腫瘤標(biāo)志物在卵巢癌診斷方面的研究進(jìn)展與應(yīng)用

孫 躒 譚 晶 辛 華

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154000)

卵巢癌是嚴(yán)重威脅女性健康的主要疾病之一，是女性第五大常見(jiàn)的癌癥死亡原因[1]。雖然發(fā)病率相對(duì)較低，但由于卵巢的位置較深，早期無(wú)明顯癥狀，確診時(shí)70%的患者為晚期，另外高達(dá)90%的卵巢癌的卵巢表面上皮細(xì)胞有瘤性轉(zhuǎn)化出現(xiàn)。在中國(guó)等發(fā)展中國(guó)家，晚期病例缺乏有效治療手段，逐漸成為女性生殖系統(tǒng)最致命的腫瘤[2]。

卵巢癌作為目前女性惡性腫瘤中致死率最高的一種[3]，盡管在治療上皮卵巢癌的方面已取得了很大進(jìn)展，但患者的預(yù)后仍較差，5年生存率未達(dá)50%[4]。該病不僅給患者帶來(lái)極大痛苦，同時(shí)損害患者自身免疫功能，對(duì)患者的身心生活都造成了巨大影響。因此，卵巢癌的早期診斷及腫瘤標(biāo)志物的研究已經(jīng)成為全世界卵巢癌基礎(chǔ)研究的熱點(diǎn)。針對(duì)卵巢癌目前的研究和治療現(xiàn)狀，尋找卵巢癌診斷相關(guān)生物標(biāo)志物，對(duì)于有效的早期確診、預(yù)防及治療卵巢癌、延長(zhǎng)患者壽命、提高生存質(zhì)量具有重要意義。

1 血清學(xué)多指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用檢測(cè)診斷

血清學(xué)方面的檢測(cè)，能夠顯著提高婦科惡性腫瘤的早期診斷水平，為腫瘤的診斷預(yù)后以及用藥提供重要指示依據(jù)。同時(shí)血清學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)方便，經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)低，可在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)廣泛開(kāi)展。

1.1 CA125(糖類抗原125)

從上皮性卵巢癌抗原檢測(cè)出的CA125是可被單克隆抗體OC125結(jié)合的一種糖蛋白，在正常卵巢組織中不存在，但在上皮性卵巢腫瘤(漿液性腫瘤)患者的血清中大量存在，其診斷的敏感性極高。80%的卵巢上皮性腫瘤患者血清CA125升高，但由于在早期病例中并不明顯，故一般不單獨(dú)用于卵巢癌上皮性癌的早期診斷。

1.2 人附睪分泌蛋白4(HE4，Human epididymis protein 4)

HE4主要表達(dá)于新生兒部分平滑肌組織、血管內(nèi)皮細(xì)胞或者肝腎組織中，近年來(lái)的研究中顯示，HE4在惡性腫瘤中可能發(fā)揮了重要的因子作用?？赏ㄟ^(guò)檢測(cè)體內(nèi)HE4的水平及其變化來(lái)進(jìn)行卵巢癌的早期診斷，鑒別診斷，療效監(jiān)控和預(yù)后評(píng)估。有研究發(fā)現(xiàn)[5]，HE4對(duì)早期卵巢癌比CA125更加敏感。CA125水平主要受絕經(jīng)狀態(tài)影響，與年齡無(wú)關(guān)。但HE4受女性絕經(jīng)期及年齡的雙重影響。

目前，HE4和CA125是僅有的兩個(gè)通過(guò)美國(guó)食品藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)的作為臨床診斷和檢測(cè)卵巢癌的腫瘤標(biāo)志物。張等[6]使用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定患者及健康人的空腹靜脈血血清中的HE4和CA125，并對(duì)其含量水平進(jìn)行對(duì)比。并通過(guò)ROMA的運(yùn)算方法，發(fā)現(xiàn)HE4和CA125有隨著卵巢癌的病情進(jìn)展持續(xù)升高的情況。高[7]等通過(guò)回顧性分析104例卵巢癌患者，150例卵巢良性病變患者及19例卵巢交界性腫瘤患者的臨床病例資料發(fā)現(xiàn)，卵巢癌患者血清HE4與CA125的表達(dá)呈正相關(guān)。血清CA125聯(lián)合HE4共同檢測(cè)的靈敏度最高，尤其在Ⅲ-Ⅳ期卵巢癌的確診率率為100%，高于任何期別血清CA125，HE4單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)。

1.3 CA199(糖類抗原CA19-9)及CEA(癌胚抗原)

郭[8]等發(fā)現(xiàn)，血清CA-125、CA-199聯(lián)合CEA對(duì)上皮性卵巢癌的診斷具有較高的敏感性和特異性。CA199是對(duì)胰腺癌敏感性最高的標(biāo)志物，明顯升高可見(jiàn)于消化道腫瘤，有助于胰腺癌、大腸及直腸癌的診斷。癌胚抗原CEA是空腔器官如胃腸道，乳腺，呼吸道，卵巢等的腫瘤標(biāo)志物，患者患上述疾病時(shí)該腫瘤標(biāo)志物異常增高。CEA是一種具有人類胚胎抗原特性的蛋白多糖復(fù)合物，被認(rèn)為是一個(gè)廣譜性腫瘤標(biāo)志物。Lin等[9]采用受試者工作特征曲線(ROC)和ROC曲線下面積(ACUs)對(duì)CEA進(jìn)行分析。發(fā)現(xiàn)CEA可以作為上皮性卵巢癌的獨(dú)立預(yù)后因子，在多種卵巢癌中，如粘液型漿液型、透明細(xì)胞型和子宮內(nèi)膜樣卵巢癌中均有體現(xiàn)。

腫瘤是在多種因素影響下，經(jīng)過(guò)多階段基因變異發(fā)展而來(lái)的。單一指標(biāo)檢測(cè)的靈敏度、特異性往往無(wú)法達(dá)到診斷需要，無(wú)法排除其他原因?qū)е碌漠惓Ｗ兓?。然而?lián)合檢測(cè)可以互相驗(yàn)證，以此有效提高診斷的準(zhǔn)確度。血清學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)具有成本低、創(chuàng)傷小，患者認(rèn)可等優(yōu)點(diǎn)，可作為常規(guī)檢查項(xiàng)目診斷卵巢癌。

2 凝血相關(guān)指標(biāo)

血液中一些常規(guī)的檢測(cè)物質(zhì)也可以作為腫瘤檢測(cè)的輔助指標(biāo)。血液的高凝狀態(tài)與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有著密切關(guān)聯(lián)，近年來(lái)，研究人員發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤患者的血小板(PLT)顯著高于良性腫瘤患者或健康人群，如肺癌、結(jié)直腸癌和乳腺癌。婦科惡性腫瘤患者的凝血指標(biāo)也常提示血小板的增多。腫瘤細(xì)胞促進(jìn)血小板數(shù)量增長(zhǎng)的同時(shí)，血小板也在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖與侵襲，從而形成惡性循環(huán)。

血小板是具有多項(xiàng)免疫相關(guān)功能的細(xì)胞，可參與浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等腫瘤特異性過(guò)程。郭[10]等發(fā)現(xiàn)PLT和常用凝血指標(biāo)具有輔助判斷良性和惡性卵巢腫瘤的效能。相關(guān)分析結(jié)果顯示，卵巢癌患者的血液中PLT與卵巢腫瘤經(jīng)典腫瘤標(biāo)志物CA125水平顯著相關(guān)，提示PLT可能與CA125對(duì)卵巢癌腫瘤惡性程度的作用相似，該研究也發(fā)現(xiàn)惡性卵巢癌患者的血小板PLT高于良性患者及健康人，印證了血小板升高，卵巢癌患者體內(nèi)腫瘤負(fù)荷增加的現(xiàn)象。纖維蛋白原(FIB)和D-二聚體等一些常用凝血指標(biāo)在卵巢癌中也發(fā)生顯著改變。胡等[11]研究結(jié)果顯示 Fib、D-二聚體在癌癥組均高于良性組和對(duì)照組，在卵巢癌組中晚期(Ⅲ～Ⅳ期)明顯高于早期(Ⅰ～Ⅱ期)。這提示血小板及其相關(guān)凝血物質(zhì)可以作為一種標(biāo)志物來(lái)反應(yīng)卵巢癌患者體內(nèi)的腫瘤負(fù)荷情況。

PLT 計(jì)數(shù)是臨床上常用的檢查指標(biāo)，操作簡(jiǎn)便，成本低。且有研究發(fā)現(xiàn)D-二聚體和FIB相比于PLT更適合用于鑒別卵巢腫瘤的良惡性，凝血物質(zhì)的研究對(duì)早期發(fā)現(xiàn)卵巢腫瘤，并對(duì)病程進(jìn)行評(píng)估對(duì)臨床診斷，預(yù)后，分期等有重要的意義。

3 非編碼RNA Noncoding RNAs (ncRNAs)

非編碼核糖核酸,主要分三類：包括微小核糖核酸micro (mi)RNAs、長(zhǎng)非編碼核糖核酸long noncoding (lnc)RNAs和環(huán)狀核糖核酸 circular (circ)RNAs，通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后和翻譯后過(guò)程等的調(diào)控來(lái)作用特定的基因表達(dá)程序。通過(guò)它們對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)和功能的廣泛影響，非編碼核糖核酸實(shí)際上已經(jīng)涉及到所有的細(xì)胞過(guò)程，如增殖、衰老等[12]。同時(shí)ncRNAs的檢測(cè)具有非侵入性、易于操作等優(yōu)點(diǎn),易于成為新的卵巢癌診斷的標(biāo)志物。

3.1 微小RNA (miRNA)

miRNA是一種具有高度的保守性和非編碼性的單鏈RNA,大約由22個(gè)核苷酸組成。miRNA幾乎存在于所有的生物中，miRNA約占人類基因組的1%。作為最大的基因家族的成員，miRNA的表達(dá)可影響細(xì)胞的增殖、分化以及細(xì)胞內(nèi)部的物質(zhì)能量代謝,目前的研究已發(fā)現(xiàn)多種miRNA的異常表達(dá)對(duì)癌癥的發(fā)生、發(fā)展起到抑制或促進(jìn)的作用，miRNA調(diào)控眾多信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，例如參與細(xì)胞增殖和分化以及惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展變化。

袁[13]等發(fā)現(xiàn)在Hp感染為陽(yáng)性以及病情程度較為嚴(yán)重的胃癌患者中血清中miR-101、miR-204的表達(dá)水平明顯降低，可作為胃癌診斷的新型標(biāo)志物。其聯(lián)合診斷胃癌的敏感度和特異度分別為73.76%和88.62%。多組數(shù)據(jù)表明miRNA 可作為腫瘤診斷的新型標(biāo)志物，在卵巢癌中也有明顯體現(xiàn)。如Teng Yue[14]等發(fā)現(xiàn)miRNA-200a/c可作為上皮性卵巢癌(EOC)的潛在生物標(biāo)志物。Changwon Yang等[15]建議血清中的miR-214-3p可以作為診斷和預(yù)測(cè)卵巢腫瘤的潛在生物標(biāo)志物。

3.2 長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA)

lncRNA是轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)度超過(guò) 200 bp 的一組內(nèi)源性細(xì)胞 RNA。在多種疾病中發(fā)揮重要作用，研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA可通過(guò)參與表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后途徑調(diào)控靶基因的表達(dá)[16],可能參與細(xì)胞增殖、凋亡、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等，與多種腫瘤的增殖、遷移及侵襲過(guò)程有關(guān)[17]。lncRNA在不同腫瘤中的生物學(xué)功能和分子機(jī)制尚未完全闡明。但是可以明確的是，lncRNA在多種腫瘤中過(guò)度表達(dá)，參與多部位腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，具有一定的致癌作用[18]。早期就有研究表明lncRNA可作為輔助性腫瘤標(biāo)志物用于診斷、分期和隨訪卵巢癌的患者[19]。

3.2.1 SUMO1P3

研究人員起初發(fā)現(xiàn)SUMO1P3時(shí)，將其確定為胃癌診斷的潛在生物標(biāo)志物。近期，有研究發(fā)現(xiàn)SUMO1P3在促進(jìn)上皮卵巢癌進(jìn)展方面顯然具有重要作用。姜等[20]借助實(shí)時(shí)熒光定量PCR( QPCR)檢測(cè)上皮卵巢癌細(xì)胞系HO8910、SKOV3和CAOV3和正常卵巢上皮細(xì)胞系IOSE80中SUMO1P3表達(dá)，以及相關(guān)細(xì)胞增殖試驗(yàn)。分析研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，QPCR結(jié)果顯示，卵巢癌HO8910、SKOV3和CAOV3細(xì)胞系中SUMO1P3表達(dá)高于正常卵巢上皮細(xì)胞系IOSE80，提示其為致癌基因。同時(shí)，卵巢癌HO8910、SKOV3和CAOV3細(xì)胞系中SUMO1P3表達(dá)水平均高于正常卵巢上皮細(xì)胞系IOSE80的0.96±0.023。通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，SUMO1P3在卵巢癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)。

3.2.2 DLEU1

DLEU1是一種定位于人染色體13q14.2-q14.3區(qū)域、高度保守的lncRNA，又稱為淋巴細(xì)胞白血病缺失基因1(deleted in lymphocytic leukemia 1)，Wang[21]等發(fā)現(xiàn)在卵巢上皮來(lái)源惡性腫瘤中，通過(guò)敲除或抑制表達(dá)DLEU1可以使腫瘤細(xì)胞的增殖活性降低、遷移及侵襲能力減弱，DLEU1可能作為競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源性RNA海綿吸附miR-490-3p、消除miR-490-3p表達(dá)及作用進(jìn)而對(duì)靶基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控。

此外，Liu等[22]通過(guò)對(duì)lncRNA的表達(dá)譜分析發(fā)現(xiàn)，在4 956個(gè)lncRNAs中，與卵巢癌親代細(xì)胞相比，有583個(gè)lncRNA在卵巢癌的高轉(zhuǎn)移細(xì)胞中上調(diào)，578個(gè)lncRNA下調(diào)，表明lncRNAs可能在上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。

4 結(jié)論

綜上所述，外周血及體液中的多種物質(zhì)以及多種遺傳物質(zhì)在卵巢癌中表現(xiàn)出失調(diào)，對(duì)卵巢癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移等過(guò)程均有明顯影響。其表達(dá)水平與疾病預(yù)后、患者的生存期和治療反應(yīng)有關(guān)，可以作為卵巢癌的生物標(biāo)記物，反映患者體內(nèi)腫瘤發(fā)生發(fā)展情況。隨著科技的進(jìn)展，檢測(cè)方法及儀器的不斷精進(jìn)，卵巢癌的各項(xiàng)生物標(biāo)志物指標(biāo)將更加準(zhǔn)確與靈敏。

5 展望

隨著人口的老齡化，腫瘤已成為嚴(yán)重威脅人類健康的主要疾病，早發(fā)現(xiàn)，早診斷，早治療是防治腫瘤疾病的重要舉措。腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)將成為一種新的臨床診療方式，由于腫瘤標(biāo)志物的取材創(chuàng)口小，從而可以減輕患者身體及精神上的創(chuàng)傷，對(duì)精準(zhǔn)醫(yī)療有極大的推動(dòng)作用。此外在減輕患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)方面也可做出巨大貢獻(xiàn)。相信在研究人員的不斷努力下，新型腫瘤標(biāo)志物的發(fā)展與精準(zhǔn)檢測(cè)將為疾病篩查診斷、病情監(jiān)測(cè)、藥物療效、分期指征、預(yù)后判斷等各個(gè)方面提供重要參考依據(jù)。