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    艾絨的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)及其商品分級(jí)研究*

    2019-12-27 09:47:48萬(wàn)定榮趙百孝江遠(yuǎn)明徐滌新
    中國(guó)藥業(yè) 2019年24期
    關(guān)鍵詞:葉肉碎塊艾絨

    武 娟,萬(wàn)定榮 △,趙百孝 ,陳 熙 ,江遠(yuǎn)明 ,周 勝 ,徐滌新 ,徐 燃

    (1.中南民族大學(xué)藥學(xué)院,湖北 武漢 430074; 2.北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院,北京 100029; 3.湖北省蘄春縣市場(chǎng)監(jiān)督管理局,湖北 蘄春 435300; 4.湖北輕工大學(xué)生物與制藥工程學(xué)院,湖北 武漢 430048)

    艾灸療法是中醫(yī)傳統(tǒng)治療方法,具有溫通經(jīng)脈、調(diào)和氣血、協(xié)調(diào)陰陽(yáng)、扶正祛邪[1]的功效,廣泛用于治療疾病和康養(yǎng)保健。艾絨是菊科植物艾Artemisia argyiLévl.et Vent.的干燥葉經(jīng)粉碎過(guò)篩制得的細(xì)軟絨狀物,常被加工制成艾條等灸用制品,用于艾灸治療與保健。艾絨的質(zhì)量對(duì)艾灸療法的臨床效果至關(guān)重要。目前普遍認(rèn)為,在一定范圍內(nèi)艾絨純度越高,艾灸制品質(zhì)量越好。商品艾絨的純度通常用多少kg艾葉可制成1 kg艾絨,即葉絨比來(lái)表示。但目前不同廠家的葉絨比標(biāo)示多有虛夸成分,廠家間的比例標(biāo)示也不統(tǒng)一;同時(shí)市場(chǎng)上時(shí)有用質(zhì)次(低葉絨比)艾絨虛充優(yōu)質(zhì)(高葉絨比)艾絨,更有用五月艾Artemisia indicaWilld的葉等混偽品及艾莖稈等低劣原料混淆加工制作艾絨的現(xiàn)象。本研究中對(duì)不同純度或質(zhì)量規(guī)格的正品艾絨進(jìn)行了性狀、顯微、薄層色譜鑒別及主要化學(xué)物質(zhì)(揮發(fā)油、黃酮類(lèi)[2-4])的含量測(cè)定,并通過(guò)與偽劣品比較,建立了艾絨質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),確定了經(jīng)代表性艾絨生產(chǎn)廠家及艾灸師認(rèn)同的艾絨等級(jí)分類(lèi)?,F(xiàn)報(bào)道如下。

    1 儀器、藥材與試藥

    1.1 儀器

    CX41型顯微鏡(日本Olympus公司);UV-1800PC型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海美譜達(dá)儀器有限公司);揮發(fā)油提取器(武漢杰恒達(dá)工貿(mào)有限公司);98-1-B型電子調(diào)溫電熱套,101-0AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市泰斯特儀器有限公司)。

    1.2 藥材

    艾絨藥材共47批,從湖北、河南、寧夏、江蘇、山東、江西等省區(qū)收集或購(gòu)買(mǎi),樣品來(lái)源見(jiàn)表1(括號(hào)內(nèi)比值為葉絨比,系各廠家或公司自行標(biāo)注)。五月艾Artemisia indicaWilld原料樣品2批,自采于湖北建始縣和武漢市郊,由中南民族大學(xué)藥學(xué)院萬(wàn)定榮教授鑒定。

    1.3 試藥

    硅膠G(青島海洋化工廠);芹菜素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào)為 11901-201102,含量99.6%);氧化石竹烯對(duì)照品(天津一方科技有限公司,Lot:AB671C);其余試劑均為分析純。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 性狀和顯微鑒別

    2.1.1 方法

    按2015年版《中國(guó)藥典(一部)》規(guī)定進(jìn)行鑒別。其中顯微計(jì)量或計(jì)數(shù)時(shí),觀察取樣量為1.0 mg;觀察的目標(biāo)物面積0.14 mm2(即在4×10倍光學(xué)顯微鏡下,目標(biāo)物占目鏡測(cè)微尺的長(zhǎng)、寬各15小格)。

    2.1.2 性狀

    優(yōu)質(zhì)艾絨樣品呈絨團(tuán)狀,表面為灰黃色、土黃色、淺褐黃色或帶灰綠色。散有許多至極多的黑色至綠黑色的葉片碎末小點(diǎn),無(wú)或偶見(jiàn)淺黃色或綠黃色的粗纖維。質(zhì)輕柔軟,手捻之不易散開(kāi)而呈狹長(zhǎng)橄欖形。氣微香,或具特異的濃香或清香氣,味微苦、微辛、微澀。點(diǎn)燃后不起火焰,散發(fā)芳香氣。

    質(zhì)量較次的艾絨中,其葉片碎末所占比例較大,且往往摻有艾的莖稈為原料制成。其絨團(tuán)表面帶明顯的灰綠色或呈暗綠黃色,可見(jiàn)類(lèi)白色的粗顆粒(莖髓小碎塊)及淺黃色粗纖維,手指揉捏有粗糙感甚至扎手。

    2.1.3 顯微特征

    優(yōu)質(zhì)艾絨樣品T形毛眾多,大多相互纏結(jié)成亂團(tuán)狀。其頂細(xì)胞細(xì)長(zhǎng),彎曲、扭曲或相互纏結(jié),直徑5~18 μm,長(zhǎng) 210~960 μm,極少可達(dá) 1 000 μm 以上,末端漸尖,中部可見(jiàn)類(lèi)圓形、卵圓形或橢圓形的柄細(xì)胞脫落痕;柄細(xì)胞大多碎落,殘留者具1~3(最多6)個(gè)類(lèi)方形或長(zhǎng)方形細(xì)胞,有的中部略膨大。長(zhǎng)方形、類(lèi)方形或不規(guī)則葉肉碎塊(柵狀細(xì)胞、海綿組織)少見(jiàn)、常見(jiàn)或眾多,呈棕黃色、黃棕色、暗棕色或類(lèi)黃色。碎塊中有的可見(jiàn)細(xì)長(zhǎng)的螺紋導(dǎo)管,稀見(jiàn)具緣紋孔導(dǎo)管及網(wǎng)紋導(dǎo)管,導(dǎo)管多相聚或與纖維相伴,直徑 5~30 μm;有的碎塊密布直徑為 3~12 μm的細(xì)小草酸鈣簇晶,并少見(jiàn)細(xì)胞成對(duì)排列的鞋底形腺毛(頂面觀);碎塊中纖維少見(jiàn)或偶見(jiàn),直徑 7 ~20 μm,末端漸尖。表皮碎片(表面觀)偶見(jiàn)或可見(jiàn),具不定式氣孔。艾絨顯微特征模式圖見(jiàn)圖1 A,高純度的純絨顯微特征見(jiàn)圖1 B。不同純度或質(zhì)量規(guī)格的艾絨中葉肉碎塊量存在明顯不同。艾絨純度越低,其葉肉碎塊所占比重越大。

    表1 不同艾絨樣品(葉絨比系廠家標(biāo)示)揮發(fā)油、總黃酮含量測(cè)定結(jié)果

    圖1 艾絨顯微模式圖

    五月艾絨與正品艾絨的性狀無(wú)明顯差異,但兩者顯微特征有顯著差異:五月艾絨T形毛頂細(xì)胞極細(xì)長(zhǎng),明顯扭曲或相互纏結(jié),直徑 5~10 μm,長(zhǎng)達(dá) 1 000 μm 以上者常見(jiàn),最長(zhǎng)可超2000μm;草酸鈣簇晶更為細(xì)小,直徑僅3~6 μm;并可見(jiàn)副衛(wèi)細(xì)胞脫離后的氣孔散在,有的氣孔的保衛(wèi)細(xì)胞呈電話筒形及啞鈴形。詳見(jiàn)圖2。

    圖2 五月艾絨中的氣孔顯微圖

    2.2 薄層色譜鑒別

    取艾絨樣品1.0 g,置燒瓶中,加石油醚(60~90℃)15 mL,置水浴上加熱回流30 min,冷卻,濾過(guò),濾液揮干,殘?jiān)诱和?.5 mL使溶解,取上清液作為供試品溶液。取氧化石竹烯對(duì)照品2.5 mg,溶解于5 mL正己烷中,作為對(duì)照品溶液。吸取上述2種溶液各5 μL,點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(60~90℃)-甲苯-丙酮(10 ∶8 ∶0.5,V/V/V)為展開(kāi)劑展開(kāi),取出,晾干,噴顯色劑(取20%硫酸溶液10 mL,緩緩加至10 mL冰冷的冰醋酸中,加4-甲氧基苯甲醛1 mL,再加20%硫酸溶液20 mL,混勻)后,在105℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。在自然光下,將供試品溶液色譜斑點(diǎn)的數(shù)目、位置比移(Rf)值和顏色與對(duì)照品色譜比較,進(jìn)行鑒定分析。結(jié)果所有不同純度或質(zhì)量規(guī)格的供試品溶液色譜均有6個(gè)紫紅色的主斑點(diǎn)。Rf值均分別為0.09,0.16,0.38,0.54,0.68,0.95。在與氧化石竹烯對(duì)照品色譜斑點(diǎn)相同的Rf值處,顯示出1個(gè)對(duì)應(yīng)的紫紅色斑點(diǎn)。詳見(jiàn)圖 3。

    圖3 艾絨樣品薄層色譜圖

    2.3 含量測(cè)定

    2.3.1 揮發(fā)油

    參照2015年版《中國(guó)藥典(四部)》通則“2204揮發(fā)油測(cè)定法”進(jìn)行測(cè)定,其中艾絨供試品的取樣量為40.00 g,加水量為600 mL。結(jié)果見(jiàn)表1。

    2.3.2 總黃酮

    溶液制備:取芹菜素對(duì)照品適量,精密稱(chēng)定,加70%甲醇制成每1 mL含0.05 mg的對(duì)照品溶液。取剪碎的樣品約1 g(精確至0.000 1 g),置100 mL圓底燒瓶中,精密加入70%甲醇50 mL,稱(chēng)定質(zhì)量,85℃水浴回流1 h,放冷,再次稱(chēng)定質(zhì)量,用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液5 mL,置25 mL容量瓶中,加70%甲醇定容,搖勻,即得供試品貯備液。精密量取1 mL,置25 mL容量瓶中,加70%甲醇定容,搖勻,即得供試品溶液。

    方法學(xué)考察:精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均小于2%,表明儀器精密度良好,供試品溶液在室溫下12 h內(nèi)穩(wěn)定,且方法重復(fù)性良好。

    測(cè)定與計(jì)算:以70%甲醇為空白,在338 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度并計(jì)算,按干燥品計(jì)算總黃酮(以芹菜素計(jì))含量。結(jié)果見(jiàn)表1??梢?jiàn),不同產(chǎn)地艾葉原料所含揮發(fā)油、總黃酮含量存在差異性[5],導(dǎo)致艾絨揮發(fā)油和總黃酮含量也存在差異,其中葉絨比越高,揮發(fā)油和總黃酮的含量越低。說(shuō)明艾絨的毛絨部分中這兩類(lèi)成分的含量低于同批艾絨制作時(shí)產(chǎn)生的葉肉碎末中兩類(lèi)成分的含量。

    2.4 艾絨分級(jí)

    2.4.1 分級(jí)思路

    由于不同葉絨比的艾絨具有不同程度的性狀、顯微特征差異性,結(jié)合其主要化學(xué)物質(zhì)含量的差異,可將常規(guī)艾絨商品質(zhì)量等級(jí)分為一、二、三級(jí)。為避免艾絨商品中混入過(guò)多的葉片碎末,有必要建立不同等級(jí)艾絨中揮發(fā)油和總黃酮成分的最高含量限度。但作為臨床公認(rèn)為質(zhì)量較好的陳艾絨,這兩類(lèi)化學(xué)物質(zhì)的含量較低,故不對(duì)各艾絨等級(jí)或規(guī)格作揮發(fā)油和總黃酮含量的下限要求。

    2.4.2 等級(jí)特征

    一級(jí)品:絨團(tuán)表面呈灰黃色、淺褐黃色、土黃色,有許多黑色至綠黑色的葉片碎末。質(zhì)輕柔綿軟,手指揉捏無(wú)粗糙感且不扎手。氣微香,味苦或微苦,并具極微弱或微弱的辛澀味。在顯微鏡下主要為相互纏繞的T形毛,其柄部幾乎全部脫落,偶見(jiàn)柄細(xì)胞殘段。葉肉碎塊較少,體較小,長(zhǎng)1000 μm以上者僅偶見(jiàn)或極少見(jiàn),面積在0.14 mm2以上者較少,不超過(guò)20個(gè)(見(jiàn)圖4)。其揮發(fā)油含量不應(yīng)高于每100 g含0.40 mL,總黃酮含量不應(yīng)高于2.50%。

    圖4 艾絨一級(jí)品特征圖

    二級(jí)品:絨團(tuán)表面呈灰黃色、暗黃色或略帶暗綠色,偶見(jiàn)或極少見(jiàn)淺黃色的粗纖維及類(lèi)白色的粗顆粒,有較多至大量的黑色至綠黑色的葉片碎末。質(zhì)輕柔軟,手指揉捏有粗糙感但不扎手。氣香,味苦、辛或微辛、微澀。在顯微鏡下多為相互纏繞的T形毛,T形毛的柄部絕大多數(shù)脫落,極少數(shù)保留柄細(xì)胞殘段。葉肉碎塊多或眾多,體較大,長(zhǎng)度1000μm以上者常可見(jiàn),面積在0.14mm2以上者較多,但不超過(guò)50個(gè)(見(jiàn)圖5)。其揮發(fā)油含量不應(yīng)高于每100 g含0.60 mL,總黃酮含量不應(yīng)高于3.20%。

    圖5 艾絨二級(jí)品特征圖

    三級(jí)品:絨團(tuán)表面呈暗綠黃色或帶灰綠色,少見(jiàn)淺黃色或綠黃色的粗纖維及類(lèi)白色的粗顆粒,有極多黑色至綠黑色的葉片碎末。質(zhì)輕較柔軟,手指揉捏有明顯糙手感并可有扎手感。氣濃香或清香特異,味苦或極苦、辛、微澀。在顯微鏡下主要為葉肉碎塊及T形毛。葉肉碎塊極多,體較大,長(zhǎng)1 000 μm以上者多見(jiàn),最長(zhǎng)者可達(dá)2 000 μm以上,面積在0.14 mm2以上者更多。T形毛的柄部大多數(shù)脫落,少數(shù)保留柄細(xì)胞殘段(見(jiàn)圖6)。其揮發(fā)油含量不應(yīng)高于每100 g含0.80 mL,總黃酮含量不應(yīng)高于3.90%。

    圖6 艾絨三級(jí)品特征圖

    3 討論

    商品艾絨中,除了有用儲(chǔ)存不足1年的新艾葉所加工成的新艾絨和儲(chǔ)存1年以上的陳艾葉所加工成的陳艾絨外,還有用傳統(tǒng)手工藝制成的手工絨,以及經(jīng)反復(fù)粉碎過(guò)篩而得到的純度極高且呈土黃色的“黃金絨”。研究發(fā)現(xiàn),新艾絨有時(shí)帶灰綠色,揮發(fā)油與總黃酮含量較高;陳艾絨的揮發(fā)油與總黃酮含量水平較低;黃金絨顏色較純正,多呈土黃色,因純度極高,顯微鏡下極少見(jiàn)葉肉碎塊;傳統(tǒng)手工絨有分等級(jí)與不分等級(jí)之別,其中不分等級(jí)者在顯微鏡下主要為葉肉或葉片碎塊,T形毛相對(duì)較少,且揮發(fā)油含量和總黃酮含量可分別高于每100 g含0.80 mL和3.90%。

    艾絨是艾灸療法的直接原材料,其真?zhèn)渭百|(zhì)量?jī)?yōu)劣對(duì)艾灸療法的醫(yī)療應(yīng)用至關(guān)重要。本研究結(jié)果證明,對(duì)艾絨進(jìn)行性狀、顯微及薄層色譜鑒定及主要化學(xué)物質(zhì)的含量測(cè)定是目前對(duì)其真?zhèn)舞b別和質(zhì)量分級(jí)的可靠手段。在對(duì)艾絨商品進(jìn)行質(zhì)量分級(jí),建立等級(jí)鑒定方法的基礎(chǔ)上,形成了艾絨的質(zhì)量評(píng)價(jià)與等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。這對(duì)于規(guī)范以艾絨為原料的艾灸產(chǎn)品的質(zhì)量,維護(hù)消費(fèi)者權(quán)益,保障艾絨制品應(yīng)用的安全性與有效性,進(jìn)而促進(jìn)艾產(chǎn)業(yè)的規(guī)范發(fā)展,具有積極作用。

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