短穗兔耳草化學(xué)成分的研究

王 陸，張紅陽，史亞夫，李 敏，慕澤涇，鐘國躍，朱繼孝，王洪玲

（江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與民族藥研究中心，江西南昌 330004）

短穗兔耳草Lagotis brachystachysMaxim.為玄參科兔耳草屬植物,用于治療血熱性化膿癥、肺胃淤血、黃水病、膿瘍等癥狀［1］；具有保肝［2-4］、降尿酸［5］、抑菌［6］作用,其化學(xué)類型主要有環(huán)烯醚萜［7-8］、黃酮［8-11］、苯丙素苷類［12］等。課題組前期從中分離得到17個化合物［8,12］,為了進(jìn)一步研究短穗兔耳草的化學(xué)成分,本實驗從中分離得到10個化合物,其中化合物4～8均為首次從該植物中分離得到的。

1 材料

Finnigan TSQ 700型質(zhì)譜儀（美國Finnigan公司）；Bruker AX-600核磁共振波譜儀（德國Bruker公司）；CP-214電子天平（上海奧豪斯儀器有限公司）；WB-2000型水浴鍋、R-1001VN型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；ZF-I型三用紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；DZF-6050型真空干燥箱（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司）；島津LC-20AT高效液相色譜儀 （日本島津公司）；Agilent 1260高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；YMC-pack ODS-A半制備柱（250 mm × 10 mm,5 μm,日本YMC公司）；200～300目硅膠（青島海洋化工有限公司）；HSGF-254薄層層析硅膠板（煙臺市化學(xué)工業(yè)研究所）。分析純丙酮、甲醇、二氯、石油醚、乙酸乙酯等（西隴化工股份有限公司）；色譜純甲醇、乙腈（美國天地有限公司）；超純水（江西鼎技科學(xué)儀器有限公司）。

短穗兔耳草由江西中醫(yī)藥大學(xué)張亞梅副教授鑒定為玄參科植物短穗兔耳草Lagotis brachystachysMaxim.的干燥全草,樣品保存在江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與民族藥研究中心。

2 提取與分離

將短穗兔耳草10.0 kg粉碎,用乙醇-水（75 ∶25）浸泡,得到4個部位。50% 乙醇部位（Fr3,110.0 g）經(jīng)硅膠柱以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫,得7個組分Fr3-1～Fr3-7.Fr3-3 （30.45 g）經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析和凝膠色譜洗脫得組分Fr3-3-1-1～Fr3-3-1-8。將Fr3-3-1-2（35 mg）用半制備HPLC以甲醇-水（60 ∶40）洗脫得化合物1 （2 mg）、2 （3 mg）。Fr3-3-1-3 （128 mg）過Sephadex LH-20和半制備HPLC甲醇-水（60 ∶40）洗脫得化合物3 （3 mg）、4 （5 mg）。Fr3-3-1-5 （219 mg）過硅膠柱和Sephadex LH-20得化合物5 （4 mg）、6 （3 mg）。

90%乙醇部位（100.0 g）經(jīng)硅膠柱以二氯甲烷-甲醇 （100 ∶5、100 ∶8、90 ∶10、85 ∶ 15、80 ∶20、75 ∶25、70 ∶30）洗脫,得6個組分Fr1～Fr6。Fr2 （9.3 g）經(jīng)硅膠柱以石油醚-乙酸乙酯（90 ∶10、80 ∶20、75 ∶25、70 ∶30、50 ∶50）進(jìn)行洗脫得Fr2-1～Fr2-13組分和化合物10 （1 g）。Fr2-9 （476.4 mg）經(jīng)半制備HPLC甲醇-水（45 ∶55）得化合物7 （8 mg）、8 （140 mg）。Fr2-10（629.9 mg）經(jīng)Sephadex LH-20和島津半制備HPLC得化合物9 （12 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末。ESI-MS m/z：491.2［M-H］-。1H-NMR （600 MHz,CD3OD） δ：7.73（1H,d,J=16.2 Hz,H-8′）,7.63 （2H,m,H-2″,6″）,7.41 （3H,m,H-3″,4″,5″）,6.58 （1H,d,J=16.2 Hz,H-7″）,6.31 （1H,dd,J=6.0,1.8 Hz,H-3）,5.07 （1H,m,H-4）,5.03 （1H,d,J=9.8 Hz,H-1）,4.77 （1H,d,J=7.8 Hz,H-1′）；13C-NMR （150 MHz,CD3OD） δ：95.7 （C-1）,142.0 （C-3）,103.9 （C-4）,39.2 （C-5）,78.0 （C-6）,63.2 （C-7）,63.7 （C-8）,43.8 （C-9）,64.7（C-10）,168.6 （C-11）,100.4 （C-1′）,75.0 （C-2′）,79.6 （C-3′）,71.6 （C-4′）,78.0 （C-5′）,62.9 （C-6′）,135.9 （C-1″）,129.7 （C-2″,6″）,129.5 （C-3″,5″）,131.7 （C-4″）,146.8 （C-7″）,118.8 （C-8″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致,故鑒定為globularin。

化合物2：白色粉末。ESI-MS m/z：491.2［M-H］-。1H-NMR （600 MHz,CD3OD） δ：7.63（2H,m,H-2″,6″）,7.41 （3H,m,H-3″,4″,5″）,7.02 （1H,d,J=16.2 Hz,H-8′）,6.36 （1H,dd,J=6.0,1.8 Hz,H-3）,5.82 （1H,d,J=15.6 Hz,H-7″）,5.08 （1H,m,H-4）,5.03 （1H,d,J=9.6 Hz,H-1）；13C-NMR （150 MHz,CD3OD） δ：95.6（C-1）,141.8 （C-3）,103.7 （C-4）,39.0 （C-5）,79.5 （C-6）,63.5 （C-7）,63.0 （C-8）,43.6 （C-9）,64.5 （C-10）,168.4 （C-11）,100.3 （C-1′）,74.8 （C-2′）,78.4 （C-3′）,71.5 （C-4′）,77.8 （C-5′）,62.8 （C-6′）,135.7 （C-1″）,131.6 （C-2″,6″）,129.3 （C-3″,5″）,130.0 （C-4″）,146.7 （C-7″）,118.6 （C-8″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］基本一致,故鑒定為globularicisin。

化合物3：白色粉末。ESI-MS m/z：491.2［M-H］-。1H-NMR （600 MHz,DMSO） δ：7.88（2H,m,H-2″,6″）,7.82 （1H,d,J=15.6 Hz,H-8′）,7.58 （3H,m,H-3″,4″,5″）,6.79 （1H,d,J=16.2 Hz,H-7″）,6.54 （1H,dd,J=6.0,1.8 Hz,H-3）,5.20 （1H,m,J=3.0 Hz,H-7）,5.16（1H,m,H-4）,5.12 （1H,d,J=9.7 Hz,H-1）,4.76 （1H,d,J=7.8 Hz,H-1′）；13C-NMR （150 MHz,DMSO） δ：93.7 （C-1）,140.5 （C-3）,103.2（C-4）,37.4 （C-5）,77.4 （C-6）,61.4 （C-7）,61.6 （C-8）,42.0 （C-9）,62.8 （C-10）,166.0 （C-11）,98.5 （C-1′）,73.4 （C-2′）,76.4 （C-3′）,70.2 （C-4′）,77.1 （C-5′）,61.8 （C-6′）,134.1（C-1″）,129.0 （C-2″,6″）,128.5 （C-3″,5″）,130.6 （C-4″）,144.6 （C-7″）,118.1 （C-8″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［14］基本一致,故鑒定為10-cinnamoylcatalpol。

化合物4：白色粉末。ESI-MS m/z：374.1［M-H］-。1H-NMR （600 MHz,CD3OD） δ：7.45（1H,brs,H-3）,5.73 （1H,br s,H-7）,5.09（1H,d,J=7.6 Hz,H-1）,4.65 （1H,d,J=7.7 Hz,H-1′）,4.25 （1H,d,J=14.4 Hz,H-10b）,4.14 （1H,d,J=14.4 Hz,H-10a）；13C-NMR （150 MHz,CD3OD） δ：98.1 （C-1）,153.2 （C-3）,112.6 （C-4）,36.5 （C-5）,39.5 （C-6）,128.3 （C-7）,144.6 （C-8）,46.8 （C-9）,61.3 （C-10）,171.0 （C-11）,100.1 （C-1′）,74.6 （C-2′）,77.6（C-3′）,71.3 （C-4′）,78.1 （C-5′）,62.4 （C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］基本一致,故鑒定為京尼平苷酸。

化合物5：白色粉末。ESI-MS m/z：390.3［M+H］+。1H-NMR （600 MHz,DMSO） δ：7.70（2H,m,H-3,6）,7.66 （2H,m,H-4,5）,4.19（4H,m,H-1′,1″）,1.62 （2H,m,H-2′,2″）,1.33 （4H,m,H-7′,7″）,1.27 （4H,m,H-3′,3″）,1.25 （8H,m,H-4′,5′,4″,5″）,0.86 （6H,m,H-8′,8″）,0.83 （6H,m,H-6′,6″）；13C-NMR（150 MHz,DMSO） δ：131.9 （C-1,2）,127.4 （C-3,6）,129.0 （C-4,5）,167.8 （C-7,8）,67.4 （C-1′）,38.3 （C-2′）,30.0 （C-3′）,28.6 （C-4′）,23.5 （C-1″）,11.0 （C-2″）,22.6 （C-5′）,14.1 （C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］基本一致,故鑒定為bis （2-ethylhexyl）phthalate。

化合物6：白色粉末。ESI-MS m/z：390.3［M+H］+。1H-NMR （600 MHz,DMSO） δ：7.72（2H,m,H-4,5）,7.67 （2H,m,H-3,6）,4.13（4H,m,H-1′,1″）,1.67 （6H,s,-CH3）,1.24～1.35 （16H,m,H-3′,3″,4′,4″,5′,5″″,6′,6″）,0.92 （2H,d,J=7.2 Hz,H-2′,2″）,0.86 （6H,m,H-7′,7″）；13C-NMR （150 MHz,DMSO） δ：131.8（C-1,2）,131.6 （C-3,6）,128.7 （C-4,5）,167.0 （C-7,8）,67.4 （C-1′,1″）,38.1 （C-2′,2″）,23.3 （C-3′,3″）,29.8 （C-4′,4″）,28.4 （C-5′,5″）,24.8 （C-6′,6″）,13.9 （C-7′,7″）,10.8（C-2′,2″-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］基本一致,故鑒定為1,2-benzenedicarboxylic acid bis（2S-methylheptyl）ester。

化合物7：無色粉末。ESI-MS m/z：167.0［M-H］-。1H-NMR （600 MHz,CD3OD） δ：7.54（2H,overlapped,H-2,6）,6.82 （1H,d,J=8.7 Hz,H-5）,3.87 （3H,s,-OCH3）；13C-NMR （150 MHz,CD3OD） δ：123.0 （C-1）,113.7 （C-2）,152.7 （C-3）,148.6 （C-4）,115.8 （C-5）,125.3（C-6）,170.0 （-C=O）,56.4 （-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18］基本一致,故鑒定為香草酸。

化合物8：無色粉末。ESI-MS m/z：137.1［M-H］-。1H-NMR （600 MHz,CD3OD） δ：7.00（2H,d,J=8.4 Hz,H-3,5）,6.68 （2H,d,J=8.4 Hz,H-2,6）,3.66 （2H,t,J=7.3 Hz,H-8）,2.69（2H,t,J=7.3 Hz,H-7）；13C-NMR （150 MHz,CD3OD） δ：130.9 （C-1）,130.8 （C-2,6）,156.7（C-4）,116.1 （C-3,5）,39.3 （C-7）,64.5 （C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［19］基本一致,故鑒定為4-羥基苯乙醇。

化合物9：無色粉末。ESI-MS m/z：135.1［M-H］-。1H-NMR （600 MHz,CD3OD） δ：7.86（2H,d,J=9.6 Hz,H-2,6）,6.82 （2H,d,J=9.6 Hz,H-3,5）,2.53 （3H,s,-CH3）；13C-NMR （150 MHz,CD3OD） δ：130.1 （C-1）,132.6 （C-2,6）,164.1 （C-4）,116.2 （C-3,5）,199.5 （C-7）,26.3（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［20］基本一致,故鑒定為對羥基苯乙酮。

化合物10：白色粉末。ESI-MS m/z：577.8［M+H］+。1H-NMR （600 MHz,DMSO） δ：5.34（1H,m,H-6）,4.87 （1H,m,H-1′）,4.43 （2H,t,J=5.9 Hz,H-6′）,4.21 （1H,d,J=7.8 Hz,H-4′）,0.95 （3H,s,H-21）,0.89 （3H,d,J=6.4 Hz,H-4′）,0.83 （3H,m,H-29）,0.81 （3H,m,H-27）,0.64 （3H,m,H-18）；13C-NMR （150 MHz,DMSO） δ：37.3 （C-1）,25.8 （C-2）,77.3 （C-3）,38.7 （C-4）,140.9 （C-5）,121.7 （C-6）,31.9 （C-7）,31.8 （C-8）,50.0 （C-9）,36.7 （C-10）,21.0（C-11）,40.2 （C-12）,42.3 （C-13）,56.6 （C-14）,24.3 （C-15）,28.2 （C-16）,55.8 （C-17）,12.2 （C-18）,20.2 （C-19）,35.9 （C-20）,19.1（C-21）,29.7 （C-22）,33.8 （C-23）,46.6 （C-24）,29.1 （C-25）,19.4 （C-26）,19.6 （C-27）,23.0 （C-28）,12.1 （C-29）,101.2 （C-1′）,73.9（C-2′）,77.3 （C-3′）,70.5 （C-4′）,77.2 （C-5′）,61.5 （C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［21］基本一致,故鑒定為胡蘿卜苷。

4 討論

本研究從短穗兔耳草75% 乙醇提取物中分離鑒定10個化合物,主要涉及環(huán)烯醚萜、酚性及甾體類,進(jìn)一步豐富了其化合物的數(shù)量。本課題前期研究發(fā)現(xiàn)短穗兔耳草具有降尿酸作用［2］,從中發(fā)現(xiàn)2個抑制黃嘌呤氧化酶活性的化合物［12］,而酚類化合物具有降尿酸的功效［22-23］,環(huán)烯醚萜苷化合物具有抗炎、抗癌、保肝利膽等功效［24］,下一步將繼續(xù)對短穗兔耳草分離得到的單體化合物進(jìn)行活性篩選,以期為其后期開發(fā)及利用提供參考。