GC-MS/MS法測(cè)定煙草中的57種酯類香味成分

趙嘉幸，陳 黎，任宗燦，王曉瑜，崔華鵬，謝復(fù)煒，劉惠民

中國(guó)煙草總公司鄭州煙草研究院，鄭州高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)楓楊街2 號(hào) 450001

酯類香味物質(zhì)是煙草中常用的一類香料，對(duì)卷煙風(fēng)味有重要貢獻(xiàn)。研究表明，單體酯類通常具有甜味、果香或葡萄酒香氣，與煙草香氣協(xié)調(diào)；混合酯類可賦予煙氣特定的氣味，抑制刺激性，使煙草香味柔和，并且在適宜用量范圍內(nèi)一般不會(huì)對(duì)卷煙香氣有負(fù)面作用［1-3］。然而，目前對(duì)煙草中重要酯類香味成分的檢測(cè)方法鮮見(jiàn)報(bào)道。煙草組成成分繁雜，且大部分酯類香味成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)低，因此高效靈敏的檢測(cè)手段必不可少。

目前對(duì)煙草中香味成分的提取方法主要包括水蒸氣蒸餾法［4］、固相微萃取法［5］、吹掃捕集法［6］、超臨界萃取法［7］、頂空萃取法［8］、同時(shí)蒸餾萃取法［9］等，這些方法存在加熱時(shí)間長(zhǎng)或費(fèi)用昂貴等問(wèn)題。QuEChERS 前處理方法具有快速、簡(jiǎn)便、廉價(jià)、高效、安全、低溫等優(yōu)點(diǎn)［10］，目前已廣泛用于農(nóng)藥或獸藥殘留、法醫(yī)鑒定、毒品檢測(cè)以及環(huán)境監(jiān)測(cè)等方面［11-15］。目前對(duì)于煙草酯類香味成分的檢測(cè)主要基于非靶標(biāo)GC/MS 內(nèi)標(biāo)相對(duì)定量方法，僅能測(cè)定可準(zhǔn)確定性的化合物。受樣品基質(zhì)干擾等問(wèn)題制約，所檢測(cè)的指標(biāo)一般低于10 種，且靈敏度、通量均不能滿足實(shí)際應(yīng)用的需求。而GC-MS/MS 技術(shù)［16］具有多靶標(biāo)、高通量、高靈敏度、日間平行性好、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留、食品風(fēng)味檢測(cè)及環(huán)境監(jiān)測(cè)［17-20］等方面。

本研究中通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)外煙草添加劑名單、煙草成分分析文獻(xiàn)的整合、梳理，篩選出57 種對(duì)煙草感官品質(zhì)有影響的關(guān)鍵酯類香味成分。通過(guò)對(duì)樣品前處理、色譜-質(zhì)譜條件優(yōu)化，建立了酸性條件泡發(fā)、乙腈提取、無(wú)水MgSO4除水、GC-MS/MS 同時(shí)測(cè)定煙草中57 種關(guān)鍵酯類香味成分的分析方法，并建立標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)這些成分的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行絕對(duì)定量，使用t 檢驗(yàn)和偏最小二乘法判別分析（PLS-DA）篩選出差異成分并成功區(qū)分出不同風(fēng)格的卷煙，旨在為煙草酯類香味成分分析提供方法參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑和儀器

煙末（2016 年云南曲靖產(chǎn)C3F）；15 種市售商品卷煙：1#～5#為清香風(fēng)格卷煙，6#～10#為苔香風(fēng)格卷煙，11#～15#為焦甜風(fēng)格卷煙。

QuEChERS萃取試劑盒（4 g MgSO4+1 g NaCl）、分散固相萃取試劑盒（50 mg PSA（N-丙基乙二胺）+150 mg MgSO4）（美國(guó)Agilent 公司）；57 種酯類標(biāo)準(zhǔn)品（＞98%，分別購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich 公司、日本TCI 公司、北京百靈威科技有限公司）；苯乙酮-d8（98 atom% D，美國(guó)Sigma-Aldrich 公司）；乙腈（色譜純，美國(guó)J T Baker 公司）；二氯甲烷（色譜純，德國(guó)Chemicell 公司）。

Sin-QuEChERS Nano 簡(jiǎn)單基質(zhì)小柱（包括2 g Na2SO4、0.8 g MgSO4、90 mg PSA）、Sin-QuEChERS Nano 復(fù)雜基質(zhì)小柱（包括2 g Na2SO4、0.6 g MgSO4、60 mg PSA、30 mg GCB（石墨化炭黑）和25 mg MWCNTs（多壁碳納米管））（北京綠綿科技有限公司）；7890B-7000D 氣相色譜/三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent 公司）；EOFO-945066 多管式旋渦混合器（美國(guó)Talboys 公司）；3-30KS 高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Sigma公司）；Milli-Q超純水儀（美國(guó)Millipore公司）。

1.2 樣品前處理

稱取2 g 煙末樣品于50 mL 具塞離心管中，加入10 mL 磷酸鹽緩沖液，調(diào)pH 為3，渦旋使樣品完全浸潤(rùn)，靜置5 min；加入10 mL乙腈以及80 μL 30.0 mg/L苯乙酮-d8內(nèi)標(biāo)工作液，以2 500 r/min 渦旋10 min，而后放入-18 ℃的冰箱中冷凍10 min。取出后加入4 g 無(wú)水硫酸鎂、1 g 氯化鈉并迅速振搖，再以2 500 r/min 渦旋2 min，7 000 r/min 離心3 min；取1.5 mL 上清液，加入0.2 g 無(wú)水硫酸鎂，立即以2 500 r/min渦旋2 min，7 000 r/min 離心3 min；然后將上清液過(guò)0.22 μm 有機(jī)相濾膜后進(jìn)行GC-MS/MS 檢測(cè)。檢測(cè)條件：

色譜柱：DB-5MS UI 彈性石英毛細(xì)管色譜柱（60 m×0.25 mm×0.25 μm），進(jìn)樣口端串聯(lián)預(yù)柱（5 m×0.25 mm）；進(jìn)樣口溫度：280 ℃；程序升溫：75 ℃（5 min）進(jìn)樣模式：不分流進(jìn)樣，不分流時(shí)間1 min；載氣：氦氣（99.999%），恒流模式，流速1.5 mL/min；進(jìn)樣量：0.8 μL。電離模式：電子轟擊（EI）；電離能：70 eV；燈絲電流：35 μA；離子源溫度：230 ℃；四極桿溫度：150 ℃；傳輸線溫度：280 ℃；Q2碰撞氣：氮?dú)猓?9.999%），流量1.5 mL/min；淬滅氣：氦氣（99.999%），流量2.25 mL/min；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（dMRM）。MassHunter 工作站用于儀器控制和數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果與討論

2.1 酯類化合物及內(nèi)標(biāo)化合物的篩選

通過(guò)對(duì)煙草添加劑以及煙草成分分析文獻(xiàn)的整合、梳理及篩選，選擇對(duì)感官質(zhì)量影響較大的57 種酯類化合物，如表1 所示。

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

需要優(yōu)化的質(zhì)譜參數(shù)主要有母離子、子離子和碰撞能量。首先將各化合物進(jìn)行全掃描（Full scan）分析（m/z 20～330），確定保留時(shí)間及一級(jí)質(zhì)譜圖，并篩選2～4 個(gè)質(zhì)荷比（m/z）及豐度較大的離子作為備選母離子；再將上述各母離子在不同的碰撞能量（5、10、15、20、25、30、35、40 eV）下進(jìn)行產(chǎn)物離子掃描（Product ion scan），每個(gè)化合物篩選出4～8 對(duì)離子對(duì)及最優(yōu)碰撞能量；最后，用選擇多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（dMRM）分析標(biāo)準(zhǔn)溶液、基質(zhì)提取液、添加標(biāo)準(zhǔn)品的提取液，選擇抗干擾能力強(qiáng)、靈敏度高的兩對(duì)離子對(duì)分別作為定量及定性離子對(duì)。57 種酯類化合物及內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間、母離子、子離子及碰撞能量見(jiàn)表1，其中二氫茉莉酮酸甲酯具有順式、反式2 種構(gòu)型，在結(jié)果中表現(xiàn)出2 個(gè)色譜峰、2 個(gè)保留時(shí)間。

表1 57 種酯類化合物及其內(nèi)標(biāo)的MRM 參數(shù)Tab.1 MRM parameters of 57 esters and internal standard

表1 （續(xù)）

2.3 提取方式的選擇

煙草香味成分的提取目前多采用同時(shí)蒸餾萃?。⊿DE）法，而QuEChERS 法具有簡(jiǎn)便、高效等優(yōu)點(diǎn)。以提取效率為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比了同時(shí)蒸餾萃取法與QuEChERS法兩種前處理方式，并預(yù)先對(duì)同時(shí)蒸餾萃取法進(jìn)行了優(yōu)化。同時(shí)蒸餾萃取具體操作步驟如下：

稱取10 g 煙末，加入10 mL 泡發(fā)液（含10 mL H2O、0.55 g一水合檸檬酸以及3 g NaCl）泡發(fā)30 min，加入120 mL二氯甲烷（含3.045 μg/g 苯乙酮-d8內(nèi)標(biāo)）超聲0.5 h，過(guò)濾至1 000 mL 平底燒瓶中；將裝有提取液的1 000 mL燒瓶裝在同時(shí)蒸餾萃取裝置的一端，放入60 ℃水浴鍋中，另一端裝入100 mL 平底燒瓶，同時(shí)蒸餾萃取1 h。將100 mL平底燒瓶端放入60 ℃水浴鍋中；將裝有350 mL H2O 和90 g NaCl 的1 000 mL 平底燒瓶放入電熱套中，調(diào)節(jié)電熱套功率為0.3 kW，同時(shí)蒸餾萃取1.5 h，待冷卻后取下100 mL 平底燒瓶，加入無(wú)水Na2SO4干燥過(guò)夜。在常壓，水浴40 ℃的條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至1～2 mL。過(guò)0.22 μm 有機(jī)相濾膜，進(jìn)行GC-MS/MS 分析。

分別使用同時(shí)蒸餾萃取法和QuEChERS 法對(duì)樣品煙末進(jìn)行提取，GC-MS/MS 法檢測(cè)，結(jié)果如圖1 所示。使用QuEChERS 法和同時(shí)蒸餾萃取法分別提取出14 和13 種化合物，差異化合物為丁酸苯乙酯。共同提取出的13 個(gè)化合物中，以可提取出化合物的絕對(duì)響應(yīng)計(jì)，QuEChERS 法和同時(shí)蒸餾萃取法的提取結(jié)果絕對(duì)響應(yīng)較高的分別有6 和7 種。其中異丁酸香葉酯、水楊酸芐酯、苯乙酸茴香酯、甲酸芐酯及乙酸苯乙酯5 種酯類QuEChERS 法的提取效率顯著高于同時(shí)蒸餾萃取法。同時(shí)蒸餾萃取法在提取時(shí)溫度較高，有三丁胺等副產(chǎn)物產(chǎn)生，并且操作繁瑣，耗時(shí)較長(zhǎng)；而QuEChERS 提取法提取條件溫和，易于大批量制備，耗時(shí)短。因此，選擇QuEChERS 提取法作為前處理方法。

圖1 同時(shí)蒸餾萃取法與QuECHERS 法的提取效率對(duì)比Fig.1 Comparison of extraction efficiencies between SDE and QuECHERS methods

2.4 提取溶劑的選擇

文獻(xiàn)報(bào)道的煙草中香味成分檢測(cè)的提取溶劑多為二氯甲烷，乙腈在多組分分析中應(yīng)用較為廣泛。因此本研究中以目標(biāo)化合物在實(shí)際樣品中的提取效率為指標(biāo)，考察了二氯甲烷和乙腈兩種溶劑。如圖2 所示，用乙腈作為提取溶劑時(shí)，共提取出14 種目標(biāo)物；而二氯甲烷提取液中僅檢測(cè)出9 種酯類目標(biāo)物，丁酸苯乙酯、苯甲酸芐酯、異丁酸香葉酯、水楊酸芐酯及甲酸芐酯均未檢出。除十八烷酸甲酯和硬脂酸乙酯外，同一目標(biāo)物在乙腈提取物中的濃度明顯高于二氯甲烷提取物。結(jié)果表明，乙腈的提取效率顯著高于二氯甲烷。并且乙腈作為提取溶劑時(shí)，色譜峰型優(yōu)于二氯甲烷，3 次平行實(shí)驗(yàn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差更小，實(shí)驗(yàn)平行性更好。因此，選擇乙腈作為提取溶劑。

圖2 二氯甲烷與乙腈的提取效率對(duì)比（n=3）Fig.2 Comparison of extraction efficiencies between dichloromethane and acetonitrile（n=3）

2.5 泡發(fā)液pH 的優(yōu)化

煙草中含有大量煙堿，提取液中煙堿濃度過(guò)高會(huì)降低色譜柱柱效，并導(dǎo)致煙堿附近出峰物質(zhì)的保留時(shí)間漂移。因此，擬采用降低pH的方式降低提取液中煙堿濃度以消除其對(duì)目標(biāo)物檢測(cè)的影響。樣品煙末經(jīng)超純水泡發(fā)后pH 約為5.6。使用磷酸及磷酸二氫鈉鹽緩沖液將樣品煙末泡發(fā)后pH 分別調(diào)節(jié)至3.0 和4.0?？疾炝瞬煌琾H條件下各目標(biāo)物的提取效果以及提取液中煙堿濃度的差異。由于煙堿濃度過(guò)大，圖3 中的響應(yīng)值為其實(shí)際響應(yīng)的十萬(wàn)分之一。pH為4.0 及5.6 時(shí)，煙堿濃度極高，pH為3.0 時(shí)其濃度顯著降低，僅是pH 為5.6 時(shí)的3%左右。煙葉樣品中可檢測(cè)到的14 種酯類化合物中，丁酸苯乙酯、異丁酸香葉酯、水楊酸芐酯和乙酸苯乙酯在pH 為3.0 時(shí)的提取效率明顯優(yōu)于pH 為4.0 及5.6 時(shí)，苯乙酸茴香酯和十六烷酸甲酯在pH為3.0時(shí)的提取效率不及pH為4.0 和5.6 時(shí)，但其響應(yīng)較高，pH 為3.0 時(shí)仍能滿足檢測(cè)需要，其余化合物在不同pH時(shí)的提取效率無(wú)顯著性差異。因此，選擇在pH 為3.0 時(shí)進(jìn)行泡發(fā)。

圖3 不同泡發(fā)pH 對(duì)提取效率的影響（n=3）Fig.3 Effects of soaking pH value on extraction efficiency（n=3）

2.6 泡發(fā)時(shí)間的選擇

在pH 為3.0 條件下考察了不同泡發(fā)時(shí)間對(duì)實(shí)際樣品中目標(biāo)物提取效率的影響，時(shí)間分別為0（即不泡發(fā)）、5、10、20、30 min，其對(duì)各目標(biāo)物最終的提取效率如圖4 所示。結(jié)果表明，泡發(fā)時(shí)間對(duì)提取效率沒(méi)有明顯影響。然而不泡發(fā)時(shí)，提取液中含有較多煙堿，不利于后續(xù)檢測(cè)。因此，選擇泡發(fā)提取效率相對(duì)較高、用時(shí)相對(duì)較短的泡發(fā)時(shí)間，即泡發(fā)5 min。

圖4 不同泡發(fā)時(shí)間對(duì)提取效率的影響（n=3）Fig.4 Effects of soaking time on extraction efficiency（n=3）

2.7 渦旋時(shí)間的選擇

考察了渦旋時(shí)間分別為2、5、10、20、30 min 時(shí)對(duì)實(shí)際樣品的提取效率，結(jié)果如圖5 所示。苯乙酸茴香酯、十六烷酸甲酯、棕櫚酸乙酯、十八烷酸甲酯、9-十八烯酸甲酯隨渦旋時(shí)間延長(zhǎng)，提取效率有增加的趨勢(shì)；丁酸苯乙酯、異丁酸香葉酯、水楊酸芐酯隨提取時(shí)間延長(zhǎng)，提取效率降低；其余目標(biāo)物的提取效率隨提取時(shí)間延長(zhǎng)變化趨勢(shì)不明顯。綜合以上結(jié)果，渦旋時(shí)間選擇為10 min。

圖5 不同渦旋時(shí)間對(duì)提取效率的影響（n=3）Fig.5 Effects of vortexing time on extraction efficiency（n=3）

2.8 凈化劑的選擇

考察了4 種不同凈化方式對(duì)煙草樣品提取液的凈化效果及對(duì)目標(biāo)物的吸附效應(yīng)：取1.5 mL 上清液于離心管中，加入200 mg 無(wú)水硫酸鎂或50 mg PSA和150 mg 無(wú)水硫酸鎂；分別取Sin-QuEChERS Nano簡(jiǎn)單基質(zhì)小柱、Sin-QuEChERS Nano 復(fù)雜基質(zhì)小柱，置于有提取液的50 mL 離心管中，緩慢下壓至刻度處，吸取上清液，過(guò)0.22 μm有機(jī)相濾膜。結(jié)果表明，若提取液不凈化，含水率約為10%；加入150 mg 無(wú)水硫酸鎂后，含水率降為3%，對(duì)儀器更加友好。圖6 為各方式凈化后目標(biāo)化合物的響應(yīng)值。可以看出，用PSA凈化時(shí)，對(duì)部分目標(biāo)物吸附嚴(yán)重，丁酸苯乙酯、異丁酸香葉酯均無(wú)法檢出，除苯乙酸茴香酯外，其他目標(biāo)物均有不同程度吸附；用Sin-QuEChERS Nano簡(jiǎn)單基質(zhì)小柱凈化時(shí)，苯甲酸芐酯、異丁酸香葉酯、十五烷酸甲酯吸附嚴(yán)重，無(wú)法檢出，除苯乙酸茴香酯外，其他目標(biāo)物均有不同程度吸附；而使用Sin-QuEChERS Nano 復(fù)雜基質(zhì)小柱凈化時(shí)，苯甲酸芐酯、異丁酸香葉酯、水楊酸芐酯、十四烷酸甲酯、十五烷酸甲酯、9-十八烯酸甲酯均無(wú)法檢出，其余均有不同程度吸附。因此，最終使用無(wú)水MgSO4除水。

圖6 不同凈化方式對(duì)提取效率的影響（n=3）Fig.6 Effects of purification methods on extraction efficiency（n=3）

2.9 基質(zhì)效應(yīng)

本研究中通過(guò)公式（1）考察了57 種酯類香味成分的基質(zhì)效應(yīng)：

式中：A 為溶劑標(biāo)準(zhǔn)工作溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率；B 為基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。

基質(zhì)效應(yīng)越接近1，說(shuō)明基質(zhì)效應(yīng)越不明顯。結(jié)果表明，11種目標(biāo)物的基質(zhì)效應(yīng)均不明顯（0.9 ＜ME ＜1.1）；有24 種目標(biāo)物存在基質(zhì)減弱效應(yīng)（ME ＜1.0），33 種目標(biāo)物存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)（ME ＞1.0），其中苯甲酸芐酯、肉桂酸芐酯、苯乙酸茴香酯、9-十八烯酸甲酯、苔色酸乙酯5 種酯類化合物存在明顯的基質(zhì)效應(yīng)，使用純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，除高濃度點(diǎn)外，較低濃度點(diǎn)無(wú)信號(hào)響應(yīng)，但其基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液線性關(guān)系良好（表2）。因二氫茉莉酮酸甲酯有兩個(gè)峰，故總共有58 個(gè)色譜峰。因此，采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作液以校正基質(zhì)效應(yīng)引入的定量誤差。

對(duì)比河南、廣西、黑龍江及云南4 個(gè)產(chǎn)地的煙葉表明，云南煙葉（C3F，2016年）含有較少的目標(biāo)成分，因此選擇云南煙葉提取液作為基質(zhì)空白提取液?；|(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線配制方法：預(yù)先使用乙腈配制混合母液（100 mg/mL），而后以基質(zhì)空白提取液作為稀釋劑配制目標(biāo)濃度的工作液。

2.10 方法評(píng)價(jià)

為了減少基質(zhì)效應(yīng)的影響，采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為10、20、50、100、200、500、1 000 ng/mL。其中有6 種化合物由于基質(zhì)中質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高等原因，標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制范圍不同。十八烷酸甲酯、9-十八烯酸甲酯、乙酸己酯和丁酸環(huán)己酯4 種化合物，無(wú)10 ng/mL 點(diǎn)；甲酸苯乙酯無(wú)10、20 ng/mL點(diǎn)；十六烷酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度為100、200、500、1 000、2 000、5 000、10 000、20 000 ng/mL。考察0.05、0.50、5.00 mg/kg 3 個(gè)水平的加標(biāo)回收率，以10 倍信噪比作為方法定量限。如表3 所示，各化合物均有良好的線性關(guān)系（r2＞0.99），平均回收率范圍為62.5%～128.7%，RSD 在0.5～25.4%之間。以平均回收率為60%～120%且RSD＜20%為標(biāo)準(zhǔn)，在低添加水平下，47 個(gè)化合物達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)；在中、高添加水平下，57個(gè)化合物全部達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。定量限為3～74 μg/kg，其中有50個(gè)化合物的定量限≤50 μg/kg。另由于二氫茉莉酮酸甲酯具有2 個(gè)異構(gòu)體，其方法學(xué)性質(zhì)不同，分別列出。該方法具有良好的精密度、靈敏度，可滿足分析檢測(cè)需要。

表2 57 種酯類化合物在煙草提取液中的基質(zhì)效應(yīng)Tab.2 Matrix effects of 57 esters in tobacco extract

表3 57 種酯類化合物的相關(guān)系數(shù)、回收率（n=5）、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和定量限Tab.3 Correlation coefficients, recoveries (n=5), relative standard deviations (RSDs)and limits of quantification (LOQs) of 57 esters

表3 （續(xù)）

2.11 實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果分析

用該方法檢測(cè)了15 個(gè)不同風(fēng)格的卷煙樣品，共檢出了31 種酯類化合物，其中十六烷酸甲酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，其次是十八烷酸甲酯、棕櫚酸乙酯和9-十八烯酸甲酯，見(jiàn)表4。在可檢出的化合物中，以P值小于0.05 為標(biāo)準(zhǔn)，使用t 檢驗(yàn)篩選出8 種具有顯著性差異的成分，如表5 所示。使用最小二乘法判別分析該8 種酯類，結(jié)果見(jiàn)圖7?？芍?，不同風(fēng)格的卷煙呈顯著性差異，其中苔香風(fēng)格與焦甜風(fēng)格組內(nèi)差異較小，清香風(fēng)格組內(nèi)風(fēng)格差異較大。

表4 15 種市售卷煙的檢測(cè)結(jié)果Tab.4 Detection results of 15 commercial cigarette samples

表4 （續(xù)）

表4 （續(xù)）

表5 8 種具有顯著性差異的酯類香味成分的P 值及F 值Tab.5 P and F values of 8 esters with significant differences

圖7 8 種具有顯著性差異的酯類香味成分的PLS-DA 分析結(jié)果Fig.7 Results of PLS-DA analysis of 8 esters with significant differences

3 結(jié)論

①通過(guò)優(yōu)化的QuEChERS 前處理方法結(jié)合GC-MS/MS 技術(shù)建立了檢測(cè)煙草中重要酯類香味成分的方法，能滿足煙草樣品中57 種對(duì)感官品質(zhì)有影響的酯類香味成分檢測(cè)需求。②對(duì)于實(shí)際樣品檢測(cè)，可以較好地區(qū)分不同風(fēng)格的卷煙樣品，證明所建立的方法具有良好的實(shí)用性。③與傳統(tǒng)方法相比，本方法在靶標(biāo)物數(shù)量、靈敏度和精密度方面顯著提高，具有簡(jiǎn)便、高效、高通量等優(yōu)點(diǎn)。