表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯預(yù)防和治療口腔癌的研究進(jìn)展

劉恩言， 賀兵， 李明云

口腔疾病研究國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 國家口腔疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心 四川大學(xué)華西口腔醫(yī)學(xué)院，四川 成都（610041）

口腔癌是最常見的頭頸部惡性腫瘤，發(fā)病率較高且患者預(yù)后差［1-2］?？谇话┦且环N多因素疾病［3-4］，其傳統(tǒng)治療方式以手術(shù)為主，輔以化療［5］，因此在天然藥物中篩選研發(fā)高效、低毒的抗口腔癌藥物是當(dāng)前研究熱點(diǎn)之一。表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate，EGCG）是茶多酚中最重要的活性成分，具有多種益于人體健康的作用，正是極少數(shù)能滿足口腔癌化學(xué)防治劑要求的活性物質(zhì)。

1 EGCG 對(duì)口腔癌細(xì)胞的作用機(jī)制

EGCG 是存在于綠茶中的一種多酚類化合物，具有多種抗炎［6］、抗氧化［7］和骨調(diào)節(jié)特性［8］。近年來，大量關(guān)于抗腫瘤治療的研究表明EGCG 可單獨(dú)或與標(biāo)準(zhǔn)療法聯(lián)合作為口腔癌的治療藥物，可以增強(qiáng)療效，并且可減少腫瘤患者治療的副作用［9］。目前已證實(shí)EGCG 可對(duì)口腔癌細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)的影響可以是直接的，也可以是間接的，其作用于口腔癌細(xì)胞信號(hào)網(wǎng)絡(luò)的多條信號(hào)傳導(dǎo)通路，從而減少癌細(xì)胞的侵襲和遷移，改變癌細(xì)胞的細(xì)胞周期，誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡與自噬，抑制癌細(xì)胞增殖，以及發(fā)揮體內(nèi)抗腫瘤作用。

1.1 EGCG 作用于口腔癌細(xì)胞信號(hào)通路

有大量研究證實(shí)EGCG 可用于口腔癌細(xì)胞信號(hào)網(wǎng)絡(luò)的多條信號(hào)傳導(dǎo)通路，包括：代謝途徑、細(xì)胞周期/有絲分裂、軸突引導(dǎo)、絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號(hào)通路、細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、神經(jīng)生長因子信號(hào)通路、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白加工、G 蛋白偶聯(lián)受體信號(hào)通路、Wnt 信號(hào)通路等主要信號(hào)通路［10］。具體作用位點(diǎn)包括：下調(diào)Hippo-TAZ［11］、AKT/STAT3 信號(hào)通路［12］的表達(dá)，抑制癌細(xì)胞的增殖，減少癌細(xì)胞的侵襲和遷移。

1.2 EGCG 與口腔癌細(xì)胞DNA 甲基化

有研究顯示，在EGCG 治療口腔鱗狀細(xì)胞癌（oral squamous cell cancer，OSCC）細(xì)胞后癌細(xì)胞發(fā)生改變的84 個(gè)基因中，57 個(gè)高甲基化，24 個(gè)低甲基化。高甲基化基因的生物學(xué)功能包括轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞周期、轉(zhuǎn)導(dǎo)、氧化過程和凋亡，而低甲基化基因位點(diǎn)豐富，涉及細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)導(dǎo)、氧化過程和細(xì)胞黏附，從而誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡與自噬［10］。

1.3 EGCG 作用于口腔癌細(xì)胞RNA 基因

研究者發(fā)現(xiàn)EGCG 可上調(diào)與下調(diào)口腔癌細(xì)胞RNA 基因，如miR204 基因的差異性表達(dá)［13］。差異表達(dá)基因參與細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)運(yùn)、轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移酶活性、細(xì)胞黏附、氧化過程和細(xì)胞周期等生物學(xué)功能，同樣可以減少癌細(xì)胞的侵襲和遷移、改變癌細(xì)胞的細(xì)胞周期、誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡與自噬、抑制癌細(xì)胞增殖。

2 EGCG 對(duì)口腔癌的預(yù)防

口腔癌多由口腔癌前病變或癌前狀態(tài)發(fā)展而來，對(duì)口腔癌前病變和癌前狀態(tài)的早期診斷治療，對(duì)口腔癌的預(yù)防有積極作用［14］。口腔黏膜下纖維化（oral submucosal fibrosis，OSF）是一種癌前狀態(tài)，主要見于南亞和東南亞國家［15］。早期診斷OSF 惡變并及時(shí)治療，對(duì)預(yù)防OSCC 有積極作用。

研究表明EGCG 可以通過抑制OSF 疾病進(jìn)展，阻止OSF 惡變，從而預(yù)防口腔癌的發(fā)生。Hsieh 等［16］將EGCG 作用于人頰黏膜成纖維細(xì)胞（buccal mucosa fibroblasts，BMFs），結(jié)果顯示EGCG可以通過抑制檳榔堿誘導(dǎo)的BMFs 中轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor β1，TGFβ1）活化，有效阻止檳榔堿引起的OSF 的發(fā)生。另兩項(xiàng)研究中［17-18］，他們發(fā)現(xiàn)EGCG 可通過降低TGFβ1 誘導(dǎo)的BMFs 中早期生長反應(yīng)蛋白-1（early growth response-1，Egr-1）的活化，阻斷了TGFβ1 產(chǎn)生膠原的能力，得出EGCG 可能成為一種新的預(yù)防或治療OSF 藥物的結(jié)論。Chang 等［19］的研究結(jié)果證實(shí)EGCG 也可以通過抑制血栓素誘導(dǎo)的TGFβ1 活化，阻止OSF 發(fā)生。Lee 等［20］的研究發(fā)現(xiàn)抗氧化劑EGCG 能抑制檳榔堿上調(diào)的谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶-2（transglutaminase-2，TGM-2）表達(dá)，可作為控制OSF的有效藥物。

綜上所述，目前OSF 的致病機(jī)制仍不明確，但大量文獻(xiàn)證據(jù)表明TGFβ 與OSF 的發(fā)展有關(guān)。EGCG 可以通過多種方式抑制TGFβ1 活化，從而阻止OSF 的發(fā)生。雖然目前相關(guān)臨床研究較少，但這些基礎(chǔ)試驗(yàn)結(jié)果為使用EGCG 單一防治口腔癌或結(jié)合靶向藥物（如表皮生長因子受體抑制劑、納米顆粒靶向給藥體系）進(jìn)行長期臨床試驗(yàn)提供了強(qiáng)有力的理論依據(jù)。

3 EGCG 在口腔癌治療中的作用

目前口腔癌治療仍遵循綜合治療（comprehensive therapy）方式，是根據(jù)現(xiàn)有治療手段的作用機(jī)制及特點(diǎn)，結(jié)合腫瘤及宿主情況而制定的多手段執(zhí)行方案，目前以化療-手術(shù)-放療有序綜合方案最成熟［21］?，F(xiàn)已有大量研究證明EGCG 有希望可以作為口腔癌靶向治療的小分子藥物或與其它傳統(tǒng)化療藥物聯(lián)用以達(dá)到控制口腔腫瘤發(fā)展，減少不良反應(yīng)與耐藥性的目的，增強(qiáng)口腔癌的治療效果。

3.1 EGCG 單獨(dú)作為化療藥物

多數(shù)研究證明EGCG 對(duì)來自不同細(xì)胞系的口腔癌細(xì)胞有抑制其增殖分化和細(xì)胞凋亡，阻止口腔癌細(xì)胞遷移的作用。Yoshimura 等［22］通過體外實(shí)驗(yàn)和小鼠體內(nèi)異種移植實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)EGCG 通過影響口腔鱗癌細(xì)胞系HSC-3 細(xì)胞的細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡，在體內(nèi)外均能顯著抑制細(xì)胞增殖。然而，Pons-Fuster López 等［23］在探究EGCG 作為口腔癌化療藥物的潛在作用中得到的研究結(jié)果顯示EGCG 并未降低口腔鱗癌細(xì)胞系PE/CA-PJ15 細(xì)胞的活力，也沒有促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡。但研究發(fā)現(xiàn)EGCG 能夠減少口腔癌細(xì)胞遷移，劑量依賴性地改變細(xì)胞周期，阻滯細(xì)胞周期使癌細(xì)胞停留在G0/G1 期，故EGCG對(duì)口腔癌細(xì)胞仍具有潛在的化療作用。

綜上所述，有關(guān)EGCG 抗口腔癌機(jī)制的研究中，除EGCG 抗癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和影響癌細(xì)胞周期已被證明外，其它機(jī)制仍然存在較大爭(zhēng)議，但所有相關(guān)研究均認(rèn)為EGCG 具有單獨(dú)作為口腔癌化療藥物的潛力。

3.2 EGCG 聯(lián)合5-氟尿嘧啶（5-FU）輔助放療

5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）是一種通過抑制胸腺苷酸合成酶活性發(fā)揮作用的抗代謝化療藥物，它已廣泛用于單獨(dú)或與其他藥物和/或放療聯(lián)合治療頭頸部、結(jié)直腸和其他類型的癌癥［24］。Pons-Fuster López 等［23］的體外研究發(fā)現(xiàn)，EGCG 和5-FU 的聯(lián)合使用降低了口腔鱗癌PE/CA-PJ15 和H357 細(xì)胞系的癌細(xì)胞活力同時(shí)阻止了癌細(xì)胞的遷移，并在很大程度上改變了癌細(xì)胞的細(xì)胞周期。在傳統(tǒng)治療后，口腔癌有較高幾率再次復(fù)發(fā)主要是源于出現(xiàn)了化療耐藥的癌癥干細(xì)胞（cancer stem cells，CSCs）。目前的化療藥物如順鉑、5-FU 等，已經(jīng)在臨床上用于治療OSCC，若臨床上EGCG 參與上述藥物的輔助治療，不僅可以增強(qiáng)化療藥物的效果，還可以減少因長期放化療而出現(xiàn)的口干、味覺異常、腹瀉、貧血［25］等不良反應(yīng)，有利于提高口腔癌患者的生存質(zhì)量。

3.3 EGCG 聯(lián)合伐地那非

研究表明了EGCG 聯(lián)合伐地那非可以抑制口腔鱗癌細(xì)胞系CAL-27、SCC-25 以及KB 細(xì)胞的增殖，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明EGCG 聯(lián)合伐地那非能夠降低癌移植瘤模型的體積和質(zhì)量。伐地那非是一種高效的、高選擇性的口服磷酸二酯酶Ⅴ型抑制劑，臨床上主要用于治療有勃起功能障礙的患者，并不是治療口腔癌的常規(guī)藥物，但目前已有有研究表明伐地那非及其同系物能夠成功逆轉(zhuǎn)癌細(xì)胞對(duì)多種抗癌藥物的耐藥性［26］。因此，盡管該研究證明EGCG 聯(lián)合伐地那非對(duì)癌細(xì)胞多重耐藥有逆轉(zhuǎn)作用，具有相當(dāng)?shù)目拱摿?，但此?lián)合用藥方案對(duì)口腔癌的臨床治療作用需要進(jìn)一步探索。

4 展 望

目前，在口腔癌前狀態(tài)防治方面的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)較多，證據(jù)充足，但臨床試驗(yàn)研究較少。曾有試驗(yàn)探究EGCG 噴霧劑、漱口水、混合軟膏、茶提取物膠囊等藥物劑型治療口腔白斑患者后的臨床效果，結(jié)果表明EGCG 相比于對(duì)照組有臨床意義，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。盡管如此，筆者認(rèn)為不應(yīng)該忽視EGCG藥物用于防治口腔癌的巨大潛力。未來，通過EGCG 治療口腔癌前狀態(tài)，如OSF 等相關(guān)的臨床研究需要科研人員做更多的實(shí)踐與探索。

迄今為止，EGCG 防治口腔癌的臨床資料較少，未見EGCG 治療臨床上口腔癌患者的嘗試。這是由于EGCG 也有一些缺點(diǎn)正在限制其臨床轉(zhuǎn)化，包括生物利用度差、代謝快、膜通透性差等缺陷。因此，為這些有益的治療藥品開發(fā)一種有效的傳遞方法將成為EGCG 轉(zhuǎn)化為臨床治療口腔癌新方式的一個(gè)里程碑。理想的口腔癌化學(xué)防治藥物應(yīng)具備以下特點(diǎn)：①無毒或毒性反應(yīng)?。虎诏熜э@著；③給藥途徑盡量為口服等非創(chuàng)傷性途徑；④副作用小；⑤作用機(jī)制明確；⑥價(jià)格低，易于民眾接受。隨著大量針對(duì)EGCG 對(duì)于口腔癌藥用實(shí)驗(yàn)研究的開展，已經(jīng)證明了EGCG 的抗腫瘤活性，未來EGCG 可能會(huì)應(yīng)用于小分子藥物，成為靶向治療口腔癌的理想選擇。