乙肝病毒感染檢測(cè)研究進(jìn)展

天津市靜海區(qū)疾病預(yù)防控制中心傳控科 （天津 301600）

內(nèi)容提要： 乙肝即乙型傳染性肝炎，是臨床常見(jiàn)、多發(fā)的傳染性疾病之一，乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是導(dǎo)致此病的直接原因。由于乙肝病程長(zhǎng)、病情遷延難愈，若未及時(shí)救治可能導(dǎo)致癌變甚至死亡等嚴(yán)重后果，因此提示及時(shí)采取有效措施確診乙肝病情對(duì)提高患者療效及預(yù)后、保障此病防控效果均具有重要價(jià)值?；诖?，本文將詳盡敘述現(xiàn)階段乙肝病毒的檢測(cè)研究進(jìn)展，以期為今后實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)乙肝病毒提供有利參考依據(jù)。

乙肝病毒屬于嗜肝脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）病毒科，是現(xiàn)階段已知的最小DNA病毒，具有獨(dú)特的帶有部分單鏈區(qū)的雙鏈DNA環(huán)狀模式，包括小球形顆粒、Dane顆粒、慣性顆粒等3種不同形態(tài)結(jié)構(gòu)[1]。研究表明，乙肝病毒入侵人體肝臟細(xì)胞后部分雙鏈環(huán)狀乙肝病毒DNA在細(xì)胞核內(nèi)以負(fù)鏈DNA為模板，將正鏈延長(zhǎng)從而對(duì)正鏈中的裂隙區(qū)有效修補(bǔ)，共價(jià)閉合環(huán)狀DNA[即cccDNA（covalent closed circular deoxyribonucleic acid）]隨即形成[2]。之后，選擇模板為cccDNA轉(zhuǎn)錄成幾種mRNA（不同長(zhǎng)度）并分別作為前基因組核糖核酸（ribonucleic acid，RNA）對(duì)乙肝病毒的各種抗原予以編碼。

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)乙肝病毒感染結(jié)果仍是目前臨床用于診斷乙肝的主要依據(jù)，但現(xiàn)階段臨床可用于檢測(cè)乙肝病毒的手段較多，如何取舍仍存一定爭(zhēng)議[3,4]。因此明確不同乙肝病毒感染檢測(cè)技術(shù)優(yōu)劣勢(shì)對(duì)今后診治、防控乙肝病毒工作十分必要。

1.酶免疫技術(shù)

酶免疫技術(shù)是現(xiàn)階段臨床應(yīng)用較為廣泛的乙肝病毒檢測(cè)方法，利用酶催化底物反應(yīng)的生物放大作用從而使特異性抗原抗體免疫學(xué)反應(yīng)檢測(cè)敏感性有效提高[5]。由于酶免疫技術(shù)具有成本低、設(shè)備要求低、操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，因此已成為我國(guó)各級(jí)基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)常用的乙肝病毒檢測(cè)方法。但應(yīng)注意的是，酶免疫技術(shù)易受外界環(huán)境、操作者主觀因素等影響從而得到假陰性、假陽(yáng)性結(jié)果[6]。

2.熒光免疫技術(shù)

熒光免疫技術(shù)是免疫標(biāo)記技術(shù)中最早發(fā)展的一種檢測(cè)方法，其將熒光技術(shù)的敏感性、免疫學(xué)反應(yīng)的特異性有效結(jié)合并發(fā)揮應(yīng)有作用。時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)（timeresolved fluoroimmunoassay，TRFIA）是近年來(lái)發(fā)展的高靈敏度免疫標(biāo)記定量檢測(cè)技術(shù)，具有無(wú)環(huán)境污染、避免自然背景干擾、敏感性及特異性均較優(yōu)等特點(diǎn)[7]。但應(yīng)注意的是，TRFIA雖然能夠應(yīng)用于對(duì)藥物使用效果、病情監(jiān)測(cè)等工作中，但此法對(duì)設(shè)備要求高、使用成本高，不利于基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)積極推廣。

3.化學(xué)發(fā)光免疫分析

化學(xué)發(fā)光即化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中發(fā)出的光照情況，熒光即發(fā)光物質(zhì)將激發(fā)光吸收后導(dǎo)致分子發(fā)射光?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)即利用生物素-親和素技術(shù)，由電化學(xué)在電極表面引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，是現(xiàn)階段最為先進(jìn)的一種化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定技術(shù)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)較熒光免疫技術(shù)具有相似弊端，即相較于酶免疫、熒光免疫而言具有更高的靈敏度且操作更加簡(jiǎn)單、安全性更高，但此法檢測(cè)成本昂貴，基層單位普及受限[8]。

4.免疫層析技術(shù)

免疫層析試驗(yàn)是一種膜固相免疫測(cè)定技術(shù)，其中以膠體金作為標(biāo)記物的免疫層析技術(shù)稱(chēng)為金免疫層析試驗(yàn)（即膠體金法）。免疫層析技術(shù)無(wú)需特殊儀器設(shè)備，能夠快速應(yīng)用于單個(gè)標(biāo)本檢測(cè)，具有操作簡(jiǎn)單、易于觀察、特異性高、速度快等特點(diǎn)，但此法假陰性、假陽(yáng)性均較高，不適用于獻(xiàn)血及住院人群檢測(cè)[9]。

5.乙肝病毒DNA檢測(cè)

血清乙肝病毒DNA檢測(cè)是現(xiàn)階段臨床用于診斷乙肝病情的“金標(biāo)準(zhǔn)”，金納米顆粒探針對(duì)乙肝病毒DNA聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）產(chǎn)物具有顯著的檢測(cè)價(jià)值[10,11]，且檢測(cè)過(guò)程中無(wú)需特殊儀器、結(jié)果直觀可見(jiàn)，目前主流檢測(cè)技術(shù)為T(mén)aMan法（RT-PCR）[12]。

6.乙肝病毒cccDNA檢測(cè)

cccDNA是乙肝病毒前基因組RNA、mRNA合成的模板，在乙肝病毒復(fù)制周期中具有重要作用，是維持乙肝病毒感染持久性的關(guān)鍵[13]。目前有研究認(rèn)為對(duì)乙肝病毒cccDNA監(jiān)測(cè)對(duì)臨床醫(yī)生制定用藥方案、判斷臨床療效及預(yù)后均具有重要參考價(jià)值，目前實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢cccDNA的主要方法包括PCR技術(shù)、Southern印跡雜交技術(shù)、滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)等[14]。但目前由于我國(guó)醫(yī)療機(jī)構(gòu)受限于檢測(cè)人員、檢測(cè)設(shè)備及條件等因素，仍無(wú)法大范圍推廣上述各類(lèi)cccDNA檢測(cè)方法[15]。

7.小結(jié)

由本文可知，目前可用于乙肝病毒檢測(cè)的方法多樣，相關(guān)工作人員應(yīng)準(zhǔn)確掌握各類(lèi)檢查方法的操作要領(lǐng)、優(yōu)劣勢(shì)，結(jié)合本單位實(shí)際情況合理取舍乙肝病毒檢測(cè)方法，最終目的在于提高乙肝病毒檢測(cè)準(zhǔn)確性，值得今后實(shí)際工作中參考使用。