外周血中性粒細(xì)胞CD99表達(dá)水平與冠心病的相關(guān)性研究

林曉曉 高貝貝 黃進(jìn)宇

冠心病是由于冠狀動脈粥樣硬化使管腔狹窄或阻塞導(dǎo)致心肌缺血、缺氧而引起的心臟病，為動脈粥樣硬化導(dǎo)致器官病變的最常見類型[1]，發(fā)病率和致死率逐年上升。冠心病通常是由多種危險因素共同或相互作用下發(fā)病,而不是任何單一危險因素的極端異常所致，目前國內(nèi)外研究普遍認(rèn)為男性、肥胖、吸煙、高血壓、糖尿病和血脂代謝異常等為冠心病的傳統(tǒng)危險因素[2-3]。CD99是一種高度糖基化的32kDa跨膜蛋白，在大多數(shù)造血細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)。有研究表明CD99參與中性粒細(xì)胞跨內(nèi)皮細(xì)胞遷移[4-5]。冠心病發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體免疫功能密切相關(guān),動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥疾病，白細(xì)胞跨內(nèi)皮細(xì)胞遷移參與了動脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生、發(fā)展[6-7]。本研究旨在分析冠心病患者外周血中性粒細(xì)胞CD99表達(dá)水平與冠心病之間的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選擇2013年7月至2014年7月在杭州市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科住院行冠狀動脈造影的患者338例，其中男 219 例，女 119 例，年齡 31～91（65.8±10.7）歲。根據(jù)冠狀動脈狹窄程度，分為冠心病組（至少一支冠狀動脈管徑狹窄≥50%）245例和冠狀動脈粥樣硬化組（簡稱硬化組，冠狀動脈狹窄＜50%）93例。冠心病組男167 例，女 78 例，年齡 43～91（67.6±9.8）歲；硬化組男 52例，女 41 例，年齡 31～86（61.1±11.3)歲。兩組患者性別比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），年齡比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。排除標(biāo)準(zhǔn)：持續(xù)性維持性透析、急性嚴(yán)重傳染病、腫瘤性疾病、嚴(yán)重肝功能障礙、慢性炎癥性疾病。本研究經(jīng)杭州市第一人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，并獲得所有患者的知情同意。

1.2 方法

1.2.1 一般資料收集 收集患者的括甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、肌酐（Cr）、超敏 C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、空腹血糖（FBG）。正常值：TG＜1.70mmol/L，TC＜5.18mmol/L，HDL-C 1.29～1.55 mmol/L，LDL-C＜3.1mmol/L，hs-CRP 0.00～3.00mg/L，F(xiàn)BG 3.89～6.1mmol/L。采用彩色多普勒超聲心動圖（德國西門子ACUSON S2000）測量左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）。

1.2.2 中性粒細(xì)胞表面CD99分子檢測 收集經(jīng)抗凝處理的外周血樣（100μl），采用PE熒光直接標(biāo)記法，分別與CD99（20μl）單克隆抗體（美國 BD公司，批號：555689）和同型對照抗體（20μl）在 4℃環(huán)境下避光孵育20min。加入紅細(xì)胞裂解液2ml（北京索萊寶科技有限公司，批號：R1010），避光孵育10min。以2 000r/min離心5min。棄上清液，PBS洗滌2次。采用流式細(xì)胞儀（美國BD公司，CantoⅡ型）檢測染色細(xì)胞表面CD99的表達(dá)百分率，上機(jī)檢測前先用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球校準(zhǔn)流式細(xì)胞儀，使變異系數(shù)＜2%后開始采集數(shù)據(jù)，應(yīng)用CELLQuest軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行設(shè)門顏色示蹤法分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS25統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，兩組比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，兩組比較采用χ2檢驗(yàn)；采用多因素logistic回歸分析冠心病的危險因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般資料的比較 見表1。

由表1可見，冠心病組高血壓、糖尿病、血脂異常、吸煙率均高于硬化組（均P＜0.01）。冠心病組服用他汀類藥物、β受體阻滯劑、阿司匹林、利尿劑的比例均高于硬化組（P＜0.05 或 0.01）。兩組 BMI差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。

2.2 兩組患者生化指標(biāo)、LVEF及中性粒細(xì)胞CD99分子表達(dá)比較 見表2。

表1 兩組患者一般資料的比較

注：ACEI：血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑；ARB：血管緊張素受體阻滯劑

表2 兩組患者生化指標(biāo)、LVEF及中性粒細(xì)胞CD99分子表達(dá)比較

由表2可見，冠心病組患者血清TG、中性粒細(xì)胞CD99的表達(dá)均高于硬化組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或 0.01），余指標(biāo)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P ＞0.05）。

2.3 冠心病危險因素的多因素logistic回歸分析 見表3。

由表3可見，冠心病與年齡、糖尿病、高血壓、吸煙、TG、TC、LDL-C及中性粒細(xì)胞CD99的表達(dá)均呈正相關(guān)（P＜0.05 或 0.01）。

表3 冠心病危險因素的多因素logistic回歸分析

3 討論

本研究評估了中性粒細(xì)胞CD99的表達(dá)水平與冠狀動脈疾病之間的關(guān)系,提示中性粒細(xì)胞CD99表達(dá)可能與冠心病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥疾病[8]，白細(xì)胞遷移到損傷的內(nèi)皮下是動脈粥樣硬化病變形成的早期步驟[9-10]，因此，白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞上的黏附分子與動脈粥樣硬化有關(guān)，許多黏附分子如P-選擇素糖蛋白配體-1[11]、血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1[12]、連接黏附分子-A[13]和細(xì)胞間黏附分子（ICAM）-1[14]在冠心病患者的血液循環(huán)或載脂蛋白E缺陷小鼠的動脈粥樣硬化斑塊中表達(dá)上調(diào)。CD99是一種高度糖基化的跨膜蛋白，32kDa，在大多數(shù)造血細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)。研究表明CD99是中性粒細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移的重要介質(zhì)[4-5]。Lou等[15-16]認(rèn)為CD99和血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子（PECAM）控制白細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移的不同步驟，并且CD99作用在PECAM的下游，阻斷CD99能抑制白細(xì)胞與內(nèi)皮連接處的細(xì)胞遷移，另外，Wanrooij等[17]研究表明抗CD99疫苗可以防止低密度脂蛋白受體缺陷的小鼠動脈粥樣硬化的形成。因此，中性粒細(xì)胞CD99表達(dá)水平增高可能通過促進(jìn)跨內(nèi)皮遷移，從而加速動脈粥樣硬化的進(jìn)展。

參與CD99調(diào)節(jié)的機(jī)制和信號通路目前還不清楚。體外實(shí)驗(yàn)表明，特異性蛋白1（SP1）對CD99的表達(dá)有正調(diào)控作用，而Epstein-Barr病毒潛伏膜蛋白1通過核因子-κB（NF-κB）負(fù)調(diào)控 CD99 的表達(dá)[18]。CD99 在某些人類腫瘤中表達(dá)下調(diào)，如胃腺癌和鼻咽癌[19-20]。研究表明CD99能因炎癥刺激或細(xì)胞因子而表達(dá)上調(diào)[17]，動脈粥樣硬化病變過程中炎癥和免疫扮演了重要角色[21]，循環(huán)炎癥介質(zhì)如白介素（IL）-6、腫瘤壞死因子（TNF）-α和CRP在冠心病患者中升高。因此，冠心病患者中循環(huán)炎癥介質(zhì)的升高可能是導(dǎo)致中性粒細(xì)胞CD99表達(dá)上調(diào)的一個因素。

中性粒細(xì)胞在動脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制中的作用直到最近才被認(rèn)識[22]，動物和人類的研究表明，中性粒細(xì)胞在早期和晚期均參與動脈粥樣硬化的過程[23-25]，中性粒細(xì)胞進(jìn)入動脈壁并維持炎癥惡性循環(huán)[26]。Lou等[15]指出，中性粒細(xì)胞中有大量的CD99儲存池，當(dāng)中性粒細(xì)胞被激活時，這些CD99被大量釋放。這提示冠心病患者血脂異常及炎癥細(xì)胞因子水平升高、氧化應(yīng)激等因素可能上調(diào)中性粒細(xì)胞表面CD99的表達(dá)，從而招募更多的中性粒細(xì)胞進(jìn)入動脈壁中，加速動脈粥樣硬化的發(fā)展。

本研究存在一定的局限性。首先，本研究的數(shù)據(jù)來自單一中心。其次，需要更大的樣本量來進(jìn)一步證實(shí)。第三，研究中未設(shè)健康對照組。

綜上所述，年齡、糖尿病、高血壓、吸煙、TC、TC、LDL-C、中性粒細(xì)胞CD99表達(dá)水平與冠狀動脈粥樣硬化呈正相關(guān)，可能參與冠心病發(fā)展的病理生理過程。中性粒細(xì)胞CD99的表達(dá)有希望成為一個冠心病發(fā)生、發(fā)展預(yù)防和治療的靶點(diǎn)。