山茱萸化學(xué)成分及藥理作用研究新進(jìn)展

周迎春，張廉潔，張燕麗*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

山茱萸(CornusofficinalisSieb.et Zucc.)又名山萸肉、蜀棗、石棗、肉棗、萸肉、棗皮、藥棗等，系山茱萸科山茱萸屬植物，多年生小喬木或灌木，傳統(tǒng)以除去果核的干燥成熟果肉入藥，主要產(chǎn)地分布在甘肅、河南、湖南、山西和陜西等省。山茱萸首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，稱“山茱萸味酸平，主心下邪氣、逐寒濕痹，去三蟲，久服輕身”。山茱萸[1]是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴滋補(bǔ)中藥材，味酸、澀，性微溫，歸肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)益肝腎、澀精固脫的功效，主要用于用于治療眩暈耳鳴、腰膝酸痛、陽(yáng)痿遺精、內(nèi)熱消渴等。

山茱萸的臨床應(yīng)用非常廣泛，古籍中也早有記載。漢代張仲景《金匱要略》記載八味腎氣丸(干地黃、薯蕷、山茱萸、茯苓、澤瀉、牡丹皮、桂枝、附子)，功能溫補(bǔ)腎氣，治療腎氣不足，腰酸腳軟，肢體畏寒，少腹拘急，小便頻數(shù)。明代張景岳《景岳全書·新方大略》記載左歸丸(熟地黃、山藥、枸杞、山茱萸、川牛膝、鹿角膠、龜板膠、菟絲子),功能滋腎補(bǔ)陰,治療頭暈?zāi)垦?、腰酸腿軟、遺精滑泄等腎陰不足、精髓虧虛。北宋錢乙《小兒藥證直訣》記載的六味地黃丸(八味丸除去桂、附二味，其中山茱萸配伍熟地黃,煉蜜為丸，如梧桐子大，每服三丸),功能滋補(bǔ)肝腎、填精益髓,治療腎陰虛引起的腰膝酸軟、頭暈?zāi)垦?、口燥咽干等?/p>

山茱萸含有多種有效成分，具有多種藥理作用,在臨床中應(yīng)用廣泛。筆者針對(duì)山茱萸的化學(xué)成分和藥理作用進(jìn)行了綜述，發(fā)現(xiàn)山茱萸的主要藥效成分含有環(huán)烯醚萜及其苷、三萜、黃酮、鞣質(zhì)、有機(jī)酸、多糖等，目前針對(duì)山茱萸化學(xué)成分的研究主要集中在環(huán)烯醚萜及其苷、三萜及多糖類。山茱萸可以作用在機(jī)體的多個(gè)方面，但主要集中在免疫系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)及泌尿系統(tǒng)，具有抗腫瘤、保護(hù)心肌、降血糖、調(diào)節(jié)骨代謝、保護(hù)神經(jīng)元、抗氧化、保護(hù)肝臟、調(diào)控視黃醇、抗衰老、抗炎等多種藥理作用。筆者針對(duì)山茱萸的化學(xué)成分和藥理作用進(jìn)行了綜述，為山茱萸的進(jìn)一步研究提供資料。

1 化學(xué)成分

山茱萸的化學(xué)成分主要含有環(huán)烯醚萜及其苷、三萜、黃酮、鞣質(zhì)、有機(jī)酸、多糖等，其中環(huán)烯醚萜不僅是山茱萸中的特征性成分，還是山茱萸中含量最高的成分。山茱萸中的環(huán)烯醚萜類成分包括馬錢苷(Loganin)、7-去氫馬錢苷(7-dehydrologanin)、7-O-丁基莫諾苷(7-O-butylmorroniside)、10-羥基戟葉馬鞭草苷(10-hydroxyhastatoside)、β-二氫山茱萸苷(β-dihydrocornin)、山茱萸新苷(Cornuside)。山茱萸果肉所含鞣質(zhì)類主要包括水楊梅素D，異訶子素，新嗩吶草素Ⅱ，新嗩吶草素等11種鞣質(zhì)，包括4種沒食子酸鞣質(zhì)和7種鞣花鞣質(zhì)，山茱萸果實(shí)中熊果酸含量為0.24%～0.32%，山茱萸飲片中熊果酸含量0.160 7%～0.249 2%。山茱萸果實(shí)中可以分離出非淀粉類中性糖和酸性多糖等。

冀麟麟等[2]采用多種色譜技術(shù)和波譜學(xué)方法，對(duì)山茱萸乙醇提取物大孔吸附樹脂20%乙醇洗脫部位中抗氧化活性組分進(jìn)行研究，從山茱萸乙醇提取活性部位共分離鑒定了5個(gè)化合物，分別為7-β-O-乙基莫諾苷(1)、7-α-O-乙基莫諾苷(2)、3-O-咖啡?？鼘幩峒柞?3)、(7R,9R,10R)-3,9-di-hidroxicalameneno(4)和吐葉醇(5)；化合物1和2為莫諾苷的同類型化合物，化合物3、4和5為首次從山茱萸屬種中分離鑒定得到。

南美娟等[3]研究發(fā)現(xiàn),山茱萸果核中含有油脂、鞣質(zhì)及氨基酸等。其中山茱萸果核中油脂含量高達(dá)7%～8%，所含成分主要是為棕櫚酸、硬脂酸、月桂酸、油酸、亞油酸和亞麻酸，亞油酸含量可以達(dá)70%以上。另外，山茱萸果核中存在一種混合型鞣質(zhì)，并且以可水解型鞣質(zhì)為主。采用絡(luò)合量法和高錳酸鉀法檢測(cè),發(fā)現(xiàn)山茱萸果核水提取液、山茱萸果核乙醇提取液、丙酮/水提液中鞣質(zhì)含量均較高，可達(dá)20%，另外研究發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地山茱萸果核中鞣質(zhì)的含量無顯著性差異。除此之外，山茱萸果核中還含有氨基酸類、苷類、環(huán)烯醚萜類、揮發(fā)油、黃酮、內(nèi)酯及維生素等。

任亞碩等[4]采用柱色譜和重結(jié)晶等方法分離純化山茱萸的化學(xué)成分，利用理化性質(zhì)、薄層檢識(shí)、現(xiàn)代波譜分析技術(shù)鑒定單體化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果從山茱萸果肉中分離純化，并經(jīng)過鑒定得到6種單體化合物，分別鑒定為槲皮素(Quercetin，1)、咖啡酸(Caffeic acid，2)、沒食子酸(Gallic acid，3)、沒食子酸乙酯(Ethyl gallate，4)、齊墩果酸(Oleanoic acid，5)、β-谷甾醇(β-Sitosterol，6)。

張茜等[5]為尋求科學(xué)合理的山茱萸多糖的提取工藝，選擇正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)分離方法?？疾煲蛩卦O(shè)定為加水量、提取時(shí)間、溫度及醇沉濃度，提取率為考察指標(biāo)，由此優(yōu)化出最優(yōu)提取工藝。優(yōu)選得到的最佳優(yōu)提取工藝是設(shè)定在90 ℃，10倍加水量,每次1.5 h，提取3次，脫蛋白加乙醇，次日取沉淀干燥即可。

鮑潔等[6]采用恒溫水浴法，研究在不同溫度、炮制時(shí)間、輔料使用量條件下醋制、酒制、鹽制、蜜制、蒸制對(duì)山茱萸多糖含量的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)山茱萸中多糖含量在酒制和蒸制條件下能提取到最佳含量。

雷小小等[7]為優(yōu)化提取工藝，采用正交試驗(yàn)?zāi)Ｊ?，設(shè)定選擇料液比、乙醇濃度和提取溫度為考察因素，設(shè)定總苷含量為考察指標(biāo)。發(fā)現(xiàn)山茱萸總環(huán)烯醚萜最穩(wěn)定可行的提取工藝是95 ℃，1∶25料液比，10%乙醇。純化工藝為10%乙醇洗脫10 BV。

趙艷艷等[8]為優(yōu)化提取工藝，采用正交試驗(yàn)?zāi)Ｊ?，設(shè)定提取溶劑、溶劑濃度、料液比及時(shí)間為考察因素，設(shè)定以環(huán)烯醚萜苷類化合物的提取率考察指標(biāo)。發(fā)現(xiàn)100 min，1∶15料液比，以甲醇為溶劑，設(shè)定80%的提取劑濃度，提取率最優(yōu)。

2 藥理作用

2.1 抗腫瘤

王之珺等[9]使用MTT法檢測(cè)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖抑制情況、用免疫組化法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞Bcl-2表達(dá)情況，旨在研究山茱萸多糖對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞增殖、凋亡情況及相關(guān)基因表達(dá)的影響。形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，山茱萸多糖高、中、低劑量組腫瘤細(xì)胞的胞膜出現(xiàn)皺縮，體積縮小，數(shù)量減少，且存在劑量依賴性。給藥24 h、48 h、72 h后分別測(cè)定Hela細(xì)胞增殖抑制率，實(shí)驗(yàn)顯示，隨藥物濃度升高腫瘤細(xì)胞增殖抑制率也出現(xiàn)增大態(tài)勢(shì)。各劑量組分別與對(duì)照組比較，宮頸癌Hela細(xì)胞的Bcl-2基因表達(dá)免疫組化評(píng)分降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)?？傊?，山茱萸多糖可誘導(dǎo)人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，其作用機(jī)制可能是與降低腫瘤細(xì)胞的Bcl-2基因表達(dá)有關(guān)。

李媛等[10]通過分析低、中、高濃度山茱萸多糖對(duì)癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞調(diào)控的干預(yù)，研究山茱萸多糖對(duì)Klotho表達(dá)和PI3K/AKT通路在肝癌HepG2細(xì)胞增殖、凋亡中的影響。結(jié)果，與對(duì)照組比較，各濃度的山茱萸多糖組HepG2細(xì)胞克隆形成數(shù)明顯降低(P<0.05)，細(xì)胞凋亡率明顯增加(P<0.05)，山茱萸多糖組HepG2細(xì)胞中Bax、cleaved-caspase-3、Klotho蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.05)，Ki67、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05)，均表現(xiàn)為劑量依賴性。綜上所述，山茱萸多糖可能通過上調(diào)Klotho表達(dá)，抑制PI3K/Akt信號(hào)通路活化，抑制人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞增殖，促進(jìn)HepG2凋亡，發(fā)揮抗腫瘤作用。

賈羲等[11]通過C57BL小鼠Lewis肺癌細(xì)胞體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，探討山茱萸提取物的抗腫瘤作用及機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)，山茱萸提取物高濃度組對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖表現(xiàn)出抑制作用(P<0.05)，山茱萸提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞處理48 h后，細(xì)胞發(fā)生G0/G1期阻滯(P<0.05，P<0.01)，山茱萸提取物高濃度組Bcl-2表達(dá)明顯下降，Bax及p53表達(dá)明顯上升(P<0.05，P<0.01)。山茱萸提取物高濃度組鼠體內(nèi)瘤重量、肺轉(zhuǎn)移病灶數(shù)均明顯下降，抑瘤率上升，血清中癌胚抗原含量顯著下降(P<0.05)。由此可見，山茱萸提取物在體內(nèi)外對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞均有明顯抑制作用，其作用機(jī)制與其對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用和干擾細(xì)胞周期分布有關(guān)。

2.2 保護(hù)心肌

張曉京等[12]通過結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈再灌方法，建立心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷模型，探討山茱萸多糖(polysaccharide from Fructus Corni，PFC)對(duì)I/R損傷的保護(hù)作用及作用機(jī)制。結(jié)果，與缺血再灌注組比較，PFC中、高劑量組LVSP和±dp/dtmax顯著上升(P<0.01)，LVEDP值明顯下降(P<0.01)；與偽手術(shù)組比較，缺血再灌注SOD、GSH-Px含量都明顯下降(P<0.01)，MDA和CK水平明顯上升(P<0.01)，與缺血再灌注組比較，PFC低、中劑量組SOD、GSH-Px含量上升，MDA水平下降(P<0.01)，PFC低劑量組與缺血再灌注組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，CK含量在各給藥組均明顯下降(P<0.01)，PFC中、高劑量組SERCA2a ATPase mRNA的表達(dá)較缺血再灌注組增多(P<0.01)。所以，山茱萸多糖有保心肌缺血再灌注組損傷的作用，其機(jī)制與減輕氧化應(yīng)激刺激，減輕細(xì)胞內(nèi)鈣超載有關(guān)。

封曉鵬等[13]給予高脂飲料喂養(yǎng)聯(lián)合腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)制作小鼠2型糖尿病型，探討山茱萸有效成分莫諾苷和馬錢苷對(duì)小鼠心肌的干預(yù)作用。結(jié)果，莫諾苷高劑量組與馬錢苷高劑量組心肌病變較模型組明顯減輕，細(xì)胞排列整齊。與模型組比較，莫諾苷高劑量組和馬錢苷高劑量組，血糖、心體比明顯下降，血清超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合酶(NOS)含量明顯增加。綜上，莫諾苷和馬錢苷對(duì)糖尿病小鼠心肌有一定的保護(hù)作用，可能通過降血糖來保護(hù)心肌。

2.3 降血糖

韓立柱等[14]應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法,在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)中,篩選出山茱萸和杜仲配伍的活性成分及相關(guān)靶點(diǎn),再使用數(shù)據(jù)庫(kù)DisGeNET、DrugBank等篩選得到糖尿病潛在靶點(diǎn),以此途徑探討山茱萸-杜仲治療糖尿病的作用機(jī)制。篩選結(jié)果顯示,山茱萸-杜仲有效成分30個(gè)，可調(diào)控PTGS2、DPP4、ADRB2、PPARG等相關(guān)靶點(diǎn)通過IL-17信號(hào)通路、鈣信號(hào)通路、脂肪細(xì)胞脂解,有效成分槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇等參與氮化合物代謝過程、血液循環(huán)、脂肪細(xì)胞分化和血壓調(diào)節(jié)等過程。研究說明,山茱萸和杜仲配伍的有效成分治具有誘導(dǎo)低密度脂蛋白的氧化、影響糖分的攝取、降脂降糖、預(yù)防心血管疾病等功能。

范思思等[15]應(yīng)用大鼠尾靜脈注射鏈脲佐菌素法復(fù)制胰島素缺乏糖尿病模型,選擇參芪降糖顆粒為陽(yáng)性對(duì)照藥,山茱萸總萜(TCF)分為高、中、低3個(gè)劑量組灌胃給藥,探討山茱萸總萜的降血糖作用途徑。山茱萸總萜高劑量組1 h內(nèi)血糖水平和血清胰島素水平顯著降低(P<0.05)，HbA1c和GSP水平也顯著降低(P<0.05),山茱萸總萜對(duì)ICR小鼠的淀粉糖耐量和葡萄糖耐量顯著改善(P<0.05)。綜上可見,山茱萸總萜能促進(jìn)葡萄糖在機(jī)體內(nèi)的利用,并抑制葡萄糖體內(nèi)吸收等作用，這一路徑主要通過非胰島素依賴途徑發(fā)揮降糖作用,但尚不能證明山茱萸總萜具有α-葡萄糖苷酶抑制及胰島素增敏作用。

徐志猛等[16]按25、50、100 mg/kg不同劑量給予db/db糖尿病小鼠每日灌胃山茱萸總萜，陽(yáng)性藥使用脈康顆粒，研究山茱萸總萜對(duì)2型糖尿病的降血糖作用。給藥3周后，山茱萸總萜各劑量組db/db小鼠體質(zhì)量明顯減輕(P<0.05，P<0.01)。給藥4周后，與模型組比較，山茱萸總萜各劑量組血糖均顯著降低(P<0.05)，其中高劑量組血糖與糖脈康組相近或更低。給藥10周后發(fā)現(xiàn)，山茱萸總萜各劑量組TC、TG含量明顯下降(P<0.05)，血清糖化蛋白水平顯著下降(P<0.05)，葡萄糖耐量和灌胃淀粉糖耐量也有明顯改善(P<0.05)。綜上可見，山茱萸總萜可以改善血脂代謝紊亂，對(duì)高血糖具有持續(xù)的控制效果，對(duì)機(jī)體的糖、脂等代謝過程起到調(diào)節(jié)作用，在一定程度上具有治療糖尿病作用。

2.4 調(diào)節(jié)骨代謝

黃佳純等[17]研究山茱萸的有效成分——山茱萸新苷Ⅰ對(duì)大鼠原代成骨細(xì)胞的增殖分化和有關(guān)應(yīng)激通路的影響。結(jié)果顯示，成骨細(xì)胞在不同濃度山茱萸新苷Ⅰ干預(yù)下會(huì)表現(xiàn)出在出現(xiàn)不同程度的增殖。與對(duì)照組比較，在山茱萸新苷Ⅰ干預(yù)下，成骨細(xì)胞Wnt2、BMP2、β-catenin、OPG、NOX4的mRNA含量明顯上升(P<0.01)，而PERK含量顯著降低(P<0.01)。山茱萸新苷Ⅰ組成骨細(xì)胞的Wnt2、β-catenin、PDI蛋白表達(dá)水平明顯上升(P<0.01)，CHOP表達(dá)水平有輕微上升，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而BIP的蛋白含量顯著下降(P<0.01)?？傊?，在促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖分化的作用上，山茱萸新苷Ⅰ在濃度為1 mmol/mL時(shí)優(yōu)于其他組別，能明顯增加成骨細(xì)胞Wnt2、BMP2、β-catenin、OPG和NOX4的mRNA含量表達(dá)水平，使PERK的mRNA含量下降，增加Wnt2、β-catenin、PDI的蛋白表達(dá)量，降低BI的表達(dá)量。說明山茱萸新苷Ⅰ可正向調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞內(nèi)的增殖分化，在Wnt/β-catenin信號(hào)通路上起促進(jìn)作用。

李紹爍等[18]采用大鼠雙側(cè)卵巢切除法建立骨質(zhì)疏松模型,各組分別給予山茱萸總苷低劑量、中劑量及高劑量灌胃,基于TRPV6、TRPV5通路,研究中藥山茱萸防治骨質(zhì)疏松癥的作用機(jī)制。研究結(jié)果表明,與骨質(zhì)疏松模型組比較,山茱萸各劑量組大鼠骨密度均明顯增加(P<0.05)；TRPV6、TRPV5在各組大鼠骨組織均可見表達(dá),與正常對(duì)照組及模型組比較，尤以中劑量組表達(dá)增加最顯著,其他劑量山茱萸總苷干預(yù)組TRPV6、TRPV5表達(dá)均增加，但TRPV6/TRPV5倍比關(guān)系在高劑量組表現(xiàn)為最高，成骨效果最佳。說明山茱萸總苷對(duì)防治大鼠骨質(zhì)疏松癥有明確療效,主要通過調(diào)控骨組織中TRPV6、TRPV5通道蛋白表達(dá)情況，優(yōu)化TRPV6/TRPV5倍比關(guān)系,改變成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞的增殖分化行為，使機(jī)體骨重建中成骨功能高于破骨功能，最終達(dá)到提高骨密度，防治骨質(zhì)疏松作用。

2.5 保護(hù)神經(jīng)元

李雅莉等[19]采用灌胃方式，給予APP/PS1/Tau三轉(zhuǎn)基因(3×Tg)模型小鼠100或200 mg/(kg·d)CIG，時(shí)間從16月齡～18月齡，研究山茱萸環(huán)烯醚萜苷對(duì)小鼠腦內(nèi)神經(jīng)元的保護(hù)作用。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比較，模型組小鼠(18月齡)Aβ淀粉樣斑塊沉積顯著增加，使用CIG100或200 mg/(kg·d)灌胃均可以一定程度減少腦內(nèi)斑塊負(fù)荷；模型組小鼠Tau蛋白Thr212位點(diǎn)的磷酸化水平無顯著性升高，而在Thr217位點(diǎn)的磷酸化水平明顯升高，表明使用CIG的治療組能顯著拮抗Tau蛋白在Thr217位點(diǎn)的過度磷酸化。模型組小鼠的海馬BDNF蛋白和mRNA含量均減少，CIG能夠顯著升高BDNF蛋白和mRNA的水平;模型組小鼠的海馬內(nèi)尼氏小體數(shù)量變少、染色見淺、排列不規(guī)則，CIG組可見增加尼氏體數(shù)量的態(tài)勢(shì)。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí),CIG能夠減少APP/PS1/Tau三轉(zhuǎn)基因(3×Tg)模型小鼠Aβ在腦內(nèi)的沉積，同時(shí)增加擬癡呆小鼠腦內(nèi)BDNF的表達(dá)，抑制Tau蛋白的異常過度磷酸化，從而達(dá)到提高神經(jīng)細(xì)胞合成蛋白質(zhì)功能,減少神經(jīng)元損傷，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞元的作用。

2.6 抗氧化

李玥彤等[20]通過將干山茱萸葉經(jīng)粉碎-水提-醇沉-去蛋白-脫色等過程提取山茱萸葉多糖，探討山茱萸葉多糖體外抗氧化作用和對(duì)H2O2誘導(dǎo)的人肝癌HepG2細(xì)胞氧化的保護(hù)效果。結(jié)果，PFC對(duì)DPPH·的清除能力顯著，數(shù)據(jù)顯示，PFC對(duì)DPPH·的清除能力與VC相，并且效果隨著PFC溶液濃度的增加而增大，IC50可達(dá)0.13 mg/mL。對(duì)H2O2誘導(dǎo)的人肝癌HepG2細(xì)胞，PFC能降低丙二醛(MDA)含量、提升活性氧(ROS)的水平，并呈現(xiàn)劑量依賴性。說明山茱萸葉多糖具有良好的抗氧化功能。

溫媛媛等[21]在體外實(shí)驗(yàn)中，采用化學(xué)反應(yīng)法，測(cè)定熊果酸對(duì)羥自由基的清除效果；在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，通過計(jì)算小鼠胸腺系數(shù)和脾臟系數(shù)，測(cè)定血清中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量，探討山茱萸熊果酸的抗氧化性能。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，熊果酸具有清除羥基自由基和超氧陰離子自由基的功效；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，山茱萸熊果酸組小鼠的胸腺系數(shù)及脾臟及指數(shù)均明顯上升(P<0.05)，血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性顯著升高、丙二醛(MDA)含量明顯降低。以上結(jié)果說明，山茱萸熊果酸具有良好的抗氧化活性。

2.7 保護(hù)肝臟

南美娟等[22]采用給予大劑量腹腔注射對(duì)醋氨酚制備小鼠急性肝損傷模型方法，研究山茱萸不同部位(果核、果肉和全果)提取物對(duì)急性肝損傷小鼠的保護(hù)作用。結(jié)果，模型組與正常對(duì)照組比較，小鼠肝組織出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，可見肝細(xì)胞變性及片狀壞死，肝組織勻漿中SOD、GSH-Px含量明顯降低(P<0.01)，血清中ALT、AST、MDA含量明顯升高(P<0.01)。應(yīng)用山茱萸不同部位提取物中、高劑量組，都可以不同程度地減輕小鼠肝細(xì)胞壞死情況，尤其是山茱萸果核提取物的中、高劑量組及山茱萸全果的高劑量組，肝組織基本保持肝小葉結(jié)構(gòu)完整，未見片狀壞死肝細(xì)胞。與模型組比較，在山茱萸果核提取物低劑量組，小鼠血清中MDA含量明顯降低(P<0.05)，山茱萸果核提取物中、高劑量組小鼠血清中ALT、AST含量均明顯降低(P<0.01)。山茱萸果肉提取物高、中、低劑量組與模型組比較，在山茱萸果肉提取物高劑量組小鼠血清中ALT、MDA含量明顯降低(P<0.05或P<0.01)，在山茱萸果肉提取物中劑量組，小鼠血清中ALT、AST、MDA的含量明顯降低(P<0.05或P<0.01)。山茱萸全果提取物中、高劑量組小鼠血清中ALT、AST水平均明顯降低(P<0.05或P<0.01)?？傊?，對(duì)醋氨酚復(fù)制的小鼠急性肝損傷模型，山茱萸藥材不同部位提取物均可以不同程度地保護(hù)肝臟，并且以山茱萸果核提取物的效果較好，尤其山茱萸果核提取物的中、高劑量護(hù)肝作用最強(qiáng)，其保肝機(jī)制可能與抗氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。

馬艷霞等[23]建立D-GalN聯(lián)合TNF-α造成的肝細(xì)胞損傷模型，探討山茱萸環(huán)烯醚萜苷(CIG)對(duì)損傷肝細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果看到，應(yīng)用CIG預(yù)處理后，高、中、低濃度組均可以明顯降低細(xì)胞的凋亡率，提高損傷細(xì)胞的活性，SOD、T-AOC含量明顯提高，與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，中、高濃度組MDA含量明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Western blot結(jié)果顯示，CIG高、中、低濃度組均可以明顯降低損傷細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)聯(lián)蛋白p-PERK、p-eIF-2α、凋亡關(guān)聯(lián)蛋白Caspase-3的過度表達(dá)，且呈濃度依賴性。綜上所訴，山茱萸環(huán)烯醚萜苷(CIG)對(duì)D-GalN/TNF-α誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能是山茱萸環(huán)烯醚萜苷可以提高受損細(xì)胞的活性，降低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激造成的損傷，降低相關(guān)凋亡基因的表達(dá)有關(guān)。

趙晨翔等[24]應(yīng)用尾靜脈注射ConA(15 mg/kg)方法復(fù)制小鼠急性免疫性肝損傷模型，研究山茱萸總苷(TGCO)對(duì)小鼠急性免疫性肝損傷的治療作用其機(jī)制。結(jié)果顯示，TGCO高、中、低劑量組和陽(yáng)性對(duì)照藥聯(lián)苯雙酯組均可以抑制小鼠肝臟、脾臟指數(shù)(P<0.05)，降低肝組織勻漿中TNF-α、IFN-γ、IL-1和IL-6含量，增加SOD含量，抑制小鼠血清中ALT、AST和OCT含量的升高。說明TGCO對(duì)于免疫性肝損傷具有一定干預(yù)和治療作用，在一定的范圍內(nèi)有顯著的劑量依賴性，其保肝機(jī)制可能與清除自由基能力和抗氧化的增強(qiáng)、抑制炎癥因子的表達(dá)及免疫調(diào)節(jié)有關(guān)。

2.8 調(diào)控視黃醇

陳宇等[25]利用苯扎氯銨滴眼的方法制備小鼠干眼癥模型,探討山茱萸水煎液對(duì)苯扎氯銨滴眼法誘導(dǎo)的小鼠干眼癥的干預(yù)作用。結(jié)果,模型組小鼠淚液分泌量明顯變少，淚膜破裂時(shí)間明顯變短(P<0.01)，淚腺組織中的CRBP和STRA6蛋白表達(dá)水平明顯降低(P<0.01)。與模型組比較，各給藥組小鼠血清PA、RBP和肝臟組織中視黃醇水平的明顯升高(P<0.01)，淚腺組織中的CRBP和STRA6蛋白表達(dá)水平明顯升高(P<0.05、0.01)?？梢宰C實(shí)，山茱萸水煎液具有明顯改善苯扎氯銨導(dǎo)致的干眼癥狀作用，同時(shí)促進(jìn)視黃醇吸收與利用，改善機(jī)體視黃醇缺少的狀態(tài)，調(diào)節(jié)體內(nèi)視黃醇轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白的表達(dá),糾正胞內(nèi)RBP和其受體的低表達(dá)狀態(tài)，起到了保護(hù)淚腺上皮細(xì)胞的作用,最終達(dá)到抗干眼作用。

2.9 抗衰老

呂靜等[26]給予小鼠含有不同濃度山茱萸的鼠糧飼喂，采用熒光定量PCR法檢測(cè)，研究山茱萸對(duì)老年小鼠肝微粒體細(xì)胞色素P450部分亞型的影響。結(jié)果，模型組小鼠細(xì)胞色素P450亞型基因表達(dá)減少，與模型組比較，不同濃度山茱萸組肝微粒體CYP1A1、CYP2A4、CYP2A5、CYP3A41等基因mRNA水平均明顯增高。說明山茱萸對(duì)老年小鼠肝細(xì)胞CYP1A1、CYP2A4、CYP2A5、CYP3A41等基因具有誘導(dǎo)作用。

孟敏等[27]采用永久性雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎(2VO)手術(shù)法制作大鼠血管性癡呆模型，并按高、中、低劑量給藥，探討山茱萸環(huán)烯醚萜苷對(duì)VD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力和腦組織病理變化的影響。結(jié)果，山茱萸環(huán)烯醚萜苷各劑量組與模型組比較，能明顯縮短大鼠逃避潛伏期,升高識(shí)別指數(shù),升高大腦皮層和海馬NeuN陽(yáng)性神經(jīng)元存活率,ChAT表達(dá)增加。說明山茱萸環(huán)烯醚萜苷具有抵抗衰老，促進(jìn)ChAT表達(dá)的功能，從而使VD大鼠的認(rèn)知功能障礙得到改善。

馬登磊等[28]給予rTg4510阿爾茨海默病模型小鼠山茱萸環(huán)烯醚萜苷，研究山茱萸環(huán)烯醚萜苷對(duì)阿爾茨海默病的干預(yù)作用。結(jié)果，山茱萸環(huán)烯醚萜苷組小鼠興奮狀態(tài)得以改善，腦萎縮減少，海馬神經(jīng)元丟失率下降，Morris水迷宮中的空間和工作記憶得到改善，骨架蛋白、突觸NMDA受體及蛋白表達(dá)增加。深入研究發(fā)現(xiàn)，tau蛋白的過度磷酸化及病理性tau蛋白的沉積，可在CIG的干預(yù)下明顯降低，CIG可能成為一個(gè)非常具有開發(fā)價(jià)值的抗AD藥物。

2.10 抗炎

周瑞等[29]采用白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)/腫瘤壞死因子-α(TNF-α)誘導(dǎo)建立HFLS炎癥模型。探討對(duì)于成纖維樣滑膜細(xì)胞(HFLS)和佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)大鼠模型,山茱萸水提液(CO)及經(jīng)過膜分離技術(shù)工藝優(yōu)化后的0.05 μm無機(jī)陶瓷膜微濾液(CO-0.05)和中空纖維膜超濾液(CO-10K)的抗炎作用，實(shí)現(xiàn)在細(xì)胞水平和動(dòng)物水平上,評(píng)價(jià)膜分離技術(shù)應(yīng)用于富集山茱萸抗炎組分的適用情況。結(jié)果顯示,CO、CO-0.05和CO-10K均能夠明顯抑制IL-1β/TNF-α誘導(dǎo)下的滑膜細(xì)胞分泌細(xì)胞因子(P<0.05、0.01、0.001)，同時(shí)可以明顯緩解AA大鼠的足趾腫脹情況(P<0.05、0.01、0.001)，使AA大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)(P<0.05、0.01、0.001)，抑制大鼠血清中炎性細(xì)胞因子的水平(P<0.001),其中CO-10K的作用效果最佳。由此可見,CO-0.05和CO-10K均具有明顯的抗炎效果，尤其是CO-10K有更強(qiáng)的抗炎效果,說明膜超濾制備工藝適用于富集CO的抗炎組分。

侯祥平等[30]通過結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈左前降支(LAD)的方法,復(fù)制大鼠急性心肌梗死模型，給予各組動(dòng)物山茱萸總苷及山茱萸多糖單成分提取物,應(yīng)用免疫組化半定量分析心肌組織中的炎癥因子IL-6和IL-10表達(dá)情況，評(píng)定山茱萸對(duì)心肌梗死大鼠心肌炎癥因子IL-6及IL-10的影響，進(jìn)一步探討山茱萸對(duì)急性心肌梗死大鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果顯示,超聲心動(dòng)圖提示:模型組與假手術(shù)組比較，左心室收縮內(nèi)徑(LVDs)變大(P<0.05)，短軸縮短率(FS)和射血分?jǐn)?shù)變低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);藥物組均可見左心室收縮內(nèi)徑、左心室舒張內(nèi)徑及左心室舒張末容積顯著縮小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；各組的室間隔厚度，左室壁厚度之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。免疫組化染色結(jié)果示，假手術(shù)組的IL-6和IL-10蛋白極微量表達(dá)，急性心梗模型組大鼠心肌組織IL-6和IL-10蛋白主要表達(dá)于梗死區(qū)少數(shù)存活的心肌細(xì)胞中和梗死周邊區(qū)域、非梗死區(qū)域心肌細(xì)胞漿中，并且較假手術(shù)組顯著增強(qiáng)(P<0.05)，山茱萸總苷和多糖組IL-6的表達(dá)顯著降低，而IL-10表達(dá)顯著升高，山茱萸多糖的作用更明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由此可見,山茱萸總苷及多糖可降低急性心肌梗死大鼠心肌組織中炎癥因子IL-6的表達(dá)，山茱萸多糖對(duì)抗炎因子IL-10的促進(jìn)作用更加顯著。山茱萸通過調(diào)節(jié)促炎因子和抗炎因子的平衡,降低梗死心肌組織中的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),抑制一系列炎癥反應(yīng),減少心肌損傷面積,進(jìn)而改善心臟功能,實(shí)現(xiàn)山茱萸對(duì)心肌缺血的保護(hù)作用。

3 小結(jié)

山茱萸臨床應(yīng)用廣泛，是治療糖尿病、冠心病和高血壓的常用藥。處方六味地黃丸、金匱腎氣丸及杞菊地黃丸中都用作配伍,具有收斂固澀、補(bǔ)肝益氣、熄風(fēng)止痙等臨床功效?，F(xiàn)代藥理研究表明山茱萸具有抗腫瘤、保護(hù)心肌、降血糖、調(diào)節(jié)骨代謝、保護(hù)神經(jīng)元、抗氧化、保護(hù)肝臟、調(diào)控視黃醇、抗衰老、抗炎等多種作用。具體發(fā)揮山茱萸藥理作用的主要是環(huán)烯醚萜及其苷、三萜及多糖類。另外,本文整理了山茱萸果肉的研究進(jìn)展,還整理了至今報(bào)道不多,但具有廣闊的應(yīng)用前景和發(fā)展空間的山茱萸果核的研究概況,為山茱萸的深入開發(fā)研究提供資料。但在整理資料過程中發(fā)現(xiàn)，許多新提取的化合物藥理作用及機(jī)理還有待于進(jìn)一步深入研究。