全自動(dòng)生化分析儀吸樣致樣本污染對(duì)乙肝病毒檢測(cè)的影響

丹東市婦女兒童醫(yī)院（丹東市中心醫(yī)院婦兒院區(qū)）醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科 （遼寧 丹東 118002）

內(nèi)容提要：目的：分析全自動(dòng)生化分析儀在樣本交叉污染情況下檢測(cè)乙型病毒性肝炎的結(jié)果，評(píng)價(jià)臨床是否可共用標(biāo)本進(jìn)行免疫生化檢測(cè)。方法：從2019年6月～2020年6月本院受檢血液樣本中選擇30例擁有不同含量的HBsAg的乙型病毒性肝炎陽(yáng)性血液標(biāo)本，同時(shí)同樣選擇30例乙肝病毒檢測(cè)結(jié)果為陰性的血液樣本，共同作為本次研究觀察對(duì)象。依據(jù)血液標(biāo)本采集時(shí)間順序分別在分析儀監(jiān)測(cè)前提下，分析血液標(biāo)本被輕度污染后酶標(biāo)儀HBsAg含量及HBV-DNA含量，將檢測(cè)結(jié)果與被污染前數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比，分析吸樣污染后對(duì)HBsAg及HBV-DNA的結(jié)果影響。結(jié)果：樣本交叉污染前后，生化分析儀提示HBsAg數(shù)據(jù)結(jié)果波動(dòng)不大，而PCR定量檢測(cè)時(shí)可見(jiàn)HBVDNA含量有較大波動(dòng)。結(jié)論：臨床工作中全自動(dòng)生化儀器對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)時(shí)可能造成樣品被污染情況發(fā)生，但是其檢測(cè)結(jié)果只對(duì)PCR定量檢測(cè)HBV-DNA時(shí)影響較大，而對(duì)酶免HBsAg檢測(cè)結(jié)果并無(wú)明顯影響，可見(jiàn)，檢測(cè)儀器自身的狀態(tài)決定樣本可能受到污染的程度，所以在計(jì)劃應(yīng)用同一份標(biāo)本進(jìn)行生化和免疫檢測(cè)時(shí)，應(yīng)提前評(píng)估生化儀對(duì)檢測(cè)免疫的影響程度，再?zèng)Q定是否采用同一樣本進(jìn)行。

全自動(dòng)生化分析儀對(duì)標(biāo)本交叉檢測(cè)時(shí)允許絕對(duì)誤差為0.32～0.7mmol/L，相關(guān)報(bào)道指出，在絕對(duì)誤差范圍內(nèi)的交叉污染不會(huì)影響一般生化檢測(cè)項(xiàng)目的實(shí)際指標(biāo)[1]。部分學(xué)者研究指出因全自動(dòng)生化儀具備自動(dòng)清洗功能，因此在標(biāo)本交叉檢測(cè)時(shí)如果自動(dòng)清洗功能仍具備，那么在免疫及生化檢測(cè)共有同一標(biāo)本對(duì)HBV檢測(cè)結(jié)果影響甚微[2]。作者用酶免法對(duì)標(biāo)本HbsAg值進(jìn)行檢測(cè)，采用PCR定量分析HBV-DNA數(shù)值，以研究臨床診斷時(shí)是否可以生化免疫項(xiàng)目共用一個(gè)血液樣本，具體匯報(bào)如下。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

血液樣本選自2019年6月～2020年6月本院收治患者，共選取60份，其中30份為明確感染乙肝病毒樣本，分大三陽(yáng)、小三陽(yáng)、弱陽(yáng)性等20份；將三組分別編號(hào)D1-D10，X1-X10，R1-R10，其中大小三陽(yáng)組即D組和X組HbsAg含量均為陽(yáng)性，且S/CO值均為30～50，弱陽(yáng)性組及R組標(biāo)本HbsAg含量亦為陽(yáng)性且S/CO值＜10。選取的60分標(biāo)本HBV-M均為非陽(yáng)性，對(duì)應(yīng)的編號(hào)分別為d1-d10，x1-x10，r1-r10。所有入選標(biāo)本，均多次檢測(cè)確保指標(biāo)符合研究要求[3]。

儀器設(shè)備：儀型號(hào)為T(mén)OSHIBA TBA-40FR，Wellscan全自動(dòng)酶標(biāo)儀，美國(guó)ABI 7500PCR儀。

1.2 方法

以上標(biāo)本經(jīng)生化分析儀操作前，先酶標(biāo)平行3次檢測(cè)，經(jīng)酶標(biāo)儀讀數(shù)取均值，記錄數(shù)據(jù)。同時(shí)，進(jìn)行平行3次PCR定量檢測(cè)HBV-DNA，取均值，記錄數(shù)據(jù)。

1.3 觀察指標(biāo)

檢測(cè)并記錄污染前后酶標(biāo)儀HBsAg的結(jié)果，HBV-DNA的含量，最后把數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行分析對(duì)比，評(píng)價(jià)全自動(dòng)生化分析儀的工作時(shí)存在的下交叉污染程度，以判斷對(duì)樣本檢驗(yàn)結(jié)果影響的程度[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 20.0分析統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)樣本檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)一運(yùn)算統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)部分應(yīng)用±s表示，以t為計(jì)量資料檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料的檢驗(yàn)則通過(guò)χ2計(jì)算，當(dāng)數(shù)據(jù)結(jié)果提示P＜0.05時(shí)判斷為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.結(jié)果

HBV-M血清樣品生化儀檢測(cè)前后HBsAg酶標(biāo)結(jié)果對(duì)比時(shí)，各組HBsAg數(shù)據(jù)結(jié)果波動(dòng)不大，而PCR定量檢測(cè)時(shí)可見(jiàn)HBV-DNA含量有較大波動(dòng)。

3.討論

由此可見(jiàn)，全自動(dòng)化分析儀在檢測(cè)時(shí)候可能對(duì)血液樣品造成一定程度污染，在陰性血液樣本HBV-DNA檢測(cè)過(guò)程中可以明顯地體現(xiàn)出來(lái)，但是針對(duì)于酶免HBsAg讀數(shù)中的陽(yáng)性標(biāo)本HBV-DNA定量影響卻不明顯[5]。造成這個(gè)現(xiàn)象的原因可能有多種因素，其中試驗(yàn)設(shè)計(jì)本身也可能存在缺陷，其中酶免HBsAg用樣品量（50μL）數(shù)值過(guò)大。研究中，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)交叉污染對(duì)酶免HBsAg標(biāo)值的干擾，結(jié)果表明是在合理范圍內(nèi)的，不過(guò)如果檢測(cè)過(guò)程中存在吸樣后不清洗或者清洗不充分情況下，就可能存在較大污染，嚴(yán)重干擾實(shí)際檢測(cè)結(jié)果[6]。研究指出ELISA檢測(cè)靈敏度較高，但是依然存在假陽(yáng)性可能[7]。不同廠家不同型號(hào)的儀器，樣品自身可能攜帶的污染程度也有較大區(qū)別，因此工作中應(yīng)對(duì)儀器進(jìn)行必要的維護(hù)和清潔保養(yǎng)。污染率都在1%以下，都不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)帶來(lái)很大的污染，但是會(huì)造成免疫分析假陽(yáng)性。因此，生化項(xiàng)目與免疫分析不宜共用標(biāo)本，如果迫不得已，需要根據(jù)自身實(shí)際情況進(jìn)行設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。確定全自動(dòng)生化分析儀樣本攜帶污染的影響程度并不是很大的時(shí)候，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。