煙蚜繭蜂僵蚜產(chǎn)品低溫儲存方法研究

藺忠龍 謝永輝 歐陽進(jìn) 吳道琴 詹莜國

摘 要 為提高冷藏后的僵蚜羽化率，延長僵蚜產(chǎn)品有效冷藏期，比較了不同保濕及冷藏處理方式對僵蚜羽化率的影響。結(jié)果表明，通過保濕處理能有效提高冷藏后僵蚜羽化率;綜合生產(chǎn)成本和生態(tài)因素，采用蒸餾水+蕎麥殼基質(zhì)進(jìn)行保濕，效果更好;變溫冷藏（1～4 ℃、2～5 ℃）對提高僵蚜羽化率有明顯增益作用;低溫冷藏對僵蚜羽化率、產(chǎn)卵量無明顯影響。

關(guān)鍵詞 煙蚜繭蜂;僵蚜;羽化率;低溫冷藏

中圖分類號：S476.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.26.092

煙蚜繭蜂（Aphidius gifuensis Ashmead）隸屬膜翅目（Hymenoptera）姬蜂總科（Ichneumonoidea）蚜繭蜂科（Aphidiidae）蚜繭蜂屬（Aphidius），是蚜蟲的專性內(nèi)寄生蜂，其發(fā)育歷期分為卵、幼蟲、蛹和成蟲4個時

期[1]。冷藏是一種低溫長時脅迫，低溫儲存昆蟲的耐寒性對冷藏效果有顯著的影響，且同一昆蟲不同發(fā)育期和蟲態(tài)，對低溫的適應(yīng)性不同。對于寄生蜂而言，成蜂期與非成熟期相比，后者更適應(yīng)低溫的儲存，其中蛹期被認(rèn)為是最適合冷藏的蟲態(tài)[2]。高效收集僵蚜，通過低溫處理抑制煙蚜繭蜂發(fā)育，是目前冷藏?zé)熝晾O蜂的有效方法。

我國最早于1970年，王太忠等[3]在山東煙草上首次發(fā)現(xiàn)煙蚜繭蜂，并對其形態(tài)特征做了初步描述。20世紀(jì)70年代，國內(nèi)學(xué)者對煙蚜繭蜂生態(tài)學(xué)、生物學(xué)特性做了大量研究，為煙蚜繭蜂人工大規(guī)模繁育奠定了理論基

礎(chǔ)[1，4]。詹莜國等[5]對當(dāng)前煙蚜繭蜂產(chǎn)品化研究與應(yīng)用存在的問題進(jìn)行了全面的歸納和總結(jié)，為我國煙蚜繭蜂產(chǎn)品開發(fā)指明了方向。目前由于僵蚜收集困難，煙蚜繭蜂的田間應(yīng)用依然停留在散放僵蚜苗層面，因此如何高效、低損傷收集僵蚜成為煙蚜繭蜂產(chǎn)品化的一個瓶頸，同時也是相關(guān)學(xué)者研究的焦點(diǎn)[6]。闕勁松等[7]研發(fā)了電動僵蚜刷，每人每天（8 h）可收集僵蚜40 700頭，收集后僵蚜羽化率為86.67%。截至目前，仍然沒有高效收集煙蚜繭蜂僵蚜的方法。大多數(shù)寄生性天敵昆蟲（松毛蟲赤眼蜂、椰心葉甲嚙小蜂等）對溫度、濕度較為敏感[8-9]。煙蚜繭蜂在不同地區(qū)其生育周期亦有所不同，在南方和北方，煙蚜繭蜂的世代數(shù)截然不同，因此煙蚜繭蜂低溫冷藏應(yīng)因地制宜、有區(qū)別地進(jìn)行[10-12]。在北方低溫季節(jié)，煙蚜繭蜂田間滯育率在60%～80%[13];在福建，陳珍珍[14]

研究表明，Ⅳ齡煙蚜繭蜂在6 ℃低溫條件下處于休眠狀態(tài)，即停止發(fā)育;在云南，煙蚜繭蜂全年無越冬現(xiàn)象[15]。

關(guān)于煙蚜繭蜂低溫冷藏，闕勁松等[16]對不同僵化天數(shù)的僵蚜進(jìn)行了低溫冷藏，結(jié)果表明僵化2～3 d的僵蚜在3 ℃低溫條件下冷藏效果最好，冷藏30 d后，僵蚜羽化率均高于50%;方永祥[17]在研究中指出，以3日齡僵蚜在5 ℃條件下冷藏效果最好，冷藏20 d后僵蚜羽化率高達(dá)80.04%;二人研究均表明低溫冷藏對煙蚜繭蜂壽命和產(chǎn)卵量無明顯影響。

目前，關(guān)于僵蚜高效收集相關(guān)報道較少，基于此，利用僵蚜剝離機(jī)，在高效收集僵蚜的前提下進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。溫濕度對煙蚜繭蜂生長發(fā)育影響的相關(guān)報道較多，陳華祥等[18]在研究中指出，濕度對煙蚜繭蜂僵蚜形成整齊度有明顯影響，但關(guān)于濕度對僵蚜低溫冷藏及冷藏后羽化率是否有影響，目前尚未有相關(guān)報道。

以變溫刺激僵蚜休眠、增加僵蚜產(chǎn)品濕度為突破口，探索最佳冷藏方法，并測定其對煙蚜繭蜂成蜂壽命、產(chǎn)卵量的影響。以云南昆明地區(qū)煙蚜繭蜂為試驗(yàn)對象，通過比較不同冷藏方法的僵蚜羽化率，以及測試?yán)洳睾蟪煞鋲勖?、產(chǎn)卵量，篩選最優(yōu)冷藏方法，從而為云南地區(qū)煙蚜繭蜂僵蚜產(chǎn)品低溫儲存提供有效方法，解決目前煙蚜繭蜂僵蚜產(chǎn)品規(guī)模化低溫儲存貨架期短、羽化率低等問題。

1 材料與方法

1.1 材料

供試蟲源：煙蚜、煙蚜繭蜂及僵蚜在尋甸回族彝族自治縣煙草公司技術(shù)推廣站繁育。

供試寄主植物：云煙203。

指型管（5 mL）、塑料瓶（直徑9 cm、高7 cm）、尼龍網(wǎng)（80目）、蕎麥殼基質(zhì)、脫脂棉、蒸餾水、毛筆。

1.2 方法

1.2.1 濕度對煙蚜繭蜂僵蚜產(chǎn)品羽化率的影響

規(guī)?；敝碂熝晾O蜂過程中當(dāng)僵蚜集中形成時，利用僵蚜剝離機(jī)收集僵蚜，按每管100頭進(jìn)行分裝。處理Ⅰ：蘸有蒸餾水的脫脂棉，置于指形管底部，將僵蚜（100頭）轉(zhuǎn)移至兜狀尼龍網(wǎng)上，置于指型管中，瓶蓋封口（脫脂棉保濕）;處理Ⅱ：僵蚜直接放入管中，瓶蓋封口（不保濕）;處理Ⅲ：在100 mL燒杯中加入

50 mL蕎麥殼基質(zhì)，加蒸餾水1 mL攪拌均勻，取25 mL蕎麥殼基質(zhì)置于塑料瓶底部，將100頭僵蚜放入，再將剩余25 mL基質(zhì)覆蓋其上，蓋上瓶蓋（蕎麥殼保濕）;處理Ⅳ：取25 mL未加水蕎麥殼，置于塑料瓶底部，將100頭僵蚜放入，再將25 mL基質(zhì)覆蓋其上，蓋上瓶蓋（蕎麥殼不保濕）。將上述4個處理，置于恒溫（3±1）℃、濕度80%～90%的冷柜中，分別儲存15 d、20 d、25 d和30 d后取出，放入溫度（25±1）℃、濕度85%～95%的恒溫箱中任其自由羽化。另設(shè)對照組CK1：蘸有蒸餾水的脫脂棉，置于指形管底部，將僵蚜（100頭）轉(zhuǎn)移至兜狀尼龍網(wǎng)上，置于指型管中，瓶蓋封口（脫脂棉保濕）不冷藏，作為處理Ⅰ和處理Ⅲ對照;CK2：僵蚜直接裝入指形管內(nèi)，瓶蓋封口不保濕不冷藏處理作為處理Ⅱ和處理Ⅳ對照。對照組放入溫度（25±1）℃、濕度85%～95%恒溫箱中任其自由羽化。

以上試驗(yàn)均重復(fù)3次，每天定時統(tǒng)計(jì)成蜂羽化數(shù)，連續(xù)5 d無成蜂羽化，結(jié)束試驗(yàn)。羽化率計(jì)算公式為：

1.2.2 煙蚜繭蜂僵蚜產(chǎn)品低溫儲存最適溫度研究

僵蚜集中形成時期，采用僵蚜剝離機(jī)收集僵蚜，每管分裝100頭;5 mL指形管底部加入加濕的脫脂棉球，80目尼龍網(wǎng)剪成小塊做成兜狀，把僵蚜裝入兜狀內(nèi)，瓶蓋封口，分別置于冷柜進(jìn)行恒溫處理A（2 ℃）、處理B（4 ℃）和變溫處理C（1～4 ℃）、處理D（2～5 ℃）（變溫為周期化變溫，即緩慢升溫和降溫，周期為12 h），并于濕度60%～85%條件下分別冷藏15 d、20 d、25 d、30 d后取出置于溫度（25±1）℃、濕度85%～95%人工氣候箱中任其自由羽化。軟毛筆挑取僵蚜，按上述方法進(jìn)行冷藏，分別為處理E、處理F、處理G、處理H;將冷藏后的僵蚜取出，放入溫度（25±1）℃、濕度85%～95%人工氣候箱中任其自由羽化，每天定時統(tǒng)計(jì)僵蚜羽化數(shù)，連續(xù)

5 d無羽化時，結(jié)束試驗(yàn)。以上試驗(yàn)均重復(fù)3次。

1.2.3 低溫儲存時間對煙蚜繭蜂壽命和產(chǎn)卵量的影響

壽命測試：將蘸有濃度10%蜜糖水的棉條放入指型管中，每管引入10頭1.2.1中羽化的雌成蜂，瓶蓋封口，每隔3 h記錄一次雌蜂成活數(shù)，視棉條含蜜水情況，用滴管緩慢加蜜水，直至全部雌蜂死亡，實(shí)驗(yàn)結(jié)束。以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

產(chǎn)卵量測試：在蚜量約2 000頭/株的盆栽煙株上，接入已交配2 h且飼喂過10%蜜糖水的雌蜂1頭，第5天開始收集形成的寄生蚜，在電鏡下解剖，記錄卵的數(shù)量，直到雌蜂死亡，若連續(xù)5 d無寄生蚜形成，則試驗(yàn)結(jié)束。以上試驗(yàn)重復(fù)10次。

以上試驗(yàn)在規(guī)模繁蜂大棚里進(jìn)行，溫度20～28 ℃、濕度50%～75%。

2 結(jié)果與分析

2.1 濕度對煙蚜繭蜂僵蚜產(chǎn)品羽化率的影響

如表1所示，從僵蚜羽化率與冷藏時間的關(guān)系來看，4個處理僵蚜羽化率均隨冷藏時間的延長而降低，其中處理Ⅰ冷藏15 d和20 d僵蚜羽化率分別為93.00%和90.00%，與對照（CK1）僵蚜羽化率96.33%無明顯差異

（P<0.05），冷藏至第25 d時羽化率僅為72.00%;處理Ⅱ冷藏至第15 d時僵蚜羽化率僅為80.00%，顯著低于對照組（CK1）僵蚜羽化率（96.33%）（P<0.05）;處理Ⅲ冷藏15 d和20 d后，僵蚜羽化率均大于90.00%，與對照組（CK2）僵蚜羽化率89.00%無明顯差異

（P<0.05）;處理Ⅳ冷藏效果較差，冷藏15 d、20 d、25 d和30 d的僵蚜羽化率分別為68.00%、54.67%、33.67%和24.00%，均顯著低于對照組（CK2）僵蚜羽化率89.00%（P<0.05）。

從不同處理僵蚜羽化率來看，濕度對低溫儲存過的僵蚜及未被低溫儲存過的僵蚜羽化率均有顯著的影響，即濕度充分有利于煙蚜繭蜂僵蚜的羽化，可能的原因是，適宜的濕度促進(jìn)僵蚜體壁軟化，更有利于成蜂破殼而出。冷藏15 d、20 d后，處理Ⅰ和處理Ⅲ僵蚜羽化率分別為93.00%、90.00%和91.33%、90.33%，二者低溫冷藏相同時間后，羽化率無明顯差異（P>0.05），但均顯著高于處理Ⅱ（80.00%、73.33%）和處理Ⅳ（68.00%、54.67%）低溫冷藏相同時間后的僵蚜羽化率（P<0.05）。

2.2 煙蚜繭蜂僵蚜產(chǎn)品低溫儲存最適溫度研究

從表中可以看出，不同冷藏溫度對僵蚜羽化率的影響較大，而變溫冷藏更有利于僵蚜的羽化。變溫低溫冷藏處理C、處理D、處理G和處理H冷藏25 d后羽化率均高于80%，分別為83.33%、82.33%、88.67%和87.33%，均顯著高于恒溫低溫冷藏處理A、處理B、處理E和處理F的羽化率，其羽化率分別為36.00%、52.67%、40.67%和57.00%。各處理均隨著冷藏時間的延長，僵蚜羽化率逐漸降低，冷藏30 d后，處理A～H的羽化率分別為25.67%、32.00%、74.00%、72.33%、29.00%、34.33%、84.00%和83.00%。在冷藏時間、溫度一定的情況下，與毛筆挑取僵蚜進(jìn)行冷藏相比，僵蚜剝離機(jī)收集后，僵蚜羽化率略低。僵蚜剝離機(jī)收集僵蚜，在1～

4 ℃（處理C）條件下變溫冷藏15 d、20 d、25 d后僵蚜羽化率分別為90.33%、86.00%、83.33%，與2～5 ℃（處理D）條件下冷藏相同時間后的僵蚜羽化率無顯著差異

（P>0.05），兩者冷藏相同時間后的羽化率均顯著低于手工挑取僵蚜冷藏同等時間后的羽化率（P<0.05），但在2～5 ℃（處理D）條件下，儲存期間少部分僵蚜?xí)鸹?，?dǎo)致煙蚜繭蜂僵蚜產(chǎn)品利用率降低。從綜合效率方面分析，僵蚜剝離機(jī)收集效率高、節(jié)省成本，更適合在僵蚜產(chǎn)品收集中推廣應(yīng)用。研究結(jié)果還表明，煙蚜繭蜂僵蚜產(chǎn)品的有效儲存期為25 d。

2.3 低溫儲存時間對煙蚜繭蜂壽命和產(chǎn)卵量的影響

從表3可以看出，冷藏15 d、20 d、25 d和30 d后，雌蜂壽命分別為4.28 d、4.25 d、4.31 d和4.25 d，與對照組（未冷藏）煙蚜繭蜂雌蜂壽命4.28 d無顯著差異（P<0.05）。

于產(chǎn)卵量而言，冷藏15 d、20 d、25 d和30 d后，雌蜂產(chǎn)卵量分別為100.67頭、99.00頭、101.33頭、103.33頭，與未冷藏雌蜂產(chǎn)卵量100.67頭無顯著差異（P<0.05）。

3 結(jié)論與討論

3.1 濕度對煙蚜繭蜂僵蚜低溫冷藏的影響

對煙蚜繭蜂而言，濕度的影響主要表現(xiàn)在繁蜂環(huán)節(jié)，劉瓊等[19]研究指出，在僵蚜繁育過程中，以空氣相對濕度為70%處理最優(yōu)，在這個濕度條件下，25 d后每株僵蚜數(shù)量能達(dá)到11 231.7頭。然而，在低溫冷藏過程中，煙蚜繭蜂仍處于發(fā)育狀態(tài)，適量的水分供給也是必不可少的[20]。研究表明，冷藏僵蚜?xí)r，加入蘸有蒸餾水的脫脂棉球能起到較好的保濕效果，冷藏20 d后僵蚜羽化率高達(dá)90.00%;冷藏25 d后，變溫低溫處理后的僵蚜羽化率在80.00%以上;通過蕎麥殼加濕處理也能起到很好的保濕效果，冷藏20 d后僵蚜羽化率為90.33%，相關(guān)學(xué)者提出在僵蚜運(yùn)輸途中采取泡沫箱+冰袋密封儲藏也可進(jìn)行保濕，但該方法運(yùn)輸效率低、成本過高[16]具有成本低、運(yùn)輸途中能對僵蚜個體摩擦起到緩沖作用、在田間易分解等優(yōu)勢。綜合考慮，在煙蚜繭蜂僵蚜低溫冷藏時，根據(jù)僵蚜盒、僵蚜瓶或者其他釋放裝置大小加入適量蕎麥殼基質(zhì)進(jìn)行保濕效果更好，羽化率更高。

3.2 煙蚜繭蜂僵蚜產(chǎn)品低溫儲存最適溫度研究

我國早在70年代就有了對寄生蜂低溫冷藏的研究[21]。

利用低溫抑制寄生蜂生長的成功案例較多，魯新等[8]通過低溫冷藏松毛蟲赤眼蜂幼蟲，其有效冷藏期高達(dá)60 d;黃山春等[9]研究發(fā)現(xiàn)低溫下，椰心葉甲嚙小蜂冷藏14 d后仍可保持80%以上的羽化率。關(guān)于煙蚜繭蜂低溫冷藏的研究，目前多以恒溫冷藏為主，而長時的恒定低溫影響了煙蚜繭蜂體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)（糖類、脂肪、蛋白質(zhì)）的含量，使其不能正常代謝，通過適度變溫，可以有效提高煙蚜繭蜂冷藏后的羽化率和產(chǎn)卵能力[20，22]。冷藏時間的長短和冷藏溫度的高低是衡量冷藏強(qiáng)度的兩個重要指標(biāo)，一般而言，冷藏溫度越低、時間越長，死亡率越高[23-24]。因此，平衡冷藏時間和冷藏溫度，找到最佳契合點(diǎn)，是提高冷藏效果的有效方法。研究表明，與恒溫冷藏相比，適度變溫對提高冷藏后僵蚜羽化率效果明顯，通過僵蚜剝離機(jī)收集僵蚜，變溫（1～4 ℃）冷藏25 d后僵蚜羽化率為83.33%，與變溫（2～5 ℃）冷藏羽化率82.33%無顯著差異（P<0.05），但后者在冷藏過程中有部分僵蚜已開始羽化，浪費(fèi)了成蜂，從而降低了有效利用率，增加了煙蚜繭蜂僵蚜產(chǎn)品的使用成本。在同等冷藏條件下，毛筆挑取僵蚜冷藏后僵蚜羽化率顯著高于剝離機(jī)收集僵蚜羽化率（P<0.05），但人工毛筆收集僵蚜效率低，難以在規(guī)?；a(chǎn)中應(yīng)用。綜合煙蚜繭蜂僵蚜產(chǎn)品羽化率、收集效率和生產(chǎn)成本等因素，筆者認(rèn)為通過僵蚜剝離機(jī)收集僵蚜，在1～4 ℃條件下變溫冷藏，收集效率高、冷藏效果好，可在煙蚜繭蜂僵蚜產(chǎn)品的大規(guī)模應(yīng)用中推廣。

3.3 低溫儲存對煙蚜繭蜂壽命和產(chǎn)卵量的影響

如何使天敵昆蟲長時間冷藏后仍保持較高的生命力和產(chǎn)卵能力，是評價冷藏效果的重要指標(biāo)，也是天敵昆蟲低溫冷藏的最終目標(biāo)[25-26]。陳茂華等[27]的研究表明，冷藏后煙蚜繭蜂壽命在5.20～6.23 d，低溫冷藏對其壽命無明顯影響，陳文龍等[28]的研究中也指出低溫冷藏對煙蚜繭蜂壽命無顯著影響。本研究表明，變溫冷藏后，成蜂壽命在4.25～4.28 d，與未冷藏?zé)熝晾O蜂壽命4.28 d無顯著差異（P>0.05），與前人研究的冷藏后羽化出的成蜂與未冷藏成蜂壽命一致，無顯著差異。而恒溫冷藏后的成蜂壽命長與前人研究的5.20～6.23 d有差異，可能的原因是統(tǒng)計(jì)方法有所不同。

冷藏后煙蚜繭蜂的產(chǎn)卵能力直接影響放蜂效果，相關(guān)研究表明，煙蚜繭蜂產(chǎn)卵能力在羽化后第4天達(dá)到高峰期[15];闕勁松等[16]指出低溫冷藏對煙蚜繭蜂寄生力無明顯影響，冷藏后1頭雌蜂可寄生81.36～87.78頭煙蚜。本研究表明，通過變溫（1～4 ℃）冷藏處理后，1頭雌蜂可寄生99.00～103.33頭煙蚜，與未冷藏雌蜂寄生量100.67頭無顯著差異（P<0.05），與陳茂華等[27]和闕勁松等[16]研究結(jié)果有所差異，其原因在于實(shí)驗(yàn)方法、冷藏條件、地域等多重因素有關(guān)。本研究是模擬田間放蜂試驗(yàn)，試驗(yàn)條件相對較惡劣。

綜上，研究表明低溫冷藏對煙蚜繭蜂成蜂壽命和產(chǎn)卵能力無明顯影響。

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（責(zé)任編輯：趙中正）