阿魏酸鈉對(duì)頸動(dòng)脈易損斑塊患者TLR4/NF-κB 信號(hào)通路及MMP-7、MMP-9 的影響

胡曉飛 朱先華 金笑平

急性缺血性腦卒中是最常見的卒中類型，占我國腦卒中的69.6%～70.8%[1]，具有高復(fù)發(fā)率、高致殘率的特點(diǎn)。頸動(dòng)脈易損斑塊的破裂和血栓的形成是引起缺血性腦卒中的主要原因之一[2-3]。影響斑塊易損性的因素主要包括免疫炎癥反應(yīng)、細(xì)胞外基質(zhì)降解、脂質(zhì)代謝異常、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡及血管新生等。研究提示Toll樣受體4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可導(dǎo)致一系列與易損斑塊相關(guān)的炎性因子的大量合成與釋放，在易損斑塊的發(fā)展中起重要作用[4]。基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是一種鋅離子依賴的蛋白水解酶，主要的功能是降解和重塑細(xì)胞外基質(zhì)，其參與了動(dòng)脈粥樣硬化、易損斑塊的形成和破裂的過程[5]。阿魏酸鈉是中藥當(dāng)歸和川芎的有效單體成分，先前的研究表明阿魏酸鈉可能從不同環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)發(fā)揮協(xié)同作用，通過調(diào)節(jié)血脂、抗氧化損傷、抑制炎癥細(xì)胞因子進(jìn)而干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展[6]。目前阿魏酸鈉對(duì)頸動(dòng)脈易損斑塊TLR4/NF-κB 信號(hào)通路的調(diào)節(jié)及對(duì)血清基質(zhì)金屬蛋白酶7（MMP-7）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）的影響尚不明確，本研究就此展開探討。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取2017 年1 月至2018 年6 月本院神經(jīng)內(nèi)科收治的輕型缺血性腦卒中且頸動(dòng)脈超聲檢查提示存在易損斑塊的患者174 例，其中男100 例，女74 例；年齡45～78（68.36±8.15）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）CT 或MRI檢查證實(shí)為急性缺血性腦卒中，且診斷符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》中關(guān)于急性缺血性腦卒中的標(biāo)準(zhǔn)[7]；（2）首次發(fā)病，且發(fā)病至入院時(shí)間＜48h；（3）臨床有經(jīng)驗(yàn)的超聲科醫(yī)師檢查發(fā)現(xiàn)存在頸動(dòng)脈易損斑塊，即斑塊呈等回聲、低回聲、混合回聲和潰瘍[8]。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并冠心病者；（2）有嚴(yán)重心、肝、腎功能障礙者；（3）有急、慢性炎癥性疾病者；（4）有腫瘤性疾病者；（5）有自身免疫性疾病者；（6）有血液系統(tǒng)疾病者；（7）2 周內(nèi)有創(chuàng)傷史或行外科手術(shù)者；（8）入院前1 個(gè)月內(nèi)服用過免疫抑制劑、激素類藥物者。采用隨機(jī)數(shù)字表法將患者分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組87 例。兩組患者性別、年齡、高血壓、糖尿病、高脂血癥、吸煙史、飲酒史比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 治療方法對(duì)照組患者入院后給予抗血小板聚集，降脂，控制血壓、血糖等常規(guī)基礎(chǔ)治療。實(shí)驗(yàn)組患者在常規(guī)基礎(chǔ)治療的同時(shí)口服阿魏酸鈉片（批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H51023608，規(guī)格：50mg/片，成都第一制藥有限公司），100mg/次，3 次/d。兩組均治療8 周。

1.3 標(biāo)本收集 所有患者均于入院當(dāng)天及治療結(jié)束后當(dāng)天同一時(shí)間點(diǎn)采血5ml，于ST40R 離心機(jī)（賽默飛爾科技有限公司）內(nèi)以2000r/min 離心10min，分離血清，分裝于EP 管內(nèi)，血清標(biāo)本保存于-80℃冰箱中備用。

1.4 血清學(xué)檢測 采用ELISA 法檢測所有患者血清超

敏-C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、TLR4、NF-κB、MMP-7、MMP-9 水平，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格參照試劑盒說明書操作，相關(guān)的試劑盒均購自上海捷瑞生物工程有限公司。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者治療前后炎癥指標(biāo)比較 治療前兩組患者血清hs-CRP、IL-6、TLR4 和NF-κB 水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。治療后實(shí)驗(yàn)組患者血清hs-CRP、IL-6、TLR4 和NF-κB 水平均較對(duì)照組下降，且兩組患者治療后血清hs-CRP、IL-6、TLR4 和NF-κB水平均較治療前下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表2。

2.2 兩組患者治療前后血清MMPs 水平比較 治療前兩組患者血清MMP-7 和MMP-9 水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。治療后實(shí)驗(yàn)組患者血清MMP-7 和MMP-9 水平均較對(duì)照組下降，且兩組患者治療后血清MMP-7 和MMP-9 水平均較治療前下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表3。

3 討論

目前易損斑塊被譽(yù)為心腦血管病領(lǐng)域的“罪犯斑塊”。研究表明易損斑塊不可預(yù)測的破裂導(dǎo)致了60%～65%的冠脈栓塞[9]及將近90%的缺血性腦卒中[10]。因此尋找能夠穩(wěn)定易損斑塊的藥物，對(duì)延緩、遏制我國心腦血管病發(fā)病率有著重要的意義。

影響動(dòng)脈粥樣斑塊易損性的內(nèi)在機(jī)制包括免疫炎癥、細(xì)胞外基質(zhì)的降解、氧化應(yīng)激反應(yīng)、脂質(zhì)代謝異常、巨噬單核細(xì)胞浸潤和泡沫細(xì)胞形成、內(nèi)皮功能損傷、新生血管形成等。其中炎癥及免疫防御是引起斑塊易損性的關(guān)鍵因素。TLR4 是炎癥及天然免疫系統(tǒng)的一種跨膜信號(hào)傳遞受體蛋白，在炎癥與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過程架起了一座橋梁。在多種內(nèi)源性配體的作用下，TLR4 可通過髓樣分化因子88（MYD88）依賴或非依賴的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，激活NF-κB，促使炎性因子的合成和釋放，活化巨噬細(xì)胞，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞凋亡，使斑塊內(nèi)基質(zhì)合成減少、降解增多，脂質(zhì)池?cái)U(kuò)大、纖維帽變薄，最終導(dǎo)致斑塊易于破裂及血栓形成[11]。hs-CRP 是炎癥的敏感指標(biāo)之一。IL-6 是炎性反應(yīng)中起核心作用的重要介質(zhì)，可致血清hs-CRP 濃度升高，纖維蛋白原合成增加，誘導(dǎo)血管活性物質(zhì)釋放、促進(jìn)凝血及血栓形成，并通過多種機(jī)制促使易損斑塊破裂[12-13]。

表1 兩組患者一般資料比較

表2 兩組患者治療前后炎癥指標(biāo)比較

表3 兩組患者治療前后血清MMPs 水平比較（μg/L）

阿魏酸鈉是中藥當(dāng)歸和川芎的主要活性成分?，F(xiàn)代藥理研究表明，阿魏酸鈉具有調(diào)節(jié)血脂、抗氧化、抗血小板聚集、抑制血管平滑肌細(xì)胞、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞等作用，同時(shí)也具有強(qiáng)大的抗炎作用。姚君等[14]研究發(fā)現(xiàn)阿魏酸鈉可以通過降低結(jié)腸NF-κB 表達(dá)及活性從而減輕腸道的炎癥反應(yīng)。龔?fù)竦萚15]研究表明阿魏酸鈉可通過抑制NFκB p65 核轉(zhuǎn)位從而減輕缺血/再灌注大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞炎癥反應(yīng)。胡瀟等[16]研究提示阿魏酸可降低TLRs 信號(hào)通路相關(guān)蛋白（TLR2、TLR4、MYD88、NF-κB p65）的表達(dá)從而抑制PM2.5 誘導(dǎo)的小鼠主動(dòng)脈炎癥。本研究發(fā)現(xiàn)在常規(guī)用藥的基礎(chǔ)上聯(lián)合阿魏酸鈉片治療頸動(dòng)脈易損斑塊患者，治療后其血清TLR4、NF-κB、CRP、IL-6 水平均較常規(guī)治療明顯降低。結(jié)合以往研究，筆者推測阿魏酸鈉可能通過抑制TLR4/NF-κB 信號(hào)通路從而減輕炎癥反應(yīng)。

MMPs 是鋅離子、鈣離子依賴性蛋白水解酶，其在細(xì)胞外基質(zhì)降解與重構(gòu)過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。MMP-7 是一種活性最強(qiáng)的蛋白多糖降解酶。研究表明MMP-7 可降解血管平滑肌細(xì)胞間起連接作用的粘連蛋白，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞凋亡，破壞粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性[17]。MMP-9 是由巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞分泌的MMPs，能對(duì)血管壁基底膜、細(xì)胞外基質(zhì)發(fā)揮降解作用，可促進(jìn)血管中膜平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜遷移，使覆蓋在斑塊表面的纖維帽遭到破壞，從而降低斑塊的穩(wěn)定性[18]。本研究發(fā)現(xiàn)阿魏酸鈉可明顯降低易損斑塊患者血清MMP-7、MMP-9 水平，從而可能增加斑塊的穩(wěn)定性。

綜上所述，本研究結(jié)果表明阿魏酸鈉可能通過抑制頸動(dòng)脈易損斑塊TLR4/NF-κB 的信號(hào)通路，降低炎癥因子hs-CRP、IL-6 水平和血清MMP-7、MMP-9 的表達(dá)，從而可能增加頸動(dòng)脈易損斑塊的穩(wěn)定性。