián)合應(yīng)用。在選擇檢測(cè)方式的時(shí)候需要考慮相應(yīng)的條件，包括檢測(cè)所要求靈敏度，提高靈敏度與除去假陽(yáng)性屬于檢測(cè)方式所發(fā)展的重要趨勢(shì)。伴隨計(jì)算機(jī)技術(shù)不斷發(fā)展，病原菌檢測(cè)會(huì)往高度自動(dòng)化與開發(fā)簡(jiǎn)便快速檢測(cè)技術(shù)方面發(fā)展。分子生物學(xué)技術(shù)經(jīng)過自動(dòng)化儀器應(yīng)用，病原菌診斷、鑒定與耐藥基因檢測(cè)方面逐漸應(yīng)用在臨床。而實(shí)現(xiàn)高效、高質(zhì)與價(jià)格低廉統(tǒng)一，需要改變臨床病原菌檢測(cè)現(xiàn)狀與傳統(tǒng)的觀念。伴隨各學(xué)科交叉的發(fā)展，則會(huì)出現(xiàn)相對(duì)較多新型檢測(cè)技術(shù)。