食源性免疫活性肽的篩選策略及作用機(jī)制研究進(jìn)展

文 李 NIYOKWIZERA Isaac 劉步青 許 宙 陳茂龍 程云輝

(長沙理工大學(xué)化學(xué)與食品工程學(xué)院，湖南 長沙 410114)

免疫活性肽(Immunopeptides)能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬功能、刺激淋巴細(xì)胞增殖并增強(qiáng)機(jī)體免疫力，以及提高機(jī)體抵御外界病原體感染的能力，部分免疫活性肽甚至參與機(jī)體的抗腫瘤作用[1-2]。

食源性蛋白質(zhì)來源廣泛，食用安全性高。許多免疫活性肽本身以非活性狀態(tài)存在于食源性蛋白質(zhì)中，其活性在被消化或水解后才能釋放出來。從食源性蛋白質(zhì)的酶水解產(chǎn)物中所制備的免疫活性肽，能以完整肽的形式被腸道吸收或在腸道與受體結(jié)合發(fā)揮作用，目前能最有效獲得食源性免疫活性肽的水解酶主要有胰酶、堿性蛋白酶和胃蛋白酶等。近20年來，對食源性免疫活性肽研究的報道逐年增多，如牛奶、雞蛋、魚類、貝類和蛙類等動物來源的免疫活性肽，以及大豆、燕麥、小麥和大麥等植物來源的免疫活性肽等[3]。

鑒于天然免疫活性肽在生物體內(nèi)含量較少，且分離提純成本高，對現(xiàn)有的食品加工副產(chǎn)物中蛋白質(zhì)進(jìn)行蛋白酶水解，并分離提純免疫活性肽不失為一條成本相對較低的途徑。試驗(yàn)團(tuán)隊(duì)曾對免疫活性肽的分類與常規(guī)分離技術(shù)[4]，以及活性肽與MHC分子結(jié)合能力的免疫信息學(xué)進(jìn)行了綜述[5]。文章擬在此基礎(chǔ)上，對食源性免疫活性肽的分離策略及作用機(jī)制進(jìn)行綜述，旨在為將來的研究提供新思路。

1 免疫與免疫活性肽

免疫系統(tǒng)分為先天免疫(天然免疫)和適應(yīng)性免疫(獲得性免疫)。先天免疫是非特異性的，主要通過機(jī)體的天然屏障(如皮膚和黏膜)、生理學(xué)防御(低pH、溫度和化學(xué)介質(zhì))、細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞、多形核白細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞)和自然殺傷(NK)細(xì)胞)或炎癥因子(如細(xì)胞因子、干擾素、補(bǔ)體、防御素、白三烯、急性期蛋白質(zhì)和前列腺素)提供第一道防御。適應(yīng)性免疫對潛在危險的外來抗原具有高度特異性，可分為細(xì)胞免疫和抗體介導(dǎo)的體液免疫，而T淋巴細(xì)胞(T 細(xì)胞)和B淋巴細(xì)胞(B 細(xì)胞)是適應(yīng)性免疫中最重要的細(xì)胞。體液免疫中B淋巴細(xì)胞可在與特異性抗原相互作用時產(chǎn)生抗體，抗體可與入侵的抗原結(jié)合并標(biāo)記以供巨噬細(xì)胞破壞。細(xì)胞免疫由T淋巴細(xì)胞組成，T淋巴細(xì)胞可分泌免疫調(diào)節(jié)因子并介導(dǎo)與抗原呈遞細(xì)胞(APC)相互作用的細(xì)胞免疫應(yīng)答。T淋巴細(xì)胞分為3個亞組，即細(xì)胞毒性T細(xì)胞(Tc細(xì)胞)、輔助T細(xì)胞(Th細(xì)胞)和調(diào)節(jié)T細(xì)胞(Treg細(xì)胞)。Tc細(xì)胞表面受體CD8+可識別內(nèi)源性抗原與主要組織相容性復(fù)合體(MHC I)結(jié)合的復(fù)合物，并殺死癌癥細(xì)胞和感染病毒的細(xì)胞；而Th細(xì)胞表面標(biāo)記物CD4+可識別與MHC II結(jié)合的外源性抗原復(fù)合物，Th細(xì)胞可分泌細(xì)胞因子，如干擾素-γ(IFN-γ)、白細(xì)胞介素(Interleukin，IL)-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13和IL-25，并幫助激活B細(xì)胞、T細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞)參與免疫反應(yīng)。Treg細(xì)胞負(fù)責(zé)抑制其他T細(xì)胞的免疫反應(yīng)，通過保持自我耐受來預(yù)防自身免疫疾病[6]。

免疫活性肽指能調(diào)節(jié)免疫活性，參與免疫細(xì)胞信號傳遞物質(zhì)的短肽。當(dāng)外源免疫活性肽進(jìn)入抗原呈遞細(xì)胞(APC)后，可與MHC II 結(jié)合[7]。MHC II可結(jié)合由10～18個氨基酸組成的短肽，所形成的復(fù)合物可被抗原的T細(xì)胞受體(TCR)識別，并呈遞給CD4+T細(xì)胞，最終促使CD4+T細(xì)胞參與免疫應(yīng)答反應(yīng)，如刺激淋巴細(xì)胞增殖、分化、成熟，分泌細(xì)胞因子及增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬功能等[8]。

2 食源性免疫活性肽及其篩選手段

2.1 常規(guī)分離策略

目前，有關(guān)食源性活性肽的免疫調(diào)控研究大多是利用蛋白質(zhì)酶的水解產(chǎn)物組分，即肽的混合物，僅少數(shù)研究報道了精確的氨基酸序列。傳統(tǒng)的分離方法通常是以酶解產(chǎn)物的某種特定活性功能為考察指標(biāo)(大多為體外)，基于蛋白酶解物的疏水性、帶電性、分子量等性質(zhì)的差異[9-10]，結(jié)合膜分離、多種常壓色譜、高壓色譜以及離子交換色譜等分離技術(shù)[11-12]，從酶解物中分離肽組分進(jìn)行體內(nèi)或體外免疫試驗(yàn)，結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù)獲得食源性免疫活性肽[13]。Xu等[14]從大米加工副產(chǎn)物中提取蛋白質(zhì)，經(jīng)胰酶水解、大孔樹脂、液相色譜等技術(shù)分離出不同的酶解組分，并以小鼠巨噬細(xì)胞增殖指數(shù)為考察指標(biāo)，從大米蛋白酶解物中篩選出免疫活性最強(qiáng)的胰酶水解產(chǎn)物，并證明了部分大米蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物具有免疫活性。

2.2 基于計算科學(xué)預(yù)測的篩選策略

近年來，隨著免疫基因組學(xué)和生物信息學(xué)的不斷發(fā)展，免疫信息學(xué)也得到了長足發(fā)展。質(zhì)譜鑒定、核磁共振、結(jié)構(gòu)生物學(xué)及免疫信息學(xué)等研究技術(shù)的發(fā)展，為免疫活性肽篩選方法的不斷更新提供了可能。已知免疫細(xì)胞T細(xì)胞激活及發(fā)揮免疫作用的先決條件是MHC II和對應(yīng)抗原肽之間緊密結(jié)合而形成的復(fù)合體，MHC II類分子頂部皆存在一個狹長裂縫，可以結(jié)合含有特定氨基酸基序組成的短肽；MHC II分子與外源肽識別的基序?qū)Ｒ恍詻Q定其可識別一類帶有特定共同基序的肽段，使得MHC II分子與外源抗原肽的結(jié)合具有一定的包容性[15]。而MHC II分子結(jié)合肽和T細(xì)胞表位預(yù)測等免疫信息學(xué)相關(guān)的數(shù)據(jù)庫收集了大量與免疫相關(guān)的分子信息，可實(shí)現(xiàn)免費(fèi)在線的數(shù)據(jù)查詢、分析和計算等[16]。研究者可根據(jù)免疫活性肽氨基酸序列信息、MHC II結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和MHC-多肽復(fù)合體三維構(gòu)象指導(dǎo)免疫活性肽的篩選乃至設(shè)計。

目前已有的網(wǎng)上服務(wù)器可解決肽段的理化性質(zhì)、三維結(jié)構(gòu)及與MHC II 分子結(jié)合的可能性，并預(yù)測肽段與MHC II分子結(jié)合后，復(fù)合體的三維結(jié)構(gòu)模擬和自由能計算。主要有：

(1) 數(shù)據(jù)庫SYFPEITHI (http://www.syfpeithi.de/0-Home.htm)，裝載有MHC II分子配體及多肽基序，包含人類和猿、牛、雞、鼠等動物的MHC II類配體和表位，有助于實(shí)現(xiàn)針對性地篩選免疫活性肽[17]。

(2) NetMHCIIpan3.2服務(wù)器(http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHCIIpan/)，可用來預(yù)測人和鼠免疫活性肽與MHC II分子結(jié)合的可能性和強(qiáng)度[18]。

(3) Innovagen Pepcalc.com服務(wù)器(https://pepcalc.com/)，可預(yù)測肽段的等電點(diǎn)、凈電荷、親水性分布以及水溶性。

(4) TOXINPRED服務(wù)器(http://crdd.osdd.net/raghava/toxinpred/)，可用于預(yù)測肽的毒性。

(5) 通過PepFold 3.0服務(wù)器(http://bioserv.rpbs.univ-paris-diderot.fr/services/PEP-FOLD3/)可對肽的三維(3D)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測[19]。

(6) PepFold 3.0所獲得的數(shù)據(jù)可繼續(xù)采用最佳模型3D Refine服務(wù)器(http://sysbio.rnet.missouri.edu/3Drefine/)進(jìn)行氫鍵結(jié)合的優(yōu)化和原子能量的最小化[20]。

(7) 通過RAMPAGE服務(wù)器(http://mordred.bioc.cam.ac.uk/～rapper/rampage.php)可獲得肽段的Ramachandran圖并評價肽結(jié)構(gòu)的質(zhì)量。

(8) CLUSPRO 2.0服務(wù)器(https://cluspro.bu.edu/login.php)可用于模擬組裝肽和MHC II之間的復(fù)合體，并獲得復(fù)合體的3D模型；然后采用MMGBSA法模擬計算復(fù)合物的結(jié)合自由能ΔGmmgbsa值[21]。

多年來，各物種基因組和蛋白質(zhì)組學(xué)研究已積累了大量的蛋白質(zhì)氨基酸序列數(shù)據(jù)，而各種質(zhì)譜技術(shù)及生物信息學(xué)的發(fā)展，為獲得食物蛋白酶解產(chǎn)物的氨基酸序列并進(jìn)行信息學(xué)分析打下了基礎(chǔ)。此外，Dhanda等[22]開發(fā)了一種基于代表性或共識產(chǎn)生表位簇序列的新算法Cluster2.0(http://tools.iedb.org/cluster2/)，用來預(yù)測免疫活性肽與MHC II分子結(jié)合的表位，可用來分析所有免疫活性肽的共同基序，尋找免疫活性肽的序列規(guī)律，從而指導(dǎo)免疫活性肽的功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。利用現(xiàn)有的蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫和免疫信息學(xué)數(shù)據(jù)庫，結(jié)合細(xì)胞免疫功能的試驗(yàn)驗(yàn)證，或許能分析出食源性免疫活性肽的氨基酸組成和序列規(guī)律。

3 食源性免疫活性肽的作用機(jī)制

3.1 食源性免疫活性肽對先天性免疫的影響

體外和體內(nèi)試驗(yàn)[23]發(fā)現(xiàn)，食源性免疫活性肽可影響局部腸道免疫效應(yīng)及系統(tǒng)免疫效應(yīng)，可通過影響腸道的上皮細(xì)胞排列，并由此誘導(dǎo)腸腔上皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞間的交流。腸腔上皮細(xì)胞所形成的第一道防御層，可防御有害病原體及分子，且這些細(xì)胞被一層黏液覆蓋，形成內(nèi)腔含量與人體之間的物理屏障。研究[24]發(fā)現(xiàn)，腸腔中的免疫活性肽能增強(qiáng)上皮細(xì)胞的屏障作用，并增強(qiáng)黏液分泌及清除病原體所需的抗微生物蛋白的產(chǎn)生。如健康小鼠食用蛋黃肽能增加離體上皮細(xì)胞中IL-6的產(chǎn)生，而IL-6在先天性免疫反應(yīng)和適應(yīng)性免疫反應(yīng)中均起作用，說明免疫活性肽可能以此方式通過上皮細(xì)胞來影響免疫系統(tǒng)。

另外，淋巴集結(jié)(PP)是遍布小腸回腸區(qū)域的少量淋巴組織，也被稱為聚集的淋巴結(jié)節(jié)，主要作用為監(jiān)測腸道細(xì)菌種群并防止腸道中的病原細(xì)菌的生長，是免疫系統(tǒng)的重要組成部分。Egusa等[25]研究了大豆蛋白水解肽在PP中的作用，并對喂食富含大豆蛋白水解復(fù)合物5周后的小鼠，進(jìn)行PP衍生細(xì)胞的全基因組表達(dá)分析，發(fā)現(xiàn)與先天免疫和宿主防御有關(guān)的幾個基因被上調(diào)，其中Igh-4和Aqp8的上調(diào)會增強(qiáng)吞噬作用，而Dmbt1、Slpi和Mx1則與抗菌和抗病毒成分相關(guān)。

3.2 食源性免疫活性肽對適應(yīng)性免疫的影響

食源性免疫活性肽并不直接與病原體相互作用，而是通過與提呈細(xì)胞內(nèi)的MHC II分子結(jié)合后參與免疫調(diào)節(jié)作用，提高宿主防御病原體的能力[26]?？乖蔬f過程主要發(fā)生在腸系膜淋巴結(jié)(MLN)中。來自腸道PP及固有層的負(fù)載抗原的樹突狀細(xì)胞遷移至MLN后，激活T細(xì)胞和B細(xì)胞，根據(jù)不同抗原的性質(zhì)引起免疫應(yīng)答或通過Treg的形成誘導(dǎo)免疫耐受[27]。

食源性免疫活性肽不僅會影響局部的腸道免疫組織，也會影響全身其他的免疫組織，如脾臟、腹膜細(xì)胞以及血液等。小肽可穿過腸道屏障，進(jìn)入血液，直接影響全身的免疫細(xì)胞。分別用酪蛋白與乳制品、牡蠣、鮭魚等制成的蛋白質(zhì)水解物可增加小鼠巨噬細(xì)胞的離體吞噬能力，增強(qiáng)脾臟中NK細(xì)胞活性及離體脾細(xì)胞增殖能力等。研究發(fā)現(xiàn)，鯉魚卵堿性蛋白酶水解肽可增加小鼠脾臟中的CD4+和CD8+細(xì)胞數(shù)量[28]，而鮭魚卵的水解產(chǎn)物可增加CD4+細(xì)胞數(shù)量[29]。同時，在血液中都檢測到Th1(含有IL-2和IFN-γ)和Th2(含有IL-4和-5)細(xì)胞因子，說明食源性免疫活性肽參與調(diào)控免疫細(xì)胞Th1和Th2的分化[29]。食源性免疫活性肽可影響B(tài)細(xì)胞反應(yīng)的另一個重要證據(jù)是血液中抗體水平的升高，研究[28]發(fā)現(xiàn)食源性免疫活性肽不僅可能影響B(tài)細(xì)胞分化，還可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞的類別轉(zhuǎn)換及抗體的產(chǎn)生。

目前，僅有很少的研究調(diào)查了食源性蛋白水解肽對人類血液中免疫參數(shù)的影響，Yimit等[30]發(fā)現(xiàn)單劑量大豆水解肽可改變白細(xì)胞數(shù)量，并導(dǎo)致粒細(xì)胞增加及血液中的CD11b+(巨噬細(xì)胞和/或樹突狀細(xì)胞)和CD56+細(xì)胞數(shù)目顯著升高(NK細(xì)胞)。在服食小麥麥麩蛋白水解肽6 d后，可觀察到體內(nèi)NK細(xì)胞活性的增加[31]。這些研究僅檢測了少數(shù)免疫學(xué)參數(shù)，且受試樣本較少，因此食源性免疫活性肽對人體的作用機(jī)理尚需進(jìn)一步的研究。

3.3 食源性免疫活性肽參與免疫調(diào)節(jié)作用的分子機(jī)制

雖然關(guān)于食源性活性肽被免疫細(xì)胞攝取并參與免疫調(diào)控作用的分子機(jī)理方面的研究較少，但現(xiàn)有的研究結(jié)果大體可歸納為3個方面[32]：

(1) 食源性免疫活性肽直接激活細(xì)胞受體(如Toll樣受體，Toll-like receptor，TLR2、3、4、5、6、7、8、9，以及阿片肽受體等)，并刺激如腫瘤壞死因子TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10等細(xì)胞因子的產(chǎn)生，誘導(dǎo)T細(xì)胞分化，促進(jìn)B細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白(Ig)，并影響巨噬細(xì)胞的吞噬作用。

(2) 大豆和乳清的多種具有生物活性的三肽和四肽在進(jìn)入細(xì)胞后，可通過依賴寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(PepT1)行使細(xì)胞內(nèi)抗炎作用。PepT1是一種H+偶聯(lián)的寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，介導(dǎo)腸道上皮細(xì)胞吸收多種二肽和三肽，并將肽轉(zhuǎn)運(yùn)到血液中。如果抑制PepT1活性，該作用消失，表明通過PepT1轉(zhuǎn)運(yùn)對于抗炎作用是必需的。細(xì)胞攝取外源寡肽后，這些二肽或三肽通過PepT1的轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入胞質(zhì)溶膠，抑制主要的炎癥信號通路，減少促炎細(xì)胞因子(如IL-6、IL-8和TNF-α)的分泌，并降低NF-κB誘導(dǎo)的B細(xì)胞、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)等的活化。

(3) 分子量大于三肽的食源性免疫活性肽可通過胞吞作用被細(xì)胞吸收。胞吞作用的吸收是通過肽和細(xì)胞膜之間的疏水相互作用協(xié)助完成的。研究[33]發(fā)現(xiàn)，免疫細(xì)胞通過胞吞作用吸收大豆肽lunasin，并在炎癥條件下增加lunasin的攝取量，說明該肽參與抗炎反應(yīng)。Lunasin是一種43個氨基酸的肽，可與αVβ3整聯(lián)蛋白(Integrin)相互作用，從而抑制αVβ3整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的炎癥標(biāo)記并下調(diào)NF-κB途徑。

綜上，食源性免疫活性肽被攝取進(jìn)入上皮細(xì)胞或免疫細(xì)胞后，影響免疫信號通路，發(fā)揮免疫調(diào)控作用，不同的食源性免疫活性肽參與免疫調(diào)控的機(jī)制不同[34]。

此外，也有一些食源性免疫活性肽細(xì)胞試驗(yàn)相關(guān)的研究報道，包括細(xì)胞增殖、吞噬能力及細(xì)胞因子的分泌等方面的研究內(nèi)容。如Li等[35]從環(huán)紋蛤(Cyclinasinensis)蛋白水解產(chǎn)物中篩選出使小鼠巨噬細(xì)胞RAW 264.7相對增殖率最高的免疫活性肽SCSP(RVAPEEHPVEGRYLV)，通過細(xì)胞試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，SCSP可通過激活NF-κB信號通路來刺激巨噬細(xì)胞活性，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬作用，并增加NO、TNF-α、IL-6 和IL-1β的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)RAW 264.7細(xì)胞中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、核因子NF-κB(Nuclear transcription factor-κB)和NOD樣受體蛋白3(NLRP 3)的蛋白質(zhì)水平；而NF-κB抑制因子-α(IκB-α)的表達(dá)量下調(diào)。Wen等[36]對從大米蛋白質(zhì)胰酶水解產(chǎn)物中分離出的組分RPHs-C-7-3進(jìn)行免疫活性分析，發(fā)現(xiàn)其可以抑制經(jīng)LPS刺激的RAW 264.7巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)；RPHs-C-7-3可抑制NO 和TNF-α的釋放，降低TNF-α、iNOS、IL-6和IL-1的轉(zhuǎn)錄水平，減弱iNOS和NF-κB的蛋白表達(dá)，并阻止p65核轉(zhuǎn)位的信號通路，對LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞RAW 264.7起抗炎作用。樹突細(xì)胞是重要的提呈細(xì)胞之一，其中小鼠樹突細(xì)胞DC2.4是常用的研究抗原分子參與免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞系，通過考察DC2.4細(xì)胞吞噬抗原分子后其標(biāo)志物CD86與MHC II分子，及細(xì)胞因子IFN-γ、IL-6、IL-10、IL-12和TNF-α等的變化分析外源分子所參與的免疫調(diào)節(jié)作用[37]。

食源性免疫活性肽對先天免疫和適應(yīng)性免疫均有調(diào)節(jié)作用，包括誘導(dǎo)或調(diào)節(jié)細(xì)胞因子與免疫球蛋白的產(chǎn)生與分泌，刺激淋巴細(xì)胞增殖，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力和NK細(xì)胞活力，從而提高機(jī)體的防御能力，達(dá)到抑制促炎反應(yīng)并抵御病原體入侵的目的；食源性免疫活性肽并不直接與病原體相互作用，而是通過一定的方式進(jìn)入細(xì)胞參與免疫調(diào)控作用，提高宿主防御病原體的能力[26]。

4 研究策略及展望

現(xiàn)階段對食源性免疫活性肽作用機(jī)理的研究手段可歸納為體外免疫試驗(yàn)(即細(xì)胞模型：如小鼠巨噬細(xì)胞RAW 264.7，樹突細(xì)胞DC2.4、人單核細(xì)胞U937和THP-1等)和體內(nèi)免疫試驗(yàn)(動物模型：如小鼠等)兩大類。大多數(shù)細(xì)胞試驗(yàn)中，主要評估在免疫信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用的信號分子的變化，如腫瘤壞死因子TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB及NO等[37]。而動物試驗(yàn)中，主要考察喂食不同濃度的酶解肽一段時間(如3，7，14，28，45 d)后的動物體重變化，并收集不同組織，如血液、脾臟和胸腺等進(jìn)行免疫學(xué)、血液學(xué)和生物化學(xué)試驗(yàn)，主要包括考察淋巴細(xì)胞的增殖、腹膜巨噬細(xì)胞的吞噬作用、NK細(xì)胞的活性、脾臟T淋巴細(xì)胞(CD4+和CD8+等)的數(shù)量變化，并檢測分泌免疫球蛋白-A(S-IgA)(黏膜免疫)、血清免疫球蛋白(IgA、IgM和IgG)以及細(xì)胞因子(如IL-2、IFN-γ、IL-5和IL-6等)的含量等[28, 37]。

隨著各種組學(xué)研究的不斷發(fā)展，蛋白組和轉(zhuǎn)錄組技術(shù)能快速準(zhǔn)確篩選差異表達(dá)的相關(guān)功能蛋白質(zhì)和基因，研究[38]表明組學(xué)技術(shù)確實(shí)為研究外源肽調(diào)控細(xì)胞機(jī)制的有效手段。如Rojas-Caraballo等[39]采用化學(xué)合成含有B-和T-細(xì)胞表位的肽，利用該合成肽對小鼠進(jìn)行免疫處理，并用轉(zhuǎn)錄組技術(shù)對比分析免疫肽保護(hù)前后被肝吸蟲損害的脾臟內(nèi)RNA表達(dá)的差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用含有T細(xì)胞表位的3種肽的組合對小鼠有較高的保護(hù)作用，生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)與NO和活性氧產(chǎn)生相關(guān)的途徑發(fā)生變化，IL-12 和IL-8信號傳導(dǎo)途徑以及巨噬細(xì)胞產(chǎn)生均發(fā)生變化。

目前，對食源性免疫活性肽的探討還處于初級階段，大量存在于食品加工副產(chǎn)物中的蛋白質(zhì)未被充分利用。以大米為例，中國稻谷每年總產(chǎn)量為2.1億t左右，稻米的加工產(chǎn)生大量碎米、米糠、米渣以及淀粉發(fā)酵的副產(chǎn)物，富含蛋白質(zhì)，但并未得到充分的開發(fā)利用[40]。因此，有必要進(jìn)行更加深入的研究，獲得更加有效的分離和篩選策略，并解析食源性免疫活性肽的肽序規(guī)律。在肽組學(xué)和免疫信息學(xué)的研究基礎(chǔ)上，探索食源性免疫活性肽高效篩選方法，加速食源性免疫活性肽的研究和應(yīng)用。結(jié)合蛋白組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和生物信息學(xué)技術(shù)，動態(tài)分析食源性免疫活性肽參與免疫調(diào)控的蛋白質(zhì)和基因表達(dá)量變化，并采用組學(xué)工具分析這些關(guān)鍵基因之間的相互關(guān)系，繪制細(xì)胞內(nèi)參與食源性免疫活性肽調(diào)控作用的動態(tài)網(wǎng)絡(luò)圖。結(jié)合動物免疫試驗(yàn)，檢測相關(guān)免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子及免疫球蛋白的變化，最終解析食源性免疫活性肽作用的分子機(jī)理。