山羊EDNRA基因編碼區(qū)克隆與組織表達(dá)規(guī)律分析

王 夢(mèng)，周靖宣，占思遠(yuǎn)，王林杰，李 利，張紅平，仲 濤

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院/畜禽遺傳資源發(fā)掘與創(chuàng)新利用四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都 611130）

內(nèi)皮素受體（endothelin receptor，EDNR）是結(jié)合內(nèi)皮素配體的視紫紅質(zhì)受體β 組的G 蛋白偶聯(lián)受體（G protein-coupled receptor；GPCR）[1]，具有7 個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，通常由7 個(gè)外顯子編碼，N 端在細(xì)胞外，C 端在細(xì)胞內(nèi)，這決定了內(nèi)皮素受體與G 蛋白結(jié)合后可以參與動(dòng)物細(xì)胞的增殖、遷移、分化和血管生成等多種生理過程[2-3]。內(nèi)皮素受體家族基因主要包括內(nèi)皮素受體A 型基因（EDNRA）和內(nèi)皮素受體B 型基因（EDNRB）[4]。EDNR基因通過與鳥嘌呤-核苷酸結(jié)合（G）蛋白從而激活磷脂酰肌醇-鈣第二信使系統(tǒng)發(fā)揮各種功能。EDNRA基因在羊駝中影響黑色素細(xì)胞的形成從而影響毛色的形成，且隨著近現(xiàn)代的深入研究發(fā)現(xiàn)該基因與人類顱面發(fā)育及心血管疾病等有重要關(guān)系[5-7]。EDNRA基因主要在胎盤、心房、腎平滑肌、主動(dòng)脈、腦血管、肺中分布，最新研究表明它可以參與介導(dǎo)平滑肌細(xì)胞的增殖和血管收縮舒張[8]。

內(nèi)皮素（endothelin，ET）通過與受體結(jié)合而誘導(dǎo)信號(hào)通路，是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的血管收縮的物質(zhì)[9]。內(nèi)皮素有3種異構(gòu)體，包括內(nèi)皮素-1（ET-1）、內(nèi)皮素-2（ET-2）、內(nèi)皮素-3（ET-3）[10]。ET-1與EDNRA具有很高的親和力，主要通過下游的這兩個(gè)G 蛋白偶聯(lián)受體EDNRA和EDNRB發(fā)揮作用。ET-1誘導(dǎo)表達(dá)受體EDNRA的交感神經(jīng)元投射到通向心臟的腔靜脈[11]。研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮素軸組分（EDNRA、EDNRB、ET-1、ET-3）在髓外造血器官的發(fā)育中有表達(dá)[12]。在人類胚胎發(fā)生時(shí)期，ET-1-EDNRA軸對(duì)稱調(diào)節(jié)顱面和心血管形態(tài)的發(fā)生，內(nèi)皮素通路蛋白與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)慢性疾病等血管疾病密切相關(guān)[5，13]。急性腦出血大鼠體內(nèi)內(nèi)皮素表達(dá)升高及血漿降鈣素基因相關(guān)肽表達(dá)降低[14]。EDNRA的過表達(dá)可以促進(jìn)體外骨髓細(xì)胞的增值和抗凋亡能力[15]。在非洲爪蟾中發(fā)現(xiàn)了第三種內(nèi)皮素，被稱為EDNRC，但對(duì)其還未有深入研究[10]。

EDNRA基因的表達(dá)與其功能有緊密的關(guān)系，但至今有關(guān)EDNRA基因的研究多集中在與人類血管有關(guān)的疾病上，在草食動(dòng)物尤其是山羊體內(nèi)的研究較少，其在山羊各組織中的表達(dá)規(guī)律尚不明確。因此，本試驗(yàn)以簡(jiǎn)州大耳羊?yàn)樵囼?yàn)對(duì)象，克隆得到EDNRA的cDNA 序列、預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)并通過qPCR 技術(shù)來探究EDNRA在不同組織中的表達(dá)規(guī)律，為后續(xù)功能研究提供理論基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料

試驗(yàn)動(dòng)物簡(jiǎn)州大耳羊來自四川省簡(jiǎn)陽(yáng)市簡(jiǎn)州大耳羊育種場(chǎng)，隨機(jī)采集無親緣關(guān)系的3 只2 月齡健康母羊的心臟、肝、脾、肺、腎、大腦和網(wǎng)膜共7 個(gè)組織樣品，取各組織樣3～5 g，用無菌生理鹽水處理，迅速置于液氮中帶回試驗(yàn)室，置于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法

1.2.1 總RNA 的提取和反轉(zhuǎn)錄

將提前凍存的樣品在液氮中迅速研磨成粉，采用Trizol（Invitrogen，美國(guó)）法提取樣品的總RNA 后用核酸蛋白檢測(cè)儀（Bio-Rad，美國(guó)）測(cè)定RNA 濃度（A260nm/A280nm＞1.8），再經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)一步鑒定。采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScrip RT reagent Kit（TaKaRa，Dalian，China）對(duì)總RNA 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，編號(hào)后置于-20 ℃保存?zhèn)溆?，RNA 存放于-80 ℃保存?zhèn)溆?/p>

1.2.2 引物設(shè)計(jì)與合成

下載NCBIGenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)中公布的山羊EDNRA基因的序列（XM_005691200.3），通過BLAST 對(duì)序列進(jìn)行在線比對(duì)，確定EDNRA基因的保守序列，利用Primer Premier 5.0 軟件設(shè)計(jì)引物（表1），用于基因的PCR 擴(kuò)增及克隆測(cè)序。再根據(jù)克隆測(cè)序得到的山羊EDNRA基因CDS 全長(zhǎng)序列及內(nèi)參基因β-Actin序列設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)定量PCR引物（表1）。引物均由成都擎科生物科技有限公司合成。并通過BLAST工具進(jìn)行比對(duì)檢索和PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果，驗(yàn)證引物的特異性。

1.2.3EDNRA基因的克隆與測(cè)序

以肝臟組織cDNA 為模板，PCR 擴(kuò)增山羊EDNRACDS 區(qū)全長(zhǎng)序列。PCR 擴(kuò)增反應(yīng)體系為30 μL：2×TaqPCR Master Mix 15 μL，ddH2O 11.5 μL，cDNA 0.5 μL，上、下游引物（10 μmol/L）各1.5 μL。PCR 擴(kuò)增反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性4 min；94 ℃變性45 s，退火（溫度見表1）30 s；72 ℃延伸90 s，35 個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸8 min；12 ℃保存。PCR 產(chǎn)物擴(kuò)增后，在1.5%瓊脂糖凝膠檢測(cè)PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物，紫外凝膠成像儀（Bio-Rad）觀察結(jié)果。使用凝膠回收試劑盒（TIAN gel Midi Purification Kit）純化回收目的片段。將純化回收的產(chǎn)物進(jìn)行T-A 克隆，將EDNRA序列在16 ℃溫度下連接到pMD19-T 載體上，轉(zhuǎn)化大腸埃希菌DH5α 感受態(tài)細(xì)胞，涂布于LB 培養(yǎng)基中，37 ℃恒溫箱培養(yǎng)過夜，挑選單克隆菌落擴(kuò)大培養(yǎng)，將初步鑒定為陽(yáng)性克隆的重組質(zhì)粒送成都擎科偉業(yè)生物技術(shù)有限公司測(cè)序。

1.2.4EDNRA的生物信息學(xué)分析

對(duì)山羊EDNRA基因CDS 區(qū)進(jìn)行序列分析和蛋白生物信息結(jié)構(gòu)功能預(yù)測(cè)，分析預(yù)測(cè)工具見表2。

1.2.5EDNRAqPCR 檢測(cè)

根據(jù)克隆得到的山羊EDNRA序列，選用βactin（NM_001009784）作為內(nèi)參基因。采用Primer Premier5.0 軟件設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)熒光定量引物（表1）。使用Bio-Rad CFX 96 熒光定量PCR 儀檢測(cè)目的基因及內(nèi)參的表達(dá)量，每組3個(gè)重復(fù)。反應(yīng)體系為10 μL：SYBRPremix ExTaqTMⅡ（TaKaRa，Dalian，China）5 μL，上下游引物（10 μmol/L）各0.4 μL，cDNA 模板0.8 μL，ddH2O 3.4 μL。反應(yīng)條件.：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃5 s，58.5 ℃30 s，39 個(gè)循環(huán)；以0.5 ℃/s的速度65 ℃緩慢遞增到95 ℃，同時(shí)對(duì)熒光信號(hào)的變化進(jìn)行觀察，如果隨著溫度的升高信號(hào)強(qiáng)度隨著降低，且形成一個(gè)單一的峰，沒有任何雜峰，則說明產(chǎn)物的擴(kuò)增為特異性的。

表1 引物信息Table 1 Primer information

表2 DNA 和蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)分析工具Table 2 DNA and protein sequence data analyses tools

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

Bio-Rad CFX 96 熒光定量PCR 得到的結(jié)果采用2-ΔΔCt方法分析各目的基因的相對(duì)表達(dá)量，數(shù)據(jù)均用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，并用SAS 8.0 軟件的GLM過程進(jìn)行最小二乘分析，Duncan 法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 EDNRA 編碼基因擴(kuò)增及克隆結(jié)果

根據(jù)羊EDNRA基因mRNA 設(shè)計(jì)特異性引物，以山羊肝臟cDNA 為模板擴(kuò)增后，在1.5%瓊脂糖凝膠檢測(cè)PCR 產(chǎn)物，紫外凝膠成像儀（Bio-Rad）觀察所獲得目標(biāo)產(chǎn)物為1 284 bp（圖1）與預(yù)期結(jié)果相符。克隆測(cè)序結(jié)果顯示，片段大小為1 284 bp，與預(yù)期目的條帶大小一致。

圖1 山羊EDNRA 基因PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖Figure 1 Agarose gel electrophoresis of goat EDNRA gene amplified by PCR

2.2 EDNRA 序列分析

根據(jù)測(cè)序得到的CDS 全長(zhǎng)序列，使用NCBI 的工具ORF Finder 對(duì)克隆得到的山羊EDNRA基因序列進(jìn)行開放閱讀框分析，得知該基因包含一個(gè)1 284 bp 的最長(zhǎng)開放閱讀框。該序列編碼427 個(gè)氨基酸，含信號(hào)肽序列（第1 到第20 位氨基酸），以及7 型跨膜受體同系物結(jié)構(gòu)域（圖2）。

2.3 山羊EDNRA 蛋白質(zhì)分析

2.3.1 蛋白質(zhì)理化性質(zhì)分析

在線軟件ProtParam 分析結(jié)果顯示蛋白質(zhì)分子量為48 378.83 g/mol，等電點(diǎn)為8.354。負(fù)電荷氨基酸殘基總數(shù)（Asp + Glu）28 個(gè)，正電荷氨基酸殘基總數(shù)（Arg+Lys）是36 個(gè)。分子式C2200H3428N562O600S33，其不穩(wěn)定系數(shù)為39.07，脂肪系數(shù)為100.87，總平均親水指數(shù)0.325。

圖2 山羊EDNRA 序列分析Figure 2 Sequence analysis of goat EDNRA

2.3.2 蛋白質(zhì)親水性/疏水性分析

關(guān)于蛋白質(zhì)的親水性/疏水性，從ProtScale 預(yù)測(cè)得到，EDNRA基因編碼的多肽鏈的第312、位存在最大值3.422，疏水性最強(qiáng)。第412 位存在最小值-3.300，親水性最強(qiáng)，整條鏈中親水性氨基酸殘基少于疏水性氨基酸殘基，由此推測(cè)該基因編碼的蛋白為疏水性蛋白（圖3）。

2.3.3 蛋白質(zhì)信號(hào)肽及跨膜結(jié)構(gòu)域測(cè)分析

從Signal P 4.1 Server 預(yù)測(cè)信號(hào)肽的結(jié)果中可以看出，EDNRA基因在氨基酸序列的第20 和21位存在一個(gè)潛在的信號(hào)肽斷裂位點(diǎn)，概率為0.450。S 和Y 指標(biāo)最高點(diǎn)均處于20～21 位區(qū)間，表明EDNRA基因編碼蛋白的1～20 位可能為該蛋白的信號(hào)肽，屬于分泌蛋白（圖4）。

PSORT 在線軟件對(duì)目的蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該蛋白存在于細(xì)胞外的可能性為0.64，存在高爾基體的可能性為0.46，存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的可能性為0.37，存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔的可能性為0.10，因此推測(cè)該蛋白屬于膜外蛋白。

2.3.4 潛在磷酸化位點(diǎn)分析

圖3 EDNRA 基因編碼氨基酸疏水性/親水性的預(yù)測(cè)Figure 3 Prediction of amino acid hydrophobicity/hydrophilicity encoded of EDNRA gene

氨基酸序列潛在磷酸化位點(diǎn)使用在線工具NetPhos 2.0 Server 分析，結(jié)果顯示該序列具有潛在的磷酸化位點(diǎn)，總數(shù)為35，且分別位于絲氨酸（Ser）、蘇氨酸（Thr）和酪氨酸（Tyr）3種氨基酸上，其中絲氨酸（Ser）上潛在的磷酸化位點(diǎn)數(shù)最多，為20 個(gè)（圖5）。

圖4 EDNRA 基因編碼蛋白信號(hào)肽預(yù)測(cè)Figure 4 Prediction of EDNRA gene coding protein signal peptide

圖5 EDNRA 基因氨基酸序列潛在磷酸化位點(diǎn)分析Figure 5 Analysis of potential phosphorylation sites of amino acid sequence of EDNRA gene

2.3.5 蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

使用SOPMA 預(yù)測(cè)該蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)由α-螺旋（44.96%）、延伸鏈（13.58%）、無規(guī)則卷曲（39.11%）和β 轉(zhuǎn)角（2.34%）4 種結(jié)構(gòu)元件組成，其中α-螺旋和無規(guī)則卷曲比例較高（圖6）。

2.3.6 蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

EDNRA 蛋白可能的三級(jí)結(jié)構(gòu)如圖所示（圖7），其主要構(gòu)成依然為α-螺旋、延伸鏈、無規(guī)則卷曲和β 轉(zhuǎn)角，與二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)構(gòu)基本一致。其全局模型質(zhì)量估計(jì)（Global model quality estimation，GMQE）值為0.66。

2.4 EDNRA 基因相似性及親緣關(guān)系進(jìn)化樹分析

本研究采用基于系統(tǒng)遺傳學(xué)的最大似然法（maximum likelihood）和貝葉斯分析法（Bayesian inference）進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育的構(gòu)建。在貝葉斯分析中，通過MrModeltest 2.3 中的Akaike information criterion（AIC）選擇在DNA 序列中使用一個(gè)一般的時(shí)間可逆模型，其中有一定比例的不變位點(diǎn)，位點(diǎn)分布率不同。使用Phyml 引導(dǎo)評(píng)估樹的穩(wěn)定性。數(shù)據(jù)按密碼子位置進(jìn)行分區(qū)，本研究使用4 個(gè)獨(dú)立的鏈（每1 000 代取樣一次）進(jìn)行了500 萬代Bayesian Markov chain Monte Carlo 分析，前50 萬代被丟棄。當(dāng)分裂頻率的平均標(biāo)準(zhǔn)差小于0.01 時(shí)，認(rèn)為平穩(wěn)性。為了得到一系列的系統(tǒng)發(fā)育距離收集了綿羊（Ovisaries）、牛（Bostaurus）、野牛（Bison）、野豬（Susscrofa）、驢（Equusasinus）、獼猴（Macacamulatta）、人（Homosapiens）、小鼠（Musmusculus）、褐家鼠（Rattusnorvegicus）的EDNRA氨基酸序列。初始數(shù)據(jù)集和完整數(shù)據(jù)集的蛋白質(zhì)序列使用默認(rèn)參數(shù)設(shè)置，分別由MUSCLE對(duì)齊，它是發(fā)現(xiàn)的性能最好的對(duì)齊程序之一。選擇最小化手工對(duì)其編輯來避免引入偏差。PAL2NAL 是一種利用匹配氨基酸序列構(gòu)建多密碼子序列比對(duì)的程序，可以精確的獲得序列的核苷酸對(duì)比。系統(tǒng)進(jìn)化如樹圖8 所示。分析結(jié)果表明，山羊EDNRA基因和綿羊、牛以及野牛的親緣關(guān)系較近。

圖6 EDNRA 蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Figure 6 Secondary structure prediction of EDNRA protein

圖7 EDNRA 蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Figure 7 The tertiary structure prediction of EDNRA protein

2.5 基因的組織表達(dá)分析

應(yīng)用qPCR 的方法檢測(cè)了山羊EDNRA基因在心、肝、脾、肺、腎、大腦和網(wǎng)膜組織7 種組織中的表達(dá)情況。以β-actin作為內(nèi)參基因，檢測(cè)的表達(dá)結(jié)果為：山羊EDNRA基因在心臟的表達(dá)量最高，在肝、脾、腎、大腦、網(wǎng)膜組織中的表達(dá)量較低，而在肺中表達(dá)最少（圖9）。

3 討論

本研究通過克隆獲得了山羊該基因CDS 全序列，EDNRA基因編碼區(qū)長(zhǎng)度為1 284 bp，位于17號(hào)染色體上。EDNRA基因編碼427 個(gè)氨基酸。蛋白質(zhì)分子量為48 378.83 g/mol，分子式C2200H3428N562O600S33，等電點(diǎn)為8.353，負(fù)電荷氨基酸殘基總數(shù)（Asp + Glu）28 個(gè)，正電荷氨基酸殘基總數(shù)（Arg + Lys）是36個(gè)。其不穩(wěn)定系數(shù)為39.07，脂肪系數(shù)為100.87，總平均親水指數(shù)0.325。信號(hào)肽預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)EDNRA基因在氨基酸序列存在潛在的信號(hào)肽，屬于分泌蛋白，這表明了該蛋白可以轉(zhuǎn)運(yùn)到不同膜結(jié)構(gòu)的亞細(xì)胞器內(nèi)，并發(fā)揮相應(yīng)的功能。據(jù)對(duì)目的蛋白的亞細(xì)胞定位，發(fā)現(xiàn)該蛋白存在于細(xì)胞外的可能性較大，適應(yīng)于G蛋白偶聯(lián)受體的功能，信號(hào)間傳導(dǎo)通過細(xì)胞膜信號(hào)傳導(dǎo)器G 蛋白將信息通過活化的受體從細(xì)胞外傳到細(xì)胞內(nèi)[3]。氨基酸序列存在潛在磷酸化位點(diǎn)，總數(shù)為35，且分別位于絲氨酸（Ser）、蘇氨酸（Thr）和酪氨酸（Tyr）3種氨基酸上，其中絲氨酸（Ser）上潛在的磷酸化位點(diǎn)數(shù)最多，為20 個(gè)，這使細(xì)胞間的各種信號(hào)可以有效傳遞和交流。該氨基酸序列與綿羊（Ovisaries）、牛（BosTaurus）、豬（Susscrofa）、人（Homosapiens）、小鼠（Musmusculus）的相似性分別為98.59%、98.13%、94.61%、93.68%和90.40%。這與氨基酸序列構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果保持一致，也進(jìn)一步證實(shí)了EDNRA序列在物種間具有高度保守性。通過在核苷酸和氨基酸水平上的同源比對(duì)分析，結(jié)果表明山羊EDNRA同源性與綿羊、牛、野牛相似度較高，即分類學(xué)觀點(diǎn)也得到印證，即都屬反芻亞目，牛科。在蛋白質(zhì)二、三級(jí)結(jié)構(gòu)中主要以α-螺旋為主。

圖8 哺乳動(dòng)物EDNRA 基因系統(tǒng)進(jìn)化樹Figure 8 Phylogenetic tree of EDNRA gene in mammals

圖9 EDNRA 基因在7 種組織中的表達(dá)Figure 9 Expression of EDNRA gene in 7 tissues

山羊EDNRA基因qPCR 檢測(cè)結(jié)果表明，EDNRA基因在山羊心臟中高表達(dá)，在肝、脾、腎、大腦和網(wǎng)膜中低表達(dá)，在肺臟內(nèi)幾乎不表達(dá)。推測(cè)EDNRA在心臟行使其功能的過程中發(fā)揮重要，這與Honore Jean-Claude 等[14]的研究一致。內(nèi)皮素是軸突生長(zhǎng)的一般介質(zhì)，指導(dǎo)由動(dòng)脈構(gòu)成的交感神經(jīng)細(xì)胞軸突的發(fā)育，軸突支配和控制著大量的靶細(xì)胞，包括外分泌腺和內(nèi)分泌腺的導(dǎo)管，腸和血管的平滑肌層，心肌和節(jié)點(diǎn)等[16]。心臟是動(dòng)物的重要器官，參與血管中的血液循環(huán)，由心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)調(diào)節(jié)的自身的協(xié)調(diào)收縮是生存所必需的[17]。有研究表明，在發(fā)育中的雞胚中，EDNRA在心肌細(xì)胞中表達(dá)，心肌細(xì)胞內(nèi)皮素信號(hào)傳導(dǎo)足以誘導(dǎo)雞的心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為外周浦肯野纖維，進(jìn)而影響心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)[18]。EDNRA缺失的胚胎心臟常表現(xiàn)為心室壁發(fā)育不全，有絲分裂活性低，Tbx5表達(dá)降低，Tbx2表達(dá)呈倒數(shù)擴(kuò)張[19]。EDNRA是對(duì)血管有舒張和收縮作用的因子[20]。EDNRA基因在內(nèi)皮素通路中的作用較為關(guān)鍵，容易受到基因變異的影響，內(nèi)皮素系統(tǒng)對(duì)血管內(nèi)皮功能的任何改變都可能導(dǎo)致其病理生理學(xué)改變[21]。在人類和動(dòng)物模型中的研究表明，ET-1和EDNRA信號(hào)在正常顱面發(fā)育過程中和咽弓的形成模式有重要作用[22-23]。在小鼠的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)錄因子SIX1通過抑制背部?jī)?nèi)胚層內(nèi)皮素1 的表達(dá)來調(diào)控背弓發(fā)育，從而阻止背側(cè)EDNRA信號(hào)的傳遞[24]。還有研究發(fā)EDNRA可能在藏雞胚胎對(duì)缺氧的適應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵的調(diào)控作用[25]，這可能與血管中紅細(xì)胞數(shù)量有關(guān)。這些功能研究在山羊中還未見報(bào)道，因此，EDNRA的具體功能和作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本研究成功獲得山羊EDNRA基因CDS 序列1 284 bp，編碼427 個(gè)氨基酸，在物種間保守程度較高。EDNRA 蛋白含信號(hào)肽序列（第1 到第20 位氨基酸），以及7 型跨膜受體同系物結(jié)構(gòu)域，編碼產(chǎn)物具有疏水性，屬分泌蛋白，存在35 個(gè)潛在的磷酸化位點(diǎn)，分別位于絲氨酸（Ser）、蘇氨酸（Thr）和酪氨酸（Tyr）3種氨基酸位點(diǎn)上。其二級(jí)結(jié)構(gòu)主要以α-螺旋，彎曲折疊后形成復(fù)雜的三級(jí)結(jié)構(gòu)。親緣關(guān)系進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)山羊EDNRA基因和綿羊、牛以及野牛的親緣關(guān)系較近。 qPCR 檢測(cè)結(jié)果表明，山羊EDNRA基因在心臟中高表達(dá)，在肝、脾、腎、大腦、網(wǎng)膜組織中的表達(dá)量較低，而在肺中表達(dá)最少。本試驗(yàn)為進(jìn)一步研究EDNRA在山羊心臟中的功能作用奠定基礎(chǔ)。