乳腺癌預(yù)防模型研究進(jìn)展

徐格格 張宇 劉維芳 石愛(ài)平 (吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院乳腺外科，吉林 長(zhǎng)春 130021)

隨著晚育少育的趨勢(shì)上升，世界范圍內(nèi)乳腺癌的發(fā)病率在不斷攀升〔1〕，在我國(guó)乳腺癌是女性最常見(jiàn)的癌癥，也是中國(guó)女性第六大癌癥死因〔2〕。根據(jù)美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)數(shù)據(jù)，目前全世界公認(rèn)的乳腺癌預(yù)防手段主要是調(diào)整生活方式，包括減少酒精攝入、維持健康體重和化學(xué)藥物預(yù)防〔3〕，方法有限，因此對(duì)于乳腺癌預(yù)防的研究急需有較大突破和進(jìn)展?？蓱?yīng)用于乳腺癌預(yù)防性研究的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ涂梢员ＷC實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性、客觀性和有效性，從而能對(duì)乳腺癌進(jìn)行有效預(yù)防，降低乳腺癌發(fā)病率?，F(xiàn)階段大多數(shù)研究都是通過(guò)建立動(dòng)物模型或特定細(xì)胞株來(lái)研究乳腺癌在體內(nèi)發(fā)生發(fā)展的規(guī)律及檢測(cè)藥物預(yù)防腫瘤發(fā)生的有效性，現(xiàn)將可用于預(yù)防乳腺癌的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ途C述如下。

1 體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/h2>

1.1雌激素誘導(dǎo)正常乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化 雌激素作為一個(gè)重要的影響因子調(diào)控著乳腺的發(fā)生發(fā)育，同時(shí)也被看作是乳腺癌發(fā)生的誘因之一〔4〕。體內(nèi)雌激素水平過(guò)高，月經(jīng)開(kāi)始早，停止晚造成的雌激素暴露時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，都大大增加了乳腺癌患病的風(fēng)險(xiǎn)，因?yàn)槿橄傧袤w在雌激素的作用下，可能由普通增生變?yōu)槟[瘤形成，這與雌激素受體本身調(diào)控細(xì)胞增殖有關(guān)〔5〕。雌激素也可以促進(jìn)細(xì)胞具有侵襲性，轉(zhuǎn)移性，并且這種改變與調(diào)控細(xì)胞增殖能力無(wú)關(guān)〔6〕。此外，雌激素在體內(nèi)、外均被證實(shí)具有基因毒性，可導(dǎo)致多種類型的DNA損傷，從而導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)生〔7〕。

Fernandez等〔8〕發(fā)現(xiàn)，用70 nmol/L的雌二醇及其代謝產(chǎn)物羥雌二醇、羥基雌二醇處理密歇根癌癥基金會(huì)(MCF)-10F細(xì)胞，每周兩次，共2 w，處理后傳代6～12次，可以誘發(fā)正常乳腺上皮細(xì)胞基因突變從而致癌。Russo等〔9〕用雌二醇在傳代前三次處理MCF-10F細(xì)胞，滿1 w后再處理48 h，傳代10次后的細(xì)胞4號(hào)染色體缺失，細(xì)胞特性表現(xiàn)為侵襲能力增強(qiáng)，成管能力增加，發(fā)生了細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，再次印證雌激素具有致癌性，并可依此建模。

1.2培養(yǎng)出的可移植細(xì)胞系 MCF-10A細(xì)胞系是來(lái)源于人的永生化正常乳腺上皮細(xì)胞系，激素受體陰性，人表皮生長(zhǎng)因子受體(Her)-2基因擴(kuò)增陰性，轉(zhuǎn)染T24Ha-ras后可發(fā)生細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化成為MCF-10AT細(xì)胞系，侵襲能力增加，可視為發(fā)生癌前病變，轉(zhuǎn)染成功后可直接進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，用于試驗(yàn)抗腫瘤藥物及乳腺癌發(fā)生機(jī)制的研究，也可移植于小鼠體內(nèi)建立乳腺癌癌前病變動(dòng)物模型行體外實(shí)驗(yàn)〔10〕。

乳腺癌預(yù)防研究的體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭饕獮榧?xì)胞實(shí)驗(yàn)，主要是加入藥物或給予乳腺癌發(fā)生條件加以誘導(dǎo)，使正常的乳腺上皮細(xì)胞獲得乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)特性，例如細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。本方法的優(yōu)點(diǎn)是可對(duì)影響腫瘤發(fā)生的單一因素進(jìn)行控制，干擾因素較少，非常適合研究乳腺腫瘤發(fā)生的機(jī)制，尋找乳腺癌預(yù)防性研究的切入點(diǎn)，也適用于抗腫瘤藥物的研究，尤其是篩藥實(shí)驗(yàn)，相較于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)花費(fèi)低、操作更簡(jiǎn)便；應(yīng)用人源性細(xì)胞株進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，相比動(dòng)物模型，物種差異性更低，更貼近人類乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)特征。

2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/h2>

2.1自發(fā)性乳腺癌模型 自發(fā)性乳腺癌模型是指未經(jīng)人工手段干預(yù)，某些品系的實(shí)驗(yàn)鼠類到達(dá)一定年齡階段可自然發(fā)生乳腺癌或者通過(guò)遺傳育種技術(shù)培養(yǎng)出具有相同特點(diǎn)的一類動(dòng)物模型。自發(fā)性乳腺癌動(dòng)物模型多采用近交系小鼠，目前培育出的品系主要有C3H系、TA2系、SNH系和615近交系等，其中C3H小鼠、TA2小鼠和SNH小鼠為高癌系小鼠，615近交系小鼠為低癌系小鼠。SNH小鼠是由兄妹交配維持下來(lái)的一種自發(fā)性乳腺癌動(dòng)物模型，其最突出的特點(diǎn)為短時(shí)間內(nèi)癌變率高，出生4個(gè)月時(shí)即可出現(xiàn)癥狀，12個(gè)月時(shí)發(fā)病率達(dá)100%。目前SNH小鼠是研究乳腺癌發(fā)病機(jī)制、多級(jí)預(yù)防和治療的良好模型。已有文獻(xiàn)報(bào)道，用不同成分飼料喂養(yǎng)SNH小鼠可影響其腫瘤的發(fā)病率，故將此動(dòng)物模型投入實(shí)驗(yàn)中需要考慮飼料中營(yíng)養(yǎng)成分的影響〔11〕。TA2小鼠是天津醫(yī)科大學(xué)在1963年繼TA1小鼠培育出的自發(fā)性乳腺癌模型，基因表型穩(wěn)定，乳腺癌發(fā)病率高，且病理學(xué)形態(tài)特征與常見(jiàn)的人浸潤(rùn)性乳腺癌相似，而免疫表型與人類三陰性乳腺癌非常相似，因而TA2小鼠是一個(gè)良好的乳腺癌動(dòng)物模型，能最大限度地模擬腫瘤在人體內(nèi)發(fā)生發(fā)展的過(guò)程。并且，雌孕激素可以增加TA2小鼠乳腺癌發(fā)病率，而妊娠期小鼠體內(nèi)有較高水平的雌孕激素，所以經(jīng)產(chǎn)小鼠的發(fā)病率高于處女鼠。C3H小鼠6～10個(gè)月時(shí)乳腺癌自發(fā)率高達(dá)85%～100%，特殊的是乳腺癌通過(guò)乳汁傳播，而非胎盤(pán)傳播或垂直傳播。615近交系小鼠是由我國(guó)自主培育的，具有較易飼養(yǎng)繁殖，性情溫順的特點(diǎn)。615小鼠不僅可自然發(fā)生乳腺癌，還會(huì)發(fā)生肺腺癌和惡性淋巴瘤等，小鼠在15～18個(gè)月時(shí)乳腺癌的發(fā)病率為6.7%，且發(fā)病全為經(jīng)產(chǎn)雌鼠，在615小鼠的自發(fā)瘤中位于第二位。

自發(fā)性乳腺癌模型最大的特點(diǎn)即無(wú)需任何處理，到達(dá)一定年齡階段動(dòng)物可自然發(fā)生乳腺癌，這一特點(diǎn)在目前已有的乳腺癌發(fā)生模型中與人類發(fā)病最為相似。因此，目前自發(fā)性乳腺癌模型是體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中最為適用于研究乳腺癌的病因、發(fā)生發(fā)展和防治，尤其是預(yù)防性用藥。但是自發(fā)性乳腺癌動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中易受到各種非實(shí)驗(yàn)因素的影響，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏倚大，并且花費(fèi)較多。

2.2誘發(fā)性動(dòng)物模型 誘發(fā)性動(dòng)物模型是指用不同劑量的物理、化學(xué)或生物因素在不同時(shí)長(zhǎng)下處理動(dòng)物，誘導(dǎo)其發(fā)生乳腺癌。目前最常用的方法為利用化學(xué)制劑誘導(dǎo)乳腺癌動(dòng)物模型建立，二甲基苯甲酸烷(DMBA)和N-甲基-N-亞硝基脲(MNU)兩種致癌劑對(duì)乳腺組織有較高的選擇性和特異性，因而最為常用，本文主要介紹這兩種化學(xué)致癌劑建立乳腺癌模型的特點(diǎn)。

作為致癌劑，DMBA進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)需要經(jīng)過(guò)羥基化、環(huán)氧化等代謝過(guò)程最終產(chǎn)生致癌物,才能使細(xì)胞中原癌基因活化,誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生，而MNU則可直接在細(xì)胞內(nèi)富集損傷DNA，使基因發(fā)生點(diǎn)突變，誘導(dǎo)大鼠發(fā)生腫瘤〔12〕。可用于化學(xué)誘導(dǎo)劑建模的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物包括大鼠、小鼠、兔和犬等，其中大鼠飼養(yǎng)方便，成本較低且成瘤周期較短，故最常選用。SD大鼠、Wistar大鼠、Zucker大鼠和Fischer 344大鼠都可用于建模，但考慮到飼養(yǎng)條件、經(jīng)濟(jì)方面、實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)及購(gòu)買(mǎi)方便性等因素，在我國(guó)最常用于建模的大鼠品系為SD大鼠和Wistar大鼠。SD大鼠對(duì)MNU敏感性相對(duì)較高，因而是最適合于MNU誘導(dǎo)建立乳腺癌模型的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

化學(xué)致癌劑一般采用口服(灌胃)、局部涂抹(乳房皮膚表面)、皮下注射、腹腔注射及靜脈注射的方式給藥。MNU在胃腸道給藥毒性大〔12〕，口服途徑給藥致死率較高，不建議采用灌胃方式給藥，多采用尾靜脈注射或腹腔注射的方式。DMBA可通過(guò)多種方式給藥，DMBA是脂溶性物質(zhì),灌胃給藥時(shí)需將其溶解于植物油或吐溫，因?yàn)槠浣?jīng)過(guò)體內(nèi)代謝后才能轉(zhuǎn)變?yōu)橹掳﹦┌l(fā)揮作用。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇正確的鼠齡建立乳腺癌模型十分重要。大鼠哺乳期約在4周齡時(shí)結(jié)束，此時(shí)大鼠乳腺的導(dǎo)管迅速生長(zhǎng)、形成分支，終末乳腺導(dǎo)管和終末芽體開(kāi)始出現(xiàn)，上皮細(xì)胞增生十分活躍，細(xì)胞周期較短，因此對(duì)化學(xué)致癌劑的易感性較高，待到大鼠6周齡進(jìn)入到性成熟期，導(dǎo)管上皮的生長(zhǎng)速度與4周齡相比較為緩慢，對(duì)化學(xué)致癌劑的敏感性也相對(duì)下降，但是大鼠體內(nèi)雌激素水平較高，因而可以維持較高的乳腺癌發(fā)生率，若大鼠經(jīng)產(chǎn)和哺乳后，乳腺導(dǎo)管結(jié)構(gòu)則分化良好，此時(shí)對(duì)致癌劑的敏感性降到最低〔13〕。

目前多選用性成熟期的大鼠進(jìn)行誘導(dǎo)，DMBA給藥8～12 w即可發(fā)生乳腺癌，發(fā)生率接近100%，并且在腫瘤生長(zhǎng)的過(guò)程中伴隨大鼠體重下降。兩種化學(xué)致癌劑誘發(fā)建立的動(dòng)物模型皆為激素受體陽(yáng)性乳腺癌，但是MNU誘導(dǎo)出的乳腺癌模型Ki-67更高，侵襲能力更強(qiáng)〔14〕。

除應(yīng)用性成熟期大鼠建立化學(xué)誘導(dǎo)性乳腺癌模型外，Thompson等〔15〕給予3周齡未性成熟大鼠注射MNU，目的是觀察不依賴大鼠體內(nèi)的性激素軸化學(xué)致癌劑能否建立乳腺癌模型，在用藥35 d后，60%大鼠的乳腺長(zhǎng)出了腫物，并且>99%的腫物為包括腺癌、浸潤(rùn)癌和導(dǎo)管原位癌在內(nèi)多種類型的乳腺癌，而用同樣的方法DMBA誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生的多為良性病變。這一結(jié)果證明了除性激素外或許有其他因素可以影響化學(xué)致癌劑作用下大鼠乳腺腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。

MNU誘導(dǎo)的大鼠乳腺腫瘤與人類的腫瘤組織起源相似〔16〕，多為導(dǎo)管上皮的病變，并且有報(bào)道證實(shí)即使在已行雙側(cè)卵巢切除術(shù)的大鼠體內(nèi)，乳腺終末導(dǎo)管依舊可以延長(zhǎng)生長(zhǎng)到脂肪墊中〔7〕。為了進(jìn)一步驗(yàn)證性激素在化學(xué)致癌劑誘導(dǎo)未性成熟大鼠腫瘤發(fā)生過(guò)程中的作用，Thompson等〔15〕給予注射過(guò)MUN 1 w后的3周齡大鼠雙側(cè)卵巢切除術(shù)，發(fā)現(xiàn)性激素可以促進(jìn)乳腺腫瘤從癌前病變向癌變發(fā)展，并且其發(fā)生的腫瘤多為非激素依賴性。鑒于在未發(fā)育性成熟大鼠體內(nèi)，MNU誘導(dǎo)發(fā)生的惡性腫瘤比例高、DMBA誘導(dǎo)發(fā)生的良性腫瘤多及性激素在腫瘤由良性向惡性發(fā)展的過(guò)程中的促進(jìn)作用，Wang等〔17〕選用4周齡大鼠，利用DMBA誘導(dǎo)加5 d的外源注射性激素模擬正常的月經(jīng)周期，建立了穩(wěn)定的乳腺癌癌前病變模型。

MNU單一給藥在藥量為50 mg/kg時(shí)，SD大鼠發(fā)生的乳腺癌具有除起源與人類乳腺癌相似的之外的另一個(gè)很重要特征——腫瘤具有異質(zhì)性，這為我們研究腫瘤的發(fā)生發(fā)展提供了一個(gè)良好的模型。據(jù)報(bào)道，MUN還能改變大鼠肉瘤(Ras)/蘇氨酸基酶(Raf)/絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷酸酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信號(hào)通路，并引起p53,c-kit,雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和 c-myc基因的表達(dá)發(fā)生變化〔18〕。另外，相比DMBA，MNU雖然可以成功誘導(dǎo)雄鼠發(fā)生乳腺癌，但產(chǎn)生的腫瘤是非激素依賴性，Her-2陰性，與人類男性乳腺癌常見(jiàn)的激素依賴性類型不同，因此可能無(wú)法作為男性乳腺癌的可靠模型〔19〕。Kratzke等〔20〕將DMBA和MNU原本的劑量減少，將二者同時(shí)給予SD大鼠建立乳腺癌模型，發(fā)現(xiàn)二者在誘導(dǎo)乳腺癌發(fā)生上具有協(xié)同作用，可以在更短時(shí)間內(nèi)使SD大鼠發(fā)生腫瘤。

化學(xué)致癌劑誘導(dǎo)建立乳腺癌動(dòng)物模型操作簡(jiǎn)單，條件可控，誘導(dǎo)病變過(guò)程較為確切，便于我們根據(jù)不同的需求選擇時(shí)間點(diǎn)觀察。誘導(dǎo)方法多樣，建立的乳腺癌動(dòng)物模型也多樣，包括激素依賴性和非激素依賴性腫瘤，且由于其與人類發(fā)生的乳腺癌有較多相似之處，因而常用于乳腺癌病因?qū)W和預(yù)防性研究。早些年，化學(xué)致癌劑建立模型周期較長(zhǎng)、個(gè)體成瘤差異大，人們普遍認(rèn)為此模型不適用于抗腫瘤藥物的研究〔21〕，然而近些年來(lái)，由于與其他乳腺癌模型相比，化學(xué)誘導(dǎo)性模型更為穩(wěn)定、造價(jià)較低且模型更為可靠，一些抗腫瘤藥物尤其是天然成分研究的實(shí)驗(yàn)都選擇此模型〔22～24〕。

2.3可移植動(dòng)物模型 可移植性動(dòng)物模型是指將惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞、癌前病變或腫瘤細(xì)胞、組織移植到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)，建立出的動(dòng)物模型。根據(jù)移植物的來(lái)源，可移植動(dòng)物模型又分為同種移植動(dòng)物模型和異種移植動(dòng)物模型。此模型一般用于疾病發(fā)生機(jī)制和藥物篩選的研究。

2.3.1同種移植 同種移植動(dòng)物模型為用已建立好的鼠類乳腺癌細(xì)胞株或組織移植到小鼠體內(nèi)，以建立出小鼠乳腺癌模型。目前同種移植建立的小鼠乳腺癌模型由于植入小鼠體內(nèi)后無(wú)癌前病變的狀態(tài)，不適用于乳腺癌的預(yù)防性研究。

2.3.2異種移植 異種移植建立乳腺癌動(dòng)物模型的方法是將人源乳腺癌細(xì)胞株或發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的細(xì)胞株移植到免疫缺陷小鼠(SCID)或裸鼠體內(nèi)，使其發(fā)展成為乳腺癌。目前最常用的細(xì)胞株多為MCF-7、MDA-MB-231和SK-BR-3，受體表達(dá)分別為激素受體陽(yáng)性、三陰性和Her-2陽(yáng)性，移植成功率較高，成本較低，可以保證成瘤部位的特異性，實(shí)驗(yàn)周期與其他建模方法相比較短，但是由于無(wú)法觀察到腫瘤在體內(nèi)發(fā)生惡變的過(guò)程，也不適用于研究乳腺癌的預(yù)防性研究。除乳腺癌細(xì)胞株外，正常乳腺上皮細(xì)胞經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)染后可獲得一些惡性細(xì)胞具有的特性，也可以用于異種移植建立模型。比如，發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化行為的MCF-10AT細(xì)胞系，可移植于裸鼠體內(nèi)發(fā)生非典型增生、原位癌，最終有25%的模型發(fā)展成浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，從而建立乳腺癌癌前病變動(dòng)物模型，MCF-10A本身為激素受體陰性的細(xì)胞株，經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)染后受體表達(dá)不發(fā)生變化，因此目前此動(dòng)物模型是良好的用于研究預(yù)防三陰性乳腺癌的模型。

應(yīng)用移植性動(dòng)物模型成功率與其他模型相比較高，且所需時(shí)間較短。但是利用免疫缺陷小鼠建模，反應(yīng)體系中缺少機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的免疫反應(yīng)，并非良好的乳腺癌機(jī)制預(yù)防性研究模型；裸鼠本身造價(jià)較高，對(duì)飼養(yǎng)條件要求也高，為研究乳腺癌的預(yù)防性實(shí)驗(yàn)增加了極大的阻力；同時(shí)目前可用于移植性建立乳腺癌癌前病變的細(xì)胞株單一，可研究的預(yù)防乳腺癌亞型也單一，并非全面可靠的乳腺癌預(yù)防性研究模型。

2.4轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型 近年來(lái)，轉(zhuǎn)基因技術(shù)不斷發(fā)展，技術(shù)逐漸成熟，現(xiàn)今已有多種小鼠乳腺癌模型可應(yīng)用于乳腺癌病因及預(yù)防性研究中。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是指將目的外源基因或特定DNA片段導(dǎo)入動(dòng)物受精卵中，使外源基因與動(dòng)物本身基因整合，并且穩(wěn)定地遺傳給后代的一類動(dòng)物〔25〕。

現(xiàn)已知有一些病毒和蛋白可作為啟動(dòng)因素來(lái)促進(jìn)原癌基因在小鼠乳腺中表達(dá)，比如小鼠乳腺腫瘤病毒(MMTV-LTR)、乳清酸性蛋白(WAP)和小鼠金屬硫蛋白(MT)1〔26〕。它們可以促進(jìn)和調(diào)控某些原癌基因在小鼠乳腺中表達(dá)，例如原癌基因包括瘤中間T抗原(PyMT)、Harvery鼠肉瘤病毒ras基因(Ha-ras)、Wnt-1、Her-2/ErbB2/Neu和c-Myc等。若啟動(dòng)子將原癌基因在動(dòng)物體內(nèi)激活使其表達(dá)，則“轉(zhuǎn)基因”成功。

原癌基因種類豐富、總體數(shù)量相對(duì)較多，在建立轉(zhuǎn)基因小鼠時(shí)可只激活一種，稱為單一的轉(zhuǎn)基因小鼠，比較常用的是MMTV-PyMT小鼠、MMTV-Wnt-1小鼠和MMTV-ErbB2小鼠，其發(fā)病年齡分別在5 w、4～7個(gè)月和5～10個(gè)月；也可同時(shí)激活兩種到三種的原癌基因，稱為復(fù)合轉(zhuǎn)基因小鼠，例如MMTV-neu，ras，myc小鼠，其發(fā)病年齡相對(duì)MMTV-ErbB2小鼠更早，約為72 d〔26〕。有報(bào)道證明MMTV-Wnt-1小鼠體內(nèi)乳腺細(xì)胞內(nèi)Wnt-1基因高水平表達(dá)，可以引起乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化〔27〕，進(jìn)而發(fā)展成乳腺癌。MMTV-ErbB2小鼠體內(nèi)，ErbB2信號(hào)通路被激活后通過(guò)調(diào)節(jié)乳腺干細(xì)胞和乳腺祖細(xì)胞的分布誘導(dǎo)乳腺癌的發(fā)生〔28〕，而在其癌前病變的乳腺組織中，管腔型祖細(xì)胞分布明顯增加〔29〕。Maglione〔30〕等系統(tǒng)評(píng)估了MMTV-PyMT小鼠發(fā)生乳腺癌前早期發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的病理特征，并對(duì)各個(gè)階段乳腺上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)能力進(jìn)行了比較，充分證明了MMTV-PyMT小鼠可以用于乳腺癌的預(yù)防性研究。

由于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物發(fā)病時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，為了縮短建模所耗費(fèi)的時(shí)間，將攜帶目的基因的病毒載體分離提純后注入轉(zhuǎn)基因小鼠乳腺腺管內(nèi)可以使病變提早發(fā)生。Siwko等〔31〕將K19-tva轉(zhuǎn)基因小鼠的第2，3，4對(duì)乳頭剪掉，將禽肉瘤白血病病毒(ALSV-PyMT)載體注入腺體管腔中，并通過(guò)在腹部的側(cè)切口觀察病毒載體是否注入成功，在30 d后小鼠可發(fā)生乳腺非典型增生和導(dǎo)管原位癌樣的癌前病變，3.3個(gè)月后發(fā)生可觸及的浸潤(rùn)性癌灶，且腫瘤類型為激素受體陰性。Du等〔32〕將禽肉瘤白血病逆轉(zhuǎn)錄病毒(RACS-PyMT)注入6周齡的轉(zhuǎn)基因小鼠的乳腺管腔內(nèi)，平均12.5 d后小鼠即可出現(xiàn)多灶腫瘤。

目前利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)可建立符合乳腺癌四個(gè)亞型的模型，這為我們較為全面的研究乳腺癌發(fā)生發(fā)展提供了條件。然而鼠和人類的癌變發(fā)生發(fā)展過(guò)程并不完全相同，因此轉(zhuǎn)基因動(dòng)物并不能完全反映出人類乳腺癌的類型和特征，更不能保證在動(dòng)物體內(nèi)有效的抗腫瘤藥在人體內(nèi)也有效。

3 預(yù)防的節(jié)點(diǎn)

乳腺癌的發(fā)生是一個(gè)連續(xù)、動(dòng)態(tài)的過(guò)程，從正常的乳腺上皮細(xì)胞、增生、非典型增生、原位癌，終有約25%發(fā)展為不同類型的浸潤(rùn)性癌。一般認(rèn)為非典型增生包括三種，導(dǎo)管上皮非典型性增生，小葉非典型性增生和平坦型上皮非典型性增生，前兩種被認(rèn)為具有可以進(jìn)展為乳腺癌的危險(xiǎn)狀態(tài)〔33〕，也被稱為癌前病變。癌前病變是介于乳腺良性病變與乳腺癌中間的臨界狀態(tài)，目前認(rèn)為此狀態(tài)可逆，因此也是乳腺癌預(yù)防研究的重要節(jié)點(diǎn)，本文認(rèn)為此節(jié)點(diǎn)應(yīng)為預(yù)防手段干預(yù)乳腺癌發(fā)生的最后節(jié)點(diǎn)。

根據(jù)目前查閱到的乳腺癌預(yù)防性研究實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)預(yù)防的節(jié)點(diǎn)總結(jié)如下：在體外實(shí)驗(yàn)中，給予預(yù)防手段應(yīng)在誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化前或同時(shí)與誘導(dǎo)劑應(yīng)用，對(duì)于MCF-10AT細(xì)胞可直接給予預(yù)防手段，觀察細(xì)胞的增殖能力、遷移能力和侵襲能力，也可以檢測(cè)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化；化學(xué)誘導(dǎo)性模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，可為給化學(xué)誘導(dǎo)劑前5～10 d和給藥后幾日內(nèi)加入預(yù)防手段，而后觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的癌前病變檢出率和成瘤率〔34,45〕。

4 結(jié) 語(yǔ)

對(duì)于乳腺癌，目前被公認(rèn)的預(yù)防措施主要是調(diào)整生活方式，減少酒精攝入、控制健康體重和化學(xué)藥物的預(yù)防。根據(jù)前瞻性實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，能有效預(yù)防乳腺癌的藥物主要為雌激素受體拮抗劑他莫昔芬和雷洛昔芬，但雌激素受體拮抗劑僅可預(yù)防激素受體陽(yáng)性乳腺癌發(fā)生，Her-2陽(yáng)性乳腺癌和三陰型乳腺癌兩種相對(duì)于預(yù)后較差的乳腺癌至今仍無(wú)有效的預(yù)防措施。乳腺癌的預(yù)防性研究方面仍有很多空白，因此，尋找建立合適的可應(yīng)用于乳腺癌預(yù)防性研究的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭陵P(guān)重要。

要研究如何預(yù)防乳腺癌，顧名思義，就要對(duì)乳腺癌發(fā)生之前的病理變化進(jìn)行觀察和研究。乳腺組織在發(fā)生癌前病變后可能會(huì)很快地進(jìn)入癌變狀態(tài)，因此癌前病變是乳腺癌發(fā)生前的重要節(jié)點(diǎn)，也是觀察和研究最后的節(jié)點(diǎn)。所以，用于乳腺癌預(yù)防性研究的模型應(yīng)至少具有發(fā)生癌前病變的過(guò)程。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)者應(yīng)在了解各種模型的優(yōu)缺點(diǎn)之后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行選擇。無(wú)論是細(xì)胞模型還是動(dòng)物模型都有其局限性，不能完全模擬人類乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，目前仍無(wú)一種可以全面反映人類乳腺癌的模型，因此更簡(jiǎn)便、更經(jīng)濟(jì)、更符合實(shí)驗(yàn)要求的乳腺癌預(yù)防模型的建立將在研究乳腺癌的預(yù)防方面發(fā)揮巨大的作用，從而有望延長(zhǎng)人類的預(yù)期壽命、提高人類的生活質(zhì)量。