IL-6、STAT3在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及與臨床特征的關(guān)系△

姚文娟，宋會(huì)雙，王鳳琴，于婧，吳冬梅，劉大鵬

河北中石油中心醫(yī)院1病理科,2神經(jīng)外科，河北 廊坊 065000

子宮內(nèi)膜癌是臨床常見的婦科惡性腫瘤，具有較高的發(fā)病率，近年來，隨著人們生活方式的改變及社會(huì)壓力的增加，其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，且發(fā)病人群趨于年輕化[1-2]。目前臨床對(duì)子宮內(nèi)膜癌在分子水平上的發(fā)病機(jī)制尚不明確，據(jù)較多研究顯示，其發(fā)生與發(fā)展是多種因素共同參與導(dǎo)致的結(jié)果，涉及多種抑癌基因的失活及癌基因的激活。同時(shí)炎癥與腫瘤的發(fā)生存在密切關(guān)系，大量研究顯示，在富含趨化因子、炎性細(xì)胞、促DNA損傷物質(zhì)的炎性環(huán)境中可引發(fā)腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[3-5]。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子（signal transducer and activator of transcription，STAT）是一種具備高度同源性的轉(zhuǎn)錄因子，能夠介導(dǎo)多種生長因子和細(xì)胞因子的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞核，對(duì)靶基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生影響，能夠調(diào)控細(xì)胞的功能，與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展以及腫瘤細(xì)胞的凋亡具有密切相關(guān)性[6]。STAT3是STAT的重要成員，是一種被公認(rèn)的癌基因。子宮內(nèi)膜癌的高危因素，如高齡、多囊卵巢綜合征、肥胖、糖尿病等可使白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和腫瘤壞死因子表達(dá)增加，這些炎性介質(zhì)在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。本研究主要探討IL-6、STAT3在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)情況，并分析其與臨床特征的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2013年8月至2018年8月于河北中石油中心醫(yī)院接受手術(shù)治療的82例子宮內(nèi)膜癌患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理檢查確診為子宮內(nèi)膜癌；②未接受放化療治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴其他惡性腫瘤；②伴感染性疾病。82例子宮內(nèi)膜癌患者中，年齡34～72歲，平均年齡（57.82±7.13）歲；腫瘤大小0.7～5.8 cm，平均（2.76±0.32）cm。選取子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本為觀察組，癌旁正常子宮內(nèi)膜組織（距腫瘤2 cm）標(biāo)本為對(duì)照組。本研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且所有患者均自愿參與本研究，并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

應(yīng)用免疫熒光組化法檢測兩組子宮內(nèi)膜組織中IL-6、STAT3的表達(dá)情況：兔抗人IL-6單克隆抗體（稀釋濃度為1∶100）購自上海明睿生物技術(shù)有限公司，兔抗人STAT3多克隆抗體（稀釋濃度為1∶150）購自美國Ventana公司。將子宮內(nèi)膜組織應(yīng)用4%甲醛溶液固定，石蠟包埋，4 μm厚切片，染色采用EnVision二步法，將組織切片置于65℃溫度下烘烤12 h，然后脫蠟、水化切片，應(yīng)用3%過氧化氫對(duì)內(nèi)源性過氧化物酶進(jìn)行滅活，加入一抗放置在濕盒中，在4℃的環(huán)境下孵育過夜，然后加入二抗，在37℃恒溫箱中孵育30 min，將辣根過氧化物酶應(yīng)用鏈霉親和素標(biāo)記，并置于37℃環(huán)境下孵育10 min。每張組織切片上滴加50 μl二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色劑，在光學(xué)顯微鏡下顯色3～5 min，適時(shí)應(yīng)用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗以終止顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠進(jìn)行封固。

1.3 陽性判斷

IL-6、STAT3均以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，應(yīng)用半定量積分法，對(duì)每個(gè)視野陽性細(xì)胞著色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞所占百分比分別計(jì)分。著色強(qiáng)度：未著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色或褐色為3分；陽性細(xì)胞所占百分比：＞50%為3分，26%～50%為2分，2%～25%為1分，≤1%為0分。陽性細(xì)胞所占百分比計(jì)分+陽性細(xì)胞著色強(qiáng)度計(jì)分＞3分則判斷為陽性[7-8]。

1.4 觀察指標(biāo)

檢測兩組組織中IL-6、STAT3的表達(dá)情況，分析IL-6、STAT3與子宮內(nèi)膜癌患者臨床特征的關(guān)系，并分析IL-6、STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）的表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IL-6、STAT3表達(dá)情況的比較

觀察組子宮內(nèi)膜組織中IL-6、STAT3陽性表達(dá)率分別為 59.76%（49/82）、63.41%（52/82），均明顯高于對(duì)照組的6.10%（5/82）、10.98%（9/82），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=53.452、48.263，P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征的子宮內(nèi)膜癌患者的子宮內(nèi)膜癌組織中IL-6、STAT3陽性表達(dá)情況的比較

國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)為G2～3級(jí)的子宮內(nèi)膜癌患者的子宮內(nèi)膜癌組織中IL-6陽性表達(dá)率分別明顯高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級(jí)為G1級(jí)的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.530、11.078、12.584，P＜0.01）；FIGO 分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)為G2～3級(jí)的子宮內(nèi)膜癌患者的子宮內(nèi)膜癌組織中STAT3陽性表達(dá)率分別明顯高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級(jí)為G1級(jí)的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=12.373、12.323、14.267，P＜0.01）。（表1）

表1 不同臨床特征的子宮內(nèi)膜癌患者的子宮內(nèi)膜癌組織中的IL-6、STAT3陽性表達(dá)情況（n=82）

2.3 IL-6、STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

經(jīng)相關(guān)性分析顯示，IL-6與STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.657，P＜0.05）。

3 討論

Virchow最初在1863年提出腫瘤的發(fā)生與炎性反應(yīng)存在密切聯(lián)系，其在腫瘤組織中檢測到了白細(xì)胞，并發(fā)現(xiàn)了約有15%的惡性腫瘤患者因感染而死亡，例如由人乳頭狀瘤病毒長期感染引發(fā)的宮頸癌、慢性乙型肝炎感染久治不愈可發(fā)展為肝癌等[9-10]。IL-6是目前發(fā)現(xiàn)的功能較為廣泛的細(xì)胞因子之一，其參與血細(xì)胞生成，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，并參與多種細(xì)胞的分化及增殖。起初臨床學(xué)者對(duì)于IL-6的研究只是將其作為一種炎性因子，后來越來越多的研究發(fā)現(xiàn)其與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展以及腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵襲具有密切相關(guān)性，同時(shí)還與較多惡性腫瘤的預(yù)后有關(guān)[11]。STAT3是一種存在于細(xì)胞質(zhì)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，其激活后能夠與DNA相結(jié)合，進(jìn)而與酪氨酸磷酸化的信號(hào)通路相互偶聯(lián)，對(duì)細(xì)胞凋亡、分化、增殖、免疫調(diào)節(jié)等多種相關(guān)功能蛋白的表達(dá)具有調(diào)控作用[12-14]。STAT3是STAT家族中與腫瘤發(fā)生與發(fā)展關(guān)系最密切的成員，其在多種腫瘤組織中均被激活，如卵巢癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌等[15]。

在本研究中對(duì)IL-6及STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織及正常子宮內(nèi)膜組織中的陽性表達(dá)情況分析顯示，觀察組患者子宮內(nèi)膜癌組織中IL-6、STAT3陽性表達(dá)率均明顯高于對(duì)照組，說明IL-6、STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)水平高于健康內(nèi)膜組織。在本研究中對(duì)IL-6及STAT3與子宮內(nèi)膜癌患者臨床特征的關(guān)系分析中顯示，F(xiàn)IGO分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)為G2～3級(jí)的子宮內(nèi)膜癌患者的子宮內(nèi)膜癌組織中IL-6、STAT3陽性表達(dá)率分別明顯高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級(jí)為G1級(jí)的患者，說明IL-6、STAT3陽性表達(dá)情況與子宮內(nèi)膜癌患者FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移，分析其原因主要是因?yàn)镮L-6能夠通過胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）/核因子-κB（nuclear factor of kappa-B，NF-κB）信號(hào)通路對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖與生長發(fā)揮促進(jìn)作用，同時(shí)炎性細(xì)胞對(duì)局部活性氧簇及活性氮簇的產(chǎn)生具有促進(jìn)作用，導(dǎo)致細(xì)胞DNA受損，極易導(dǎo)致細(xì)胞異常突變，如中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等炎性細(xì)胞均能夠介導(dǎo)氮簇、氧簇、白細(xì)胞介素、干擾素等炎性反應(yīng)過程，對(duì)腫瘤的侵襲及生長均具有影響，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。STAT3已經(jīng)被認(rèn)為是一種癌基因，其激活后能夠誘導(dǎo)某些與細(xì)胞分化、增殖、凋亡密切聯(lián)系的關(guān)鍵基因出現(xiàn)異常表達(dá)，能夠通過多種途徑對(duì)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化、增殖發(fā)揮促進(jìn)作用，對(duì)細(xì)胞凋亡發(fā)揮抑制作用，且隨著其陽性表達(dá)的升高，會(huì)促進(jìn)腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移。在本研究中對(duì)IL-6、STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析中顯示，IL-6與STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)，分析其原因主要是因?yàn)镮L-6能夠通過gp130激活STAT3，然后進(jìn)一步促進(jìn)抗凋亡蛋白B細(xì)胞淋巴瘤-XL（B cell lymphoma-XL，Bcl-XL）的表達(dá)，進(jìn)而刺激腫瘤細(xì)胞的生長，使病情進(jìn)一步惡化，因此IL-6的陽性表達(dá)對(duì)STAT3的表達(dá)具有促進(jìn)作用。

綜上所述，IL-6、STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率明顯升高，且與腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移存在一定的關(guān)系，對(duì)臨床診斷與治療子宮內(nèi)膜癌具有較高的臨床價(jià)值。