廈門市兒童醫(yī)院6歲以下兒童副流感病毒感染流行病學(xué)分析

張進強　蘇德泉　卓志強

[摘要] 目的 分析廈門市兒童醫(yī)院6歲以下兒童副流感病毒（PIV）感染流行病學(xué)特征，為臨床工作提供診療思路，提早進行預(yù)判及治療，避免抗生素濫用。 方法 收集2019 年1月1 日～12月31 日廈門市兒童醫(yī)院6歲以下6930例住院患兒鼻咽拭子、痰液和肺泡灌洗液標(biāo)本，采用實時免疫熒光法對副流感病毒1、2、3型（PIV 1、2、3型）進行檢測，并對副流感病毒（PIV）陽性患兒進行流行病學(xué)分析，并觀察：①PIV各型陽性檢出率;②男女患兒PIV各型檢測陽性結(jié)果;③不同年齡組患兒PIV各型檢測陽性結(jié)果;④不同季節(jié)患兒PIV各型陽性檢測結(jié)果。 結(jié)果 6930例患兒中檢測出副流感病毒（PIV）陽性266例，患兒陽性檢出率為3.84%（266/6930）。呼吸道病毒檢測中PIV 3型陽性檢出率最高，為3.10%（215/6930）;PIV 1型次之，為 0.49%（34/6930）;PIV 2型最低，為0.24%（17/6930）;男性患兒中感染率為 3.91%（163/4169），女性患兒中感染率為 3.73%（103/2761），男女患兒感染率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。不同年齡組PIV各型陽性感染率比較，PIV 3型差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），而PIV 1、2型差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。呼吸道病毒檢測率因季節(jié)而異，PIV 3型春、夏兩季病毒檢出陽性率明顯高于秋、冬兩季，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。秋季PIV 1型和PIV 2型陽性率均高于春、夏、冬三季，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 廈門市兒童醫(yī)院6歲以下住院兒童急性呼吸道病毒感染中，PIV感染病例多，嬰兒期為發(fā)病高峰。以PIV 3型最常見，流行主要發(fā)生于春、夏季節(jié)。PIV 1、2型感染率較低，流行趨勢不確定。

[關(guān)鍵詞] 副流感病毒;呼吸道感染;6歲以下兒童;流行病學(xué)

[中圖分類號] R725.1 ? ? ? ? ?[文獻標(biāo)識碼] B ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-9701（2020）30-0152-05

Epidemiological analysis of parainfluenza virus infection in children under 6 years old in Xiamen Children's Hospital

ZHANG Jinqiang ? SU Dequan ? ZHUO Zhiqiang

Department of Infectious Disease，Xiamen Children's Hospital，Xiamen ? 361006，China

[Abstract] Objective To analyze the epidemiological features of parainfluenza virus（PIV） infection in children under 6 years old in Xiamen Children's Hospital，so as to provide diagnosis and treatment ideas for clinical work，predict and treat in advance and avoid antibiotic abuse. Methods Nasopharyngeal swabs，sputum and alveolar lavage fluid samples of 6930 children under 6 years old admitted to Xiamen Children's Hospital from January 1 to December 31，2019 were collected，and PIV types 1，2 and 3 were detected by real-time immunofluorescence. The epidemiological analysis of PIV positive children was carried out，and the following items were observed. （1）Positive detection rate of PIV types. （2）PIV positive results between male and female children. （3）PIV positive results among children of different ages groups. （4）PIV positive test results among children in different seasons. Results Positive PIV was detected in 266 of 6930 children，and the positive rate of PIV in children was 3.84%（266/6930）. In respiratory virus detection，the positive rate of PIV type 3 was the highest，which was 3.10%（215/6930）. It was followed by PIV type 1，which was 0.49%（34/6930）. PIV type 2 was the lowest，which was 0.24%（17/6930）. The infection rate was 3.91%（163/4169） in male children and 3.73%（103/2761） in female children. There was no significant difference in infection rate between male and female children（P>0.05）. Comparing the positive infection rates among different ages groups，PIV type 3 showed statistically significant difference（P<0.05），while PIV type 1 and PIV type 2 showed no statistically significant differences（P>0.05）. The detection rate of respiratory virus varied with seasons. The positive rates of PIV type 3 in spring and summer were significantly higher than those in autumn and winter，and the differences were statistically significant（P<0.05）. The positive rates of PIV type 1 and PIV type 2 in autumn were higher than those in spring，summer and winter，and the differences were statistically significant（P<0.05）. Conclusion PIV infections are common among hospitalized children under 6 years old in Xiamen Children's Hospital，and the peak incidence is in infancy. PIV type 3 is the most common type，and the epidemic mainly occurs in spring and summer. The infection rates of PIV type 1 and PIV type 2 are lower，and the epidemic trend is uncertain.

[Key words] Parainfluenza virus; Respiratory tract infection; Children under six years old; Epidemiology

呼吸道感染是兒童常見的疾病，發(fā)病率與病死率在全球范圍內(nèi)均居高不下，根據(jù)發(fā)展中國家研究數(shù)據(jù)顯示，6歲以下兒童呼吸道感染病死率超過20%[1]。尤其是呼吸道病毒感染，由于無法明確致病原因，導(dǎo)致抗生素濫用，治療無效[2]。其中副流感病毒（Parainfluenza virus，PIV）是可以引起各個年齡階段兒童感染的常見呼吸道病毒，也是導(dǎo)致嬰幼兒高發(fā)病率和死亡率主要原因之一，在呼吸道病原譜中排名第二位，僅次于呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial viruses，RSV）[3-5]。兒童PIV和RSV均可誘發(fā)毛細(xì)支氣管炎、支氣管肺炎以及誘發(fā)兒童哮喘病情加重，導(dǎo)致住院率較高。此外，醫(yī)院中大多數(shù)基于實驗室診斷的研究仍僅限于RSV，PIV相對較少。針對于PIV，由于缺乏快速診斷手段及有效的抗病毒藥物治療，往往導(dǎo)致PIV快速傳播和高致死率的風(fēng)險?，F(xiàn)就廈門市兒童醫(yī)院6930例6歲以下住院兒童副流感病毒（PIV）感染的流行病學(xué)特征進行分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料

收集2019年1月1日～12月31日廈門市兒童醫(yī)院6歲以下住院患兒6930例的鼻咽拭子、痰液和肺泡灌洗液標(biāo)本，其中男4169例，女2761例，年齡1個月3 d～6歲。納入呼吸道感染癥狀病例有咳嗽或咽痛、鼻塞、流涕、伴或不伴發(fā)熱（腋下體溫≥38.0℃）等。

1.2 試劑與儀器

采用Diagnostic Hybrids，Inc公司生產(chǎn)的七項呼吸道病毒檢測試劑盒（免疫熒光法），主要通過基于熒光標(biāo)記單克隆抗體的免疫熒光法，對鼻咽吸取液、痰液或肺泡灌洗液標(biāo)本中的副流感病毒1型（PIV 1型）、副流感病毒2型（PIV 2型）和副流感病毒3型（PIV 3型）進行定性檢測。 定性檢測：急性呼吸道感染患兒住院7 d內(nèi)留取標(biāo)本，采用一次性無菌吸痰管吸取1～2 mL深部鼻咽分泌物或痰液，加入少量生理鹽水置于收集管中或行纖維支氣管鏡吸取肺泡灌洗液及時送實驗室行直接免疫熒光（Direct immunofluorescence assayk，DFA）檢測。

1.3 方法

所有七項呼吸道病毒檢測和結(jié)果判斷均按上述試劑操作說明書執(zhí)行，參照《七項呼吸道病毒檢測試劑盒（鑒定）實用說明書》。當(dāng)天9：00之前的標(biāo)本當(dāng)天完成檢測，當(dāng)天 9：00 以后的標(biāo)本放入-4℃冰箱中暫存，于第2天 9：00再進行檢測，如此循環(huán)。檢測步驟：將標(biāo)本樣本充分震蕩10～15 s 后，于 400～600 xg離心 5～10 min，棄上清，重新加入 500 μL PBS緩沖液重新混懸。再將處理好的標(biāo)本混懸液吸取 200 μL，在8孔板內(nèi)滴加25 μL/孔，完全風(fēng)干，用100%丙酮固定細(xì)胞約5～10 min，再次風(fēng)干，最后滴加不同DFA鑒定染色試劑。

1.4 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 評價指標(biāo) ?①PIV各型檢測陽性率比較;②男女患兒PIV各型檢測陽性結(jié)果比較;③不同年齡組患兒PIV各型檢測陽性結(jié)果比較;④不同季節(jié)患兒PIV各型陽性檢測結(jié)果比較。

1.4.2 評價標(biāo)準(zhǔn) ?無論是一種病毒還是兼并兩種病毒檢測結(jié)果呈現(xiàn)陽性 ，均視為陽性感染[6]。判斷結(jié)果：200倍顯微鏡下每視野找到≥2個綠色熒光細(xì)胞即為陽性，否則為陰性。陰性細(xì)胞被Evans Blue染成紅色[7]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用 Excel 軟件進行數(shù)據(jù)錄入和整理，核對后采用SPSS23.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PIV各型檢測陽性率比較

6930例患兒中檢測出PIV陽性266例，陽性患兒檢出率為 3.84%（266/6930）。PIV各型中以 PIV 3型為主，感染率為3.10%（215/6930）;其次是PIV 1型，感染率為0.49%（34/6930）;PIV 2型感染率最低，為 0.24% （17/6930）。

2.2 男女患兒PIV各型檢測陽性結(jié)果比較

見表1。6930例患兒中男4169例，陽性男163例，陽性率為3.91%（163/4169），病毒感染率為2.35%（163/6930）;女2761例，陽性女103例，陽性率為3.73%（103/2761），病毒感染率為1.49%（103/6930）。男女患兒各型PIV檢測陽性率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（PIV 1型：χ2=0.799，P>0.05;PIV 2型：χ2=1.892，P>0.05;PIV 3型：χ2=0.110，P>0.05）。

2.3 不同年齡組患兒PIV各型檢測陽性結(jié)果比較

見表2。<6個月組的陽性患兒62例，陽性率為 4.22%（62/1469）;6個月～<1歲組的陽性患兒56例，陽性率為 5.71%（56/980）;1歲～< 2 歲組的陽性患兒68例，陽性率為 5.04%（68/1349）;2歲～< 4歲組的陽性患兒55例，陽性率為2.58%（55/2128）;4歲～< 6歲組的陽性患兒10例，陽性率為1.00%（10/1004）。不同年齡組患兒PIV各型檢測陽性率比較，PIV 3型差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=63.545，P<0.05）。PIV 1型與PIV 2型差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（PIV 1型：χ2=4.694，P>0.05;PIV 2型：χ2=4.348，P>0.05）。

2.4 不同季節(jié)患兒PIV各型陽性檢測結(jié)果比較

見表3。不同季節(jié)PIV各型陽性感染率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。PIV 3型春、夏兩季病毒檢出陽性率明顯高于秋、冬兩季，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。秋季PIV 1型和PIV 2型陽性率均高于春、夏、冬三季，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

副流感病毒（PIV）于1950年首次被人類發(fā)現(xiàn)。PIV是單鏈RNA病毒，屬于副黏病毒科，在遺傳和抗原上分為1、2、3、4型，以及兩個屬性：呼吸道病毒屬（PIV 1型和PIV 3型）和風(fēng)疹病毒屬（PIV 2型和PIV 4型）。根據(jù)美國相關(guān)研究數(shù)據(jù)表明，PIV感染風(fēng)險最高的人群是學(xué)齡前期兒童，對于6歲以下的兒童，每年超過160萬兒童感染PIV。嬰幼兒（特別是<6個月）特別容易感染PIV 3型，其中美國每年有1.8萬例嬰幼兒因感染PIV 3型而住院[8-11]。

PIV各個亞型在生物學(xué)特點與基因結(jié)構(gòu)上相似，但每個亞型可在不同年齡段中引起某種獨特的臨床疾病，并在發(fā)病年齡、季節(jié)以及臨床表現(xiàn)上有所不同。其中PIV 1型與PIV 2型是導(dǎo)致嬰幼兒急性喉、氣管、支氣管炎的主要病因[12]。PIV 3型在呼吸道感染中發(fā)病率最高，PIV 3型高發(fā)病率可能與其病毒結(jié)構(gòu)相關(guān)，PIV 3型有2個副黏蛋白受體結(jié)合位點，能吸附于靶細(xì)胞，從而導(dǎo)致病毒包膜與宿主靶細(xì)胞膜出現(xiàn)融合[3]。病毒在宿主呼吸道纖毛上皮細(xì)胞中結(jié)合和復(fù)制[8，13]。感染從鼻和口咽開始，在初次感染后 2～5 d擴散至下呼吸道并達到復(fù)制高峰，是引起呼吸道感染流行的主要病原之一，容易引起肺炎及喘息性支氣管肺炎。

根據(jù)文獻報道及臨床數(shù)據(jù)顯示，兒童中PIV感染好發(fā)年齡在6歲以下[8]。本研究結(jié)果顯示，<6個月組的陽性患兒62例，陽性率為4.22%（62/1469）;6個月～<1歲組的陽性患兒56例，陽性率為5.71%（56/980）;1歲～<2歲組的陽性患兒68例，陽性率為5.04%（68/1349）;2歲～<4歲組的陽性患兒55例，陽性率為2.58%（55/2128）;4歲～<6歲組的陽性患兒10例，陽性率為1.00%（10/1004）。上述數(shù)據(jù)顯示，4歲以下三個年齡段兒童發(fā)病率較高，隨著年齡增長逐漸降低。因此嬰幼兒期是兒童PIV感染防治的重點時期。各亞型感染中，PIV 1型發(fā)病率最高年齡組為1歲～<2歲組（0.74%）;PIV 3型發(fā)病率最高年齡組為6月～1歲組（5.31%），與國內(nèi)外文獻報道相同[14-17]。針對PIV的宿主防御主要是通過對兩種表面糖蛋白HN和F的體液免疫介導(dǎo)[18-19]。大多數(shù)兒童出生時均具有針對這三種PIV的中和抗體，但這些滴度在出生后6個月內(nèi)迅速下降。在嬰幼兒時期黏膜免疫中發(fā)揮重要作用的IgA、IgG、IgE水平分別相當(dāng)于成人的22%、60%、50%，提示免疫功能相對低下。而嬰幼兒期PIV感染率高，可能與其自身免疫功能不完善及特異性 PIV抗體缺失有關(guān)，隨著年齡增長自身免疫功能不斷完善及特異性PIV抗體水平逐漸增加，感染率逐漸降低。另外，年長兒成長過程中反復(fù)呼吸道感染過程中獲得中和病毒抗體及細(xì)胞免疫作用，使得下呼吸道免受 PIV反復(fù)感染[8，18]。

不同季節(jié)兒童PIV感染率差異顯著，PIV 3型春、夏兩季的感染率高于秋、冬兩季，兒童PIV 1型及PIV 2型僅為秋季感染率高，其他三季發(fā)病率無明顯差異。溫度，濕度，pH和存儲液成分等環(huán)境條件極易影響PIV感染率[20]。PIV 3型春、夏兩季感染率高，與廈門地區(qū)和江浙滬地區(qū)的流行季節(jié)一致，可能是因為廈門地區(qū)和江浙滬地區(qū)同為長江中下游地帶，春夏季節(jié)雨水多、濕度大、溫度高，高溫潮濕的氣候更易使PIV 3型形成大的氣溶膠，能夠在空氣中有更長存活時間進行傳播[16，21-23]。而根據(jù)美國報道數(shù)據(jù)顯示，PIV 1型每兩年有一次在奇數(shù)年秋季流行，而PIV 2型每年于秋季流行。與本研究中兒童PIV 1型、PIV 2型均于秋季感染率顯著增高相一致[24-26]。

PIV與上、下呼吸道感染性疾病相關(guān)。但是PIV 1型、2型和3型各有特定的臨床綜合征。在臨床癥狀中咳嗽和發(fā)熱是 PIV 常見的臨床表現(xiàn)。兒童感染PIV患有肺炎、喘息性支氣管肺炎、支氣管炎，以及高熱和低熱性喘息，大部分感染發(fā)生在6個月～4歲。臨床診斷多為肺炎。絕大多數(shù)病例出現(xiàn)肺部大片實變或重癥肺炎病例數(shù)較少。這與李莉等[27]研究結(jié)果一致。

綜上所述，在當(dāng)前臨床診療中對PIV感染的治療尚無特效治療方法的情況下，本研究通過對廈門市兒童醫(yī)院6歲以下6930例住院兒童進行為期一年的PIV患病情況分析，了解其流行特點及發(fā)病特征。針對門診急診無法在短時間內(nèi)明確病原學(xué)或檢驗條件無法開展病原學(xué)檢查的情況下，為臨床醫(yī)療人員提供診療思路，可以盡早對PIV進行預(yù)判及治療，盡可能避免抗生素的濫用，并制定預(yù)防措施。

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（收稿日期：2020-07-20）