植物檢疫實(shí)驗(yàn)室生物安全概況及關(guān)鍵控制點(diǎn)淺析

高 淵 蘇州海關(guān)（江蘇，蘇州，215104）

王振華 武漢海關(guān)（湖北，武漢，430010）

魏春艷 長(zhǎng)春海關(guān)（吉林，長(zhǎng)春，130033）

陶雨風(fēng) 中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可中心（北京，100062）

廖 芳 天津海關(guān)（天津，300041）

吳翠萍 安榆林 南京海關(guān)（江蘇，南京，210001）

孔德英 重慶海關(guān)（重頭，401147）

王有福 大連海關(guān)（遼寧，大連，116001）

1 引言

生物安全的概念有狹義和廣義之分。 狹義的生物安全是指防范由生物技術(shù)的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用所產(chǎn)生的負(fù)面影響，即對(duì)生物多樣性、生態(tài)環(huán)境及人體健康可能構(gòu)成的危險(xiǎn)或潛在風(fēng)險(xiǎn)［1-2］。廣義的生物安全包括了更廣泛的內(nèi)容， 大致可以分為三個(gè)方面：一是指人類(lèi)的健康安全，二是指人類(lèi)賴(lài)以生存的農(nóng)業(yè)生物安全，三是指與人類(lèi)生存息息相關(guān)的生物多樣性，也就是環(huán)境生物安全［3］。

2015 年7 月1 日，新的《國(guó)家安全法》正式實(shí)施，法律對(duì)國(guó)家安全進(jìn)行了明確，首次將“生態(tài)安全”作為其中非傳統(tǒng)安全列入了國(guó)家安全。 生物安全根據(jù)涉及的內(nèi)容進(jìn)行細(xì)分， 在防范生物入侵方面，屬于“生態(tài)安全”和“環(huán)境安全”范疇，在預(yù)防侵入性傳染病方面，屬于“社會(huì)安全”范疇，在保障農(nóng)業(yè)生產(chǎn)特別是糧食生產(chǎn)方面， 屬于 “糧食安全”范疇，在生物武器方面，屬于“軍事安全”范疇。 因此，廣義的生物安全更可以理解為，全球化時(shí)代國(guó)家有效應(yīng)對(duì)生物及生物技術(shù)因素的影響和威脅，維護(hù)和保障自身安全與利益的狀態(tài)和能力［4］。

植物檢疫是生物安全的內(nèi)容之一，隸屬于植物檢疫的生物安全同樣包含很多內(nèi)容，主要包括防范外來(lái)危險(xiǎn)性植物有害生物入侵、對(duì)引進(jìn)種質(zhì)資源進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等。

植物檢疫實(shí)驗(yàn)室生物安全是指為避免植物檢疫實(shí)驗(yàn)室危險(xiǎn)性有害生物向外傳播、擴(kuò)散并導(dǎo)致農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)及生態(tài)環(huán)境危害所采取的綜合措施。 一般意義上的實(shí)驗(yàn)室生物安全主要強(qiáng)調(diào)對(duì)人員的保護(hù)，而植物檢疫實(shí)驗(yàn)室生物安全則更側(cè)重于對(duì)環(huán)境和生態(tài)的保護(hù)［5］，主要包括防止生物逃逸和擴(kuò)散、防止交叉污染、保護(hù)人員健康等內(nèi)容。

2 植物檢疫生物安全起源與案例

2.1 檢疫的產(chǎn)生

檢疫起源于歐洲的地中海國(guó)家。 Quarantine 的本意是40 天，來(lái)源于意大利語(yǔ)quarantina（四十天）和quaranta（四十）兩詞，也是受到宗教的影響的結(jié)果［6］。 14 世紀(jì)中葉，歐洲大陸黑死病、霍亂、黃熱病等流行性疾病肆虐， 引起了歐洲總?cè)丝诘?/4 約2 500 萬(wàn)人死亡，在亞洲僅中國(guó)就死亡1 300 萬(wàn)人。意大利威尼斯城為阻止致命傳染病的傳入蔓延，在1403 年建立了世界上第一個(gè)檢疫站， 規(guī)定外來(lái)船舶及隨船人員必須在海上滯留40 天， 期間沒(méi)有發(fā)生傳染病才允許進(jìn)港和人員上岸。這種防止疫病傳入的檢疫方法被稱(chēng)為“隔離法”，隨著各國(guó)各地區(qū)對(duì)這種方法的引入，quarantine 一詞也逐漸發(fā)展成為“檢疫”［7-8］。由此可見(jiàn)，檢疫的本意是防止有害生物從一地侵入另一地，檢疫的本質(zhì)是防止生物安全問(wèn)題的發(fā)生。

2.2 經(jīng)典案例及重要事件

1660 年，法國(guó)盧昂地區(qū)通過(guò)一項(xiàng)根除小蘗并禁止其傳入的法令， 以控制小麥稈銹病的傳入和流行，這是最早出現(xiàn)的植物檢疫針對(duì)性法令，隨后，德國(guó)、英國(guó)、法國(guó)、俄國(guó)等通過(guò)頒布法令禁止美國(guó)帶蟲(chóng)馬鈴薯進(jìn)口措施［8］。

1859 年原產(chǎn)于美國(guó)的葡萄根瘤蚜隨葡萄枝條傳入法國(guó)，導(dǎo)致法國(guó)及其毗鄰國(guó)家的葡萄園和釀酒業(yè)遭受巨大打擊。 1881 年法國(guó)、德國(guó)等5 個(gè)國(guó)家簽訂了世界上第一份防止危險(xiǎn)性有害生物傳播的國(guó)際條約《葡萄根瘤蚜公約》［9］，這也是世界上第一部關(guān)于植物檢疫生物安全方面的國(guó)際條約，該條約在1929 年在羅馬修改為《國(guó)際植物保護(hù)公約》。

19 世紀(jì)馬鈴薯晚疫病的案例則更大程度說(shuō)明了生物安全的另一個(gè)層面，即植物引種的安全性問(wèn)題。 馬鈴薯是16 世紀(jì)才從新大陸引進(jìn)到歐洲的。1553 年首先引至西班牙，1586 年英國(guó)人在加勒比海擊敗西班牙，馬鈴薯被第一次帶到英國(guó)。 在很長(zhǎng)階段馬鈴薯都作為可觀賞的奇花異草和牲畜飼料，法國(guó)大革命前夕， 皇室用薯花作飾品而不敢食用。當(dāng)時(shí)的英國(guó)是一個(gè)窮國(guó)，糧食短缺，湊巧愛(ài)爾蘭的氣候也適合馬鈴薯種植，于是馬鈴薯在愛(ài)爾蘭被廣泛種植。 到1650 年馬鈴薯已經(jīng)成為愛(ài)爾蘭的主要糧食作物。 同時(shí)使得愛(ài)爾蘭人口從1672 年的110萬(wàn)增加到1801 年的520 萬(wàn)， 再到1846 年的830萬(wàn)。 這種短時(shí)間的人口增長(zhǎng)在歷史上是空前的。 然而，作物物種單一化種植潛藏了糧食安全生產(chǎn)的巨大風(fēng)險(xiǎn)。 1845-1846 年馬鈴薯晚疫病在愛(ài)爾蘭大流行，近100 萬(wàn)人餓死，150 萬(wàn)人逃亡美洲。

北美地區(qū)肆虐的舞毒蛾屬于歐洲型舞毒蛾，這種害蟲(chóng)進(jìn)入北美地區(qū)源于一次實(shí)驗(yàn)室泄露。 1869年，Leopold Trouvelot 將舞毒蛾從歐洲帶入美國(guó)馬薩諸塞州東部地區(qū)，他試圖用舞毒蛾和蠶繁殖出更抗病的蠶，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)過(guò)程中，部分舞毒蛾逃逸。 十幾年后，舞毒蛾首先在Trouvelot 的居住地附近暴發(fā)并開(kāi)始擴(kuò)散。 此后，馬薩諸塞州政府和聯(lián)邦政府采取了多次行動(dòng)試圖除滅舞毒蛾，但未獲得成功。 目前該蟲(chóng)廣泛分布于美國(guó)東北部的全部地區(qū)及東南部和中西部的部分地區(qū)，并且擴(kuò)散到加拿大的魁北克省和安大略?。?0］。

3 生物安全相關(guān)的法律法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范

3.1 我國(guó)相關(guān)的法律法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范

主要包括《中華人民共和國(guó)進(jìn)出境動(dòng)植物檢疫法》、GB 19489-2008 《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》、GB 50346-2011 《生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范》、GB 27421-2015 《移動(dòng)式實(shí)驗(yàn)室 生物安全要求》、GB/T 23415-2009 《隔離檢疫圃分級(jí)》、GB/T 23629-2009《引進(jìn)植物病原生物安全控制技術(shù)要求》、SN/T 1619-2005《植物隔離檢疫圃分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)》、SN/T 3072-2011 《種苗隔離檢疫操作規(guī)程》、NY/T 1217-2006《境外引進(jìn)植物隔離檢疫規(guī)程》。

3.2 國(guó)際相關(guān)實(shí)驗(yàn)室生物安全的規(guī)范

主要包括ISO 15190：2003（E）《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-安全要求》、WHO 《實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)》（第三版，2004）、美國(guó)《微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全指南》（第四版，1999）、加拿大《實(shí)驗(yàn)室生物安全指南》（第三版，2001）。

3.3 生物安全實(shí)驗(yàn)室的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

WHO 根據(jù)感染性微生物的相對(duì)危害程度制訂了危險(xiǎn)度等級(jí)的劃分標(biāo)準(zhǔn) （1 級(jí)、2 級(jí)、3 級(jí)和4級(jí)）， 將不太可能引起人或動(dòng)物致病的微生物劃分為危險(xiǎn)度1 級(jí)，實(shí)驗(yàn)室則對(duì)應(yīng)于其中的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室（BSL-1 或BSL-2）。

以上這些法律法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范對(duì)植物檢疫實(shí)驗(yàn)室的生物安全要求總體上比較模糊，實(shí)驗(yàn)室生物安全分級(jí)主要考慮醫(yī)學(xué)或?qū)θ擞形：Φ奈⑸?，沒(méi)有明確針對(duì)植物檢疫實(shí)驗(yàn)室生物安全的定義和標(biāo)準(zhǔn)。 如果植物檢疫實(shí)驗(yàn)室參照這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，顯然有害生物危險(xiǎn)度和實(shí)驗(yàn)室生物安全等級(jí)并不能全部代表該類(lèi)實(shí)驗(yàn)室的控制水平。 植物檢疫實(shí)驗(yàn)室涉及的有害生物很少能引起人或動(dòng)物致病，其生物安全主要體現(xiàn)在生物入侵、生態(tài)失衡以及農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)等方面，其危害程度具有社會(huì)性和系統(tǒng)性的特點(diǎn)，并且危害表現(xiàn)的周期較長(zhǎng)，具有一定的隱蔽性。

另外，國(guó)內(nèi)尚未有針對(duì)植物檢疫實(shí)驗(yàn)室生物安全認(rèn)可的相關(guān)規(guī)范或指南文件。

4 關(guān)鍵控制點(diǎn)分析

本文所述關(guān)鍵控制點(diǎn)是指為保證植檢實(shí)驗(yàn)室生物安全，運(yùn)用風(fēng)險(xiǎn)分析和質(zhì)量控制等方面的原理和方法，在管理和檢測(cè)過(guò)程中采取的以預(yù)防為主的綜合措施。 主要有以下內(nèi)容：

4.1 樣品及有害生物

樣品及有害生物是實(shí)驗(yàn)室生物安全問(wèn)題的焦點(diǎn)。 植物檢疫主要涉及的有害生物包括昆蟲(chóng)、雜草、線(xiàn)蟲(chóng)、真菌、細(xì)菌、病毒、軟體動(dòng)物等類(lèi)別，不同類(lèi)別的有害生物其傳播擴(kuò)散的方式不同，生物安全風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)不同，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)分別進(jìn)行生物安全控制。 針對(duì)氣傳的植物病原真菌的檢疫，其分離、培養(yǎng)、保存及處理等操作都應(yīng)在相對(duì)封閉、防止擴(kuò)散的條件下進(jìn)行；對(duì)活動(dòng)性較強(qiáng)昆蟲(chóng)的檢疫，應(yīng)著重注意分離、飼養(yǎng)、鑒定、樣品保存等環(huán)節(jié)，防止逃逸；對(duì)主要通過(guò)流水進(jìn)行傳播擴(kuò)散的細(xì)菌和線(xiàn)蟲(chóng)，應(yīng)注意在分離培養(yǎng)、處置環(huán)節(jié)對(duì)水的無(wú)害化處理；對(duì)主要通過(guò)媒介進(jìn)行傳播擴(kuò)散的病毒， 應(yīng)保證環(huán)境的充分隔離，并防止昆蟲(chóng)滋生； 對(duì)主要通過(guò)人為攜帶傳播的雜草籽，應(yīng)對(duì)檢疫人員的操作進(jìn)行控制。

4.2 設(shè)施設(shè)備

建筑設(shè)計(jì)應(yīng)符合GB 50346-2011 《生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范》和GB 19489-2008《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》， 以確保人員健康和滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)室基本的生物安全要求；隔離檢疫溫室應(yīng)滿(mǎn)足相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求，應(yīng)防止生物因子的傳入、傳出和交叉污染，并有內(nèi)部除害處理和緊急處理設(shè)施； 在樣品分離、微生物培養(yǎng)、昆蟲(chóng)飼養(yǎng)、隔離種植、保存、關(guān)鍵檢測(cè)區(qū)域配置防止生物逃逸、防止交叉污染的設(shè)施，如防蟲(chóng)網(wǎng)、隔離設(shè)施、滅菌燈等，必要時(shí)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置空氣壓差； 配置捕蟲(chóng)網(wǎng)及速效廣譜性的殺蟲(chóng)劑、實(shí)驗(yàn)室周邊設(shè)置針對(duì)重點(diǎn)對(duì)象的誘捕設(shè)施等措施，可在發(fā)現(xiàn)生物存在逃逸和擴(kuò)散可能性時(shí)，及時(shí)采取撲殺和補(bǔ)救措施。

根據(jù)需要配置滿(mǎn)足生物安全要求的設(shè)備，如生物安全柜、無(wú)菌操作臺(tái)、滅菌器、焚燒爐、高溫干燥箱等，并達(dá)到相關(guān)參數(shù)的狀態(tài)要求。

4.3 人員

植物檢疫工作特殊性在于樣品的分離、 培養(yǎng)、處置、保存等工序需要很大程度取決于人員的經(jīng)驗(yàn)和判斷，人的主觀能動(dòng)性對(duì)植物檢疫實(shí)驗(yàn)室的生物安全起重要作用。 通過(guò)持續(xù)地對(duì)人員進(jìn)行生物安全教育和培訓(xùn)，進(jìn)行生物安全規(guī)范操作的引導(dǎo)，可有效地幫助人員提高對(duì)有害生物危害程度的認(rèn)知能力、主動(dòng)執(zhí)行生物安全操作的意識(shí)、應(yīng)對(duì)有害生物逃逸等突發(fā)事件的能力等。

4.4 檢測(cè)流程

實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)過(guò)程通常可分為樣品評(píng)審、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)鑒定、隔離檢疫、檢疫除害處理等過(guò)程，對(duì)每一過(guò)程應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)化的生物安全控制規(guī)定，并進(jìn)行有效監(jiān)督。

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目要求，設(shè)計(jì)檢測(cè)流程，以最大限度降低生物安全風(fēng)險(xiǎn)， 如對(duì)需要檢測(cè)昆蟲(chóng)和病害的種苗， 應(yīng)首先檢查種苗及栽培介質(zhì)等是否帶有活蟲(chóng)，然后再進(jìn)行針對(duì)病害及隱藏蟲(chóng)態(tài)的觀察、分離培養(yǎng)、隔離種植等工作，以降低昆蟲(chóng)逃逸的風(fēng)險(xiǎn)。

對(duì)于可能攜帶活體有害生物的檢測(cè)過(guò)程，應(yīng)注重防止擴(kuò)散和交叉污染的防護(hù)，不同的過(guò)程應(yīng)在相應(yīng)的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，如昆蟲(chóng)飼養(yǎng)應(yīng)在養(yǎng)蟲(chóng)室內(nèi)、隔離種植應(yīng)在隔離檢疫溫室或隔離圃?xún)?nèi)等。 對(duì)于驗(yàn)余樣品及廢棄物，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行有效處置，降低生物安全風(fēng)險(xiǎn)。

4.5 方法及操作規(guī)程

對(duì)具體有害生物的檢測(cè)方法，遵循相關(guān)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的，需建立文件化的檢測(cè)方法，并經(jīng)確認(rèn)有效和符合生物安全要求。

針對(duì)實(shí)驗(yàn)室具有生物安全風(fēng)險(xiǎn)的操作過(guò)程，如樣品評(píng)審、樣品的包裝和傳遞、樣品分離、微生物培養(yǎng)、昆蟲(chóng)飼養(yǎng)、隔離種植、無(wú)菌器皿管理、除害處理等，以及對(duì)重點(diǎn)控制設(shè)施設(shè)備的操作要求，如無(wú)菌室、隔離檢疫溫室等區(qū)域管理要求、滅菌鍋等設(shè)備操作方法等，應(yīng)建立文件化的操作規(guī)程，以防止不當(dāng)操作增加生物安全風(fēng)險(xiǎn)。

4.6 有害生物監(jiān)測(cè)

需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)室業(yè)務(wù)可能涉及的有害生物，以及實(shí)驗(yàn)室周邊環(huán)境進(jìn)行綜合確定監(jiān)測(cè)方法、密度和周期。 如進(jìn)行水果有害生物檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室，需要對(duì)檢疫性實(shí)蠅進(jìn)行監(jiān)測(cè)，若實(shí)驗(yàn)室周邊有相關(guān)的寄主果樹(shù)，則應(yīng)增加監(jiān)測(cè)密度；如進(jìn)行糧谷雜草檢疫的實(shí)驗(yàn)室， 需要制定相關(guān)檢疫性雜草的監(jiān)測(cè)方案，在雜草不同生長(zhǎng)期進(jìn)行系統(tǒng)性調(diào)查。

4.7 應(yīng)急處置

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)有害生物出現(xiàn)的擴(kuò)散或逃逸情況進(jìn)行應(yīng)急處置；如：對(duì)逃出養(yǎng)蟲(chóng)籠或進(jìn)入緩沖間的活體昆蟲(chóng)進(jìn)行撲殺；在監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)超出限值檢疫性有害生物時(shí)，采取一定范圍的撲滅措施。

5 討論和建議

5.1 明確植物檢疫實(shí)驗(yàn)室生物安全的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

由于缺乏對(duì)植物檢疫實(shí)驗(yàn)室的生物安全分級(jí)進(jìn)行評(píng)價(jià)的法律法規(guī)或者標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范，導(dǎo)致該類(lèi)實(shí)驗(yàn)室的生物安全管理處于模糊狀態(tài)，存在生物安全隱患。 有必要在國(guó)家生物安全法律法規(guī)和管理規(guī)范的總體框架下，對(duì)植物有害生物在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)過(guò)程中的擴(kuò)散可能性、控制難度等進(jìn)行綜合分析，結(jié)合有害生物檢疫重要性，明確有害生物（或其相關(guān)產(chǎn)品）危險(xiǎn)度和對(duì)應(yīng)實(shí)驗(yàn)室的分級(jí)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。

5.2 制定相關(guān)管理規(guī)范

梳理針對(duì)不同危險(xiǎn)度等級(jí)有害生物（或其相關(guān)產(chǎn)品）的實(shí)驗(yàn)室關(guān)鍵控制點(diǎn)，制定管理規(guī)定或認(rèn)可規(guī)范， 使植物檢疫實(shí)驗(yàn)室對(duì)生物安全的管理和控制更有針對(duì)性，形成統(tǒng)一的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，逐步在對(duì)該類(lèi)實(shí)驗(yàn)室的授權(quán)或認(rèn)可活動(dòng)中，增加生物安全相關(guān)要素。