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    連翹木脂素類成分的色譜學(xué)研究進展

    2020-01-05 06:48:18聶承冬李攀越江園園周文潔谷東皓閻新佳
    科學(xué)技術(shù)創(chuàng)新 2020年24期
    關(guān)鍵詞:木脂素連翹正己烷

    聶承冬 李攀越 江園園 周文潔 谷東皓 閻新佳 溫 靜*

    (1、哈爾濱商業(yè)大學(xué) 藥學(xué)院,黑龍江 哈爾濱150076 2、黑龍江省預(yù)防與治療老年病藥物研究重點實驗室,黑龍江 哈爾濱150076)

    連 翹(Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl) 為 木 犀 科(Oleaceae)連翹屬(Forsythia)植物,是臨床常用中藥,具有清熱解毒,消腫散結(jié)之功效,常用于風熱感冒、溫病初起、溫熱入營、熱淋尿閉、癰疽、瘰疬、乳癰、丹毒和腫毒等癥[1-3]。目前,從該植物中,已分離出的木脂素有46 種以上[4]。木脂素是連翹的特征性物質(zhì),具有抗炎、抗氧化、抗癌、抗病毒和抗過敏等作用。連翹中木脂素的分離檢測方法有薄層色譜法(TLC),高效液相色譜法(HPLC)等,本文對這些連翹的木脂素色譜學(xué)研究方法進行了總結(jié),為后人進一步研究連翹木脂素提供更好的科學(xué)依據(jù)。

    1 薄層色譜法(TLC)

    1.1 TLC 分離木脂素的方法

    在TLC 中,是在覆蓋有固定相薄層的板上進行分離的,其中流動相通過毛細管力沿板移動。通常,TLC 技術(shù)僅用于分離和檢測植物提取物中低或非揮發(fā)性成分。TLC 板由玻璃或氧化鋁制成,并覆蓋有固定相,例如硅膠,或與十八烷基,辛基,苯基,聯(lián)苯基,硝酰基或五苯基等聯(lián)用。TLC 可用于NP,RP,HILIC,OPTLC,HPTLC 色譜系統(tǒng)[7]。可以使用等度洗脫,逐步洗脫或梯度洗脫以及一維或二維分離模式進行分離。1D-TLC 使用常規(guī)的流動相進行分離,適用于分析具有極性相差較大的相對非復(fù)雜樣品。因此,可能不足以分離復(fù)雜的植物提取物或具有類似特性的化合物的混合物。對于此類應(yīng)用,使用正交系統(tǒng)的2D-TLC 分離技術(shù)是有利的,因為可以對每個維度應(yīng)用不同的色譜特性和保留機制。1D-TLC 的分離效率可通過逐步梯度洗脫來提高,在該梯度洗脫中,相繼應(yīng)用洗脫效率不斷提高的流動相,但都是僅在單個方向上進行分離。在分離中值得注意的是,在分離步驟之間更改流動相以除去殘留的吸附溶劑之前,都必須先干燥2D 和1DTLC 板[5]。盡管TLC 最近被用于各種植物中分離木脂素化合物,但目前從連翹中分離木脂素的專用的TLC 方法還有待進一步研究。

    1.2 TLC 檢測木脂素的方法

    TLC 檢測木脂素的方法以木脂素Schizandrin A,Schizandrin B 為例。張敏等人對Schizandrin A,Schizandrin B 等成分進行了薄層色譜鑒別[6]。實驗種分別用了四種展開劑:正己烷- 乙酸乙醋(10:1)、環(huán)己烷- 乙酸乙醋(10:1.5)、正己烷- 乙酸乙醋(7.5:2.5)、正己烷- 乙酸乙醋(8.5:1.5),比較結(jié)果顯示 采用正己烷-乙酸乙醋(10:1)為展開劑效果較為滿意。在檢測分離相關(guān)木脂素時可以已此為參考。還可以通過使用HPTLC 或OPTLC 方法來改善TLC 的選擇性,這可以縮短分離時間,并可以改善峰形,使分離出的化合物分離度更好[7]。

    1.3 TLC 指紋鑒別木脂素

    指紋分析是經(jīng)過WHO 批準的工具,可用于質(zhì)量評估和標準化用于天然藥物和中草藥制劑生產(chǎn)的植物材料。色譜指紋圖譜用于比較同一物種不同品種,植物生長不同階段的植物材料,或評估在不同地理或大氣條件等條件下生長的影響。TLC 指紋法可用于確定:樣品之間的相似性和差異,樣品完整性或存在特征成分(選定標記)。它經(jīng)常與先進的統(tǒng)計方法和化學(xué)計量學(xué)分析方法相結(jié)合。

    2 高效液相色譜法(HPLC)

    2.1 HPLC 分離木脂素

    HPLC 裝置可以與根據(jù)分離的化合物的不同物理化學(xué)性質(zhì)操作的各種檢測器聯(lián)合使用,如UV-VIS 檢測器等。但是,由于木脂素可能與提取物其他成分的光譜重疊,所以部分檢測器可能受限制。所以基于MS 的檢測方法效果更好些。MS 光譜分析能夠?qū)δ局鼗衔镞M行初步檢測,結(jié)構(gòu)分析和鑒定。用于分離連翹提取物的現(xiàn)代分析方法如LC-MS 系統(tǒng)等,可用于進行提取物的分析和鑒定。LC-MS 技術(shù)常用于木脂素的檢測和表征,例如通過多種離子化技術(shù)(EI,CI,F(xiàn)AB-MS 和ESI-MS / MS 等)獲得的其碎片離子以及其特征結(jié)構(gòu),來證明其存在木脂素。

    2.2 HPLC 中木脂素檢測和鑒別的方法

    HPLC 法分離木脂素,以梁軍等人,使用HPLC-FLD 分離為例[8]。HPLC-FLD 色譜柱為 采用色譜柱Dima C18(4.6mm×250mm,5μm),流動相甲醇(A)- 水(B)梯度洗脫系統(tǒng),流速1.0mL/min。木脂素類成分熒光檢測激發(fā)波長為270nm,發(fā)射波長為340nm;咖啡酸苯乙醇苷類成分激發(fā)波長為320nm,發(fā)射波長為460nm。還有NP-HILIC 與RP-HPLC 等多種聯(lián)用方法來分離木脂素。在檢測分離相關(guān)木脂素時可以已此為參考。

    3 結(jié)論

    連翹的富含木脂素的提取物是非常復(fù)雜的化合物混合物。由于木脂素的結(jié)構(gòu)相似性和極性不同,使得通過LC 法進行分離成為一項艱巨的任務(wù)。此外,由于提取分離時,提取物中存在的其他化合物也表現(xiàn)出相似的極性,對木脂素化合物的分離,鑒定和測定產(chǎn)生了一定干擾。TLC 是一種用于初始選擇時,選擇分離條件,控制檢測萃取、浸出效率,以及初步評估第一步分離后各餾分化學(xué)成分定性定量的方法。研究應(yīng)用二維或多階段TLC 程序,在木脂素研究中是十分有利的,最終可以通過單次分離步驟就能分離開木脂素化合物和其他化合物。目前,在木脂素分析方向的最佳方法是HPLC 或UPLC 等相關(guān)方法,因為這種方法具有更高的效率和分辨率。由于木脂素化合物的特征和復(fù)雜的核心結(jié)構(gòu),建議結(jié)合使用基于碎片離子性質(zhì)的鑒定方法(MS 等)和立體構(gòu)型測定方法(如CD 譜測定,IM-MS 測定)相結(jié)合來精確測定這些化合物。目前,還需要進一步的實驗研究來確定連翹中其他含有木脂素的部位(如根、根莖等部分)的最佳分離條件。在開發(fā)提取分離木脂素新方法中,環(huán)境污染,提取效率低,有機試劑殘留等問題需重點考慮,如何有效的進行工業(yè)制備規(guī)模的純木脂素化合物的分離也需進一步研究開發(fā)。

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