微小甲狀腺乳頭狀癌合并慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎的臨床特征和MMP-9表達(dá)

王暉 馬世紅 張正東 韓華中 艾志龍

慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎（chronic lymphocytic thyroiditis，CLT）是一種自身免疫性疾病，部分患者常伴發(fā)甲狀腺腫瘤，以甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinomas，PTC）多見，其中又以≤1 cm的PTC即微小甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid microcarcinoma，PTMC）最常見。近年來，炎癥在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用受到越來越多的關(guān)注，但有關(guān)PTC與CLT之間的關(guān)系一直存在爭議，有學(xué)者指出CLT與PTC的發(fā)生密切相關(guān)[1]，也有學(xué)者認(rèn)為兩者并無關(guān)系[2]。文獻(xiàn)報道CLT與PTC共存率為0.5%～30%，不同研究數(shù)據(jù)差異較大[3]，目前尚無定論CLT是否為PTC發(fā)生的危險因素[4]?；|(zhì)金屬蛋白酶9（matrix metallopeptidase 9，MMP-9）參與降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的膠原等成分，是促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的重要因子之一。本研究對PTMC合并CLT患者與單純PTMC患者的臨床特征進(jìn)行比較，分析兩者腫瘤組織MMP-9的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2017年1月至2019年6月在上海市徐匯區(qū)中心醫(yī)院行甲狀腺切除手術(shù)的PTMC患者194例。所有患者均經(jīng)術(shù)后病理組織學(xué)檢查且診斷明確，無其他內(nèi)分泌系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)疾病，均行單側(cè)或雙側(cè)甲狀腺癌根治術(shù)。其中單純PTMC患者121例（PTMC組），PTMC合并CLT患者73例（PTMC合并CLT組）。兩組患者的腫瘤組織標(biāo)本均行免疫組化檢測MMP-9的表達(dá)情況。本研究經(jīng)上海市徐匯區(qū)中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 回顧并收集兩組患者性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤多灶性、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及有無合并結(jié)節(jié)性甲狀腺腫（nodular goiter，NG）等臨床特征資料。

1.2.2 腫瘤組織MMP-9表達(dá)檢測 手術(shù)切除的腫瘤組織標(biāo)本經(jīng)4%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片。采用鏈霉親和素-過氧化物酶（streptavidin-perosidase，SP）法行MMP-9免疫組化染色。免疫組化試劑盒購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。兔抗人多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，抗體稀釋1∶100。每張切片由2位病理科醫(yī)師雙盲讀片。細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或褐色顆粒判斷為陽性，每張切片隨機(jī)選取5個高倍視野（400倍）。染色強(qiáng)度：無著色記0分，淺黃色記1分，棕黃色記2分，棕褐色記3分。陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：陽性細(xì)胞＜5%記 0分，5%～25%記 1分，26%～50%記 2分，51%～75%記3分，＞75%記4分。免疫組化結(jié)果判定采用半定量評分標(biāo)準(zhǔn)，陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)和染色強(qiáng)度的乘積：0 分記為-，1～4 分為記為+，5～8 分記為為++，9～12分記為+++。－、+視為陰性，++、+++視為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件。計量資料以表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。計數(shù)資料以頻數(shù)和構(gòu)成比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者臨床特征比較 兩組患者性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤多灶性、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及有無合并NG等臨床特征比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），見表1。

2.2 兩組患者腫瘤組織MMP-9表達(dá)情況比較 PTMC組患者腫瘤組織MMP-9陽性表達(dá)率為68.60%（83/121），PTMC 合并 CLT 組患者為 45.20%（33/73），PTMC組高于PTMC合并CLT組（P＜0.05）。

2.3 MMP-9的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的關(guān)系 PTMC組患者中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例，其中MMP-9陽性表達(dá)16例，占80.00%；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移101例，其中MMP-9陽性表達(dá)48例，占47.52%，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者M(jìn)MP-9陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05）。PTMC合并CLT組患者中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例，其中MMP-9陽性表達(dá)7例，占77.78%；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移64例，其中MMP-9陽性表達(dá)23例，占35.94%，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者M(jìn)MP-9陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05）。

3 討論

甲狀腺癌是常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤，近年來，其發(fā)病率呈現(xiàn)全球化激增趨勢[5]，在女性腫瘤中已躍居第6位[6]，很大一部分原因是輔助檢查技術(shù)的進(jìn)步，新確診的甲狀腺癌患者明顯增多。在甲狀腺癌新發(fā)病例中PTMC占據(jù)了相當(dāng)大的比例[7]。CLT又稱自身免疫性甲狀腺炎，是一種以自身甲狀腺組織為抗原的慢性炎癥性自身免疫性疾病。PTC合并CLT的發(fā)病率文獻(xiàn)報道差異較大，為0.5%～30%[3]。近年來發(fā)現(xiàn)，PTC合并CLT的發(fā)病率也呈逐年上升趨勢[8]。目前多認(rèn)為CLT與PTC關(guān)系密切[9]，以往文獻(xiàn)多對PTC與CLT進(jìn)行對比研究[10]，而有關(guān)PTMC與CLT的對比研究不多。

本研究結(jié)果顯示，在PTMC患者中，合并CLT的發(fā)生率為37.6%（73/194），與國內(nèi)報道PTMC合并CLT的發(fā)病率（20.4%～29.1%）稍有差異[11-12]，這可能與各中心的樣本量大小有關(guān)。同時，本研究顯示，PTMC合并CLT組的PTMC多灶性發(fā)生率與CLT組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，這與國內(nèi)已有報道差異不大[13]，偏差可能與診斷方法的不同，而且多灶性發(fā)生時PTMC的病灶較小，存在一定的誤診或漏診有關(guān)。本研究中，PTMC合并CLT組患者中以女性患者居多，這與PTC、CLT在女性中的發(fā)病率較高一致。

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響腫瘤預(yù)后的一個重要指標(biāo)，PTMC的預(yù)后較好，PTMC腫瘤直徑≤0.5 cm時，出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的概率較低[5]。本研究結(jié)果顯示，兩組患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率比較無統(tǒng)計學(xué)差異。MMP-9是金屬蛋白酶家族中相對分子質(zhì)量最大的酶，參與降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的膠原等成分，是促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的重要因子之一[14]。有研究表明MMP-9與PTC的發(fā)生、發(fā)展有明顯關(guān)系[15]。PTMC組患者腫瘤組織MMP-9陽性表達(dá)率為 68.60%（83/121），PTMC 合并CLT組患者為45.20%（33/73），PTMC組高于PTMC合并CLT組。PTMC合并CLT組與PTMC組中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者M(jìn)MP-9陽性表達(dá)率均明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。這說明PTMC中MMP-9的表達(dá)可能與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險有關(guān)。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示MMP-9在PTMC合并CTL患者與PTMC組患者中均有表達(dá)，在PTMC中表達(dá)更高；MMP-9高表達(dá)可能與甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。