黑參國內(nèi)外研究進展

陳 林，郭建鵬 *

（1.延邊大學(xué)藥學(xué)院，延吉133002；2.長白山生物資源與功能分子教育部重點實驗室（延邊大學(xué)），延吉133002）

黑參為五加科植物人參 （Panax ginseng C.A.Mey）經(jīng)九蒸九曝、反復(fù)蒸制烘干炮制得到的一種新型人參炮制品[1～2]。人參作為吉林省地理標(biāo)志性產(chǎn)品[3]，近年來在國內(nèi)外健康產(chǎn)品市場上受到重視，多種人參炮制品成為功能食品的主要原料[4～5]。人參炮制品目前主要有生曬參、紅參、大力參、活性參、糖參和蜜制參等，且相應(yīng)的分等質(zhì)量及皂苷類成分含量測定均有標(biāo)準(zhǔn)[6～13]。黑參作為人參的一種新炮制品，國內(nèi)外對其標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)研究鮮有報道。現(xiàn)查閱相關(guān)文獻，將國內(nèi)外對黑參的炮制工藝、化學(xué)成分、藥理作用及檢測方法進行總結(jié)，為黑參的標(biāo)準(zhǔn)修訂和黑參的進一步開發(fā)研究以及其相關(guān)產(chǎn)品的研究提供理論依據(jù)。

1 炮制工藝

目前為止，國內(nèi)外尚無公認(rèn)的黑參炮制工藝規(guī)范，不同的研究者采用了不同的炮制工藝。黑參最廣泛采用的炮制工藝是傳統(tǒng)中藥材的制作方法之一“九蒸九曝”，將鮮人參用蒸汽或其他方法進行蒸煮后晾干 （在98℃下蒸制 2～3 h，然后曝干），反復(fù)進行9次。蒸制過程中的溫度和壓力是影響黑參品質(zhì)的重要因素。袁媛等[14]采用超高效液相色譜法分析黑參制作過程中人參皂苷的含量變化，發(fā)現(xiàn)黑參在不同蒸制溫度、蒸制次數(shù)下非極性成分逐漸增多，極性成分逐漸減少。黑參中的有效成分會因為加工方法的不同而有所轉(zhuǎn)變。Ban等[15]采用響應(yīng)面法優(yōu)化黑參的炮制工藝，得出黑參最佳蒸制溫度是113.04℃、蒸制18 h、干燥溫度為100℃、干燥8.03 h，這種炮制方法可增加酸性多糖與人參皂苷Rg3含量，減少苯并芘的含量。Sun等[16]將白參在98℃蒸制3 h相同條件重復(fù)9次，發(fā)現(xiàn)此炮制方法可增加低極性人參皂苷含量。Lee等[17]將人參在120℃下蒸制3次，每次0.5 h，然后將蒸制過的人參在葡萄酒中浸泡24 h，此炮制方法可增加稀有人參皂苷Rg3含量。Jo等[18]研究表明，黑參最適蒸制溫度是80～120℃，干燥溫度低于50℃，并且對黑參制作過程中苯并芘的安全含量進行研究，研究發(fā)現(xiàn)干燥溫度會影響苯并芘的含量。劉沖[19]先用納豆菌對人參進行發(fā)酵，發(fā)酵完成后對發(fā)酵參在高壓蒸制下連續(xù)循環(huán)5次，得到黑參，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與白參相比黑參中稀有人參皂苷Rg2、Rg3、Rg6、Rh1含量明顯增加。張雪倫[20]將干燥好的人參浸潤在大蒜汁中12 h，放在壓力蒸汽滅菌器中高溫高壓蒸制2 h，減壓干燥，在40℃下干燥12 h，得到復(fù)方黑參，結(jié)果表明該復(fù)方黑參中稀有人參苷 Rh1、Rg3、Rh2及達瑪烷苷元 PPT、PPD含量較高。

2 化學(xué)成分

2.1 皂苷類

目前對黑參化學(xué)成分的研究多集中在皂苷類，且多為三萜類皂苷。按苷元的結(jié)構(gòu)分為三類：一為原人參二醇類，主要有人參皂苷 Rb1、Rc、Rh2、Rg3；二為原人參三醇類，主要有人參皂苷 Re、Rf、Rg1；三為齊墩果酸型，主要有人參皂苷Rh3等。Kim認(rèn)為黑參中主要人參皂苷為 Rg3、Rh2、Rh1[21]。 但 Seo認(rèn)為 Rg3、Rk1、Rg5才是黑參主要成分[22]。人參在炮制過程中反復(fù)蒸曝導(dǎo)致常規(guī)皂苷成分被轉(zhuǎn)化[23]，致使黑參中的人參皂苷大部分轉(zhuǎn)化為稀有皂苷。Bai-Shen Su[24]檢測到黑參中有19種人參皂苷，發(fā)現(xiàn)其中RF4、Rg6、RF4、Rg6、Rk3、Rh4、20（S）-Rg3、20（R）-Rg3、20（S）-Rs3、20 （R）-Rs3、Rk1、Rg5、Rs4 和 Rs5 都是稀有人參皂苷。由于稀有皂苷含量增加，同傳統(tǒng)的白參和紅參相比，黑參有可能具有更強的抗腫瘤、抗炎、抗氧化、降低血糖等活性[23]。

2.2 多糖類

多糖作為生命體的主要能源物質(zhì)，參與各種生命活動。目前國內(nèi)外對黑參多糖的研究較少，而對其他人參類多糖的研究相對較多。目前研究大多是根據(jù)人參多糖或者人參其他炮制品多糖來研究黑參多糖的成分。人參中含有38%的水溶性多糖和8%～10%的堿性多糖，主要含有葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸及半乳糖、少量鼠李糖和部分未知的戊糖衍生物等[25]。而黑參受溫度等其它因素的影響，其多糖含量和種類也會發(fā)生顯著變化。喬雪[26]對黑參多糖的總含量進行測定，發(fā)現(xiàn)黑參總糖含量比紅參中的總糖含量少，而紅參中總糖的含量比人參中總糖含量少。雖然黑參中的總糖含量有所降低，但是糖類仍然是黑參中主要的有效成分或輔助成分，具有增強免疫力、抗衰老、抗氧化等作用[27]。目前對黑參多糖的研究主要集中在含量測定方面，對黑參多糖的具體成分分析還有待深入。

2.3 其他成分

黑參的化學(xué)成分除了皂苷、多糖類外，還含有揮發(fā)油、氨基酸、有機酸及酯類、含氮化合物、甾醇及其苷類、維生素類、黃酮類、微量元素等其他成分，但目前對其報道相對較少。由于炮制方法不同，與紅參相比黑參中的某些化學(xué)成分減少，如微量元素僅有18種，其含量順序為Mo

3 藥理作用

3.1 抗腫瘤作用

黑參中具有的抗腫瘤活性的成分多為人參次苷及苷元，目前研究最多的是Rg3、Rh2、Rh1及其苷元，其在促進機體抗腫瘤免疫方面起著顯著作用。Zhang等[28]研究表明，人參皂苷 Rg3聯(lián)合恩度（Endostar，EN）對乳腺癌（Breast carcinoma，BC）有更好的治療效果。Liu 等[29]研究表明，20（S）-Rh2 對前列腺癌細(xì)胞有抑制作用。廖丹瓊等[30]分別用MTT法和BrdU免疫熒光法檢測人參皂苷Rg3對C6膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞增殖的影響，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg3對腦膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用。黑參的抗腫瘤作用主要是通過其皂苷成分抑制腫瘤血管生成、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化、降低腫瘤細(xì)胞侵襲能力等途徑來實現(xiàn)[30]。

3.2 增強免疫作用

黑參中較多化學(xué)成分均有增強免疫作用，如皂苷、多糖等。有研究報道黑參提取物能增加IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10 和 TNF-α 的數(shù)量及 NK 細(xì)胞活性，減少由LPS引起的iNOS、COX-1和COX-2的表達，從而起到提高機體免疫的作用[22]。張才軍等[31]研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rhl作用于免疫功能低下的小鼠后，各劑量組小鼠的脾和胸腺指數(shù)、MФ吞噬功能、T淋巴細(xì)胞增殖作用均明顯提高。宋利華等[32]對不同酸性的人參多糖進行分級，發(fā)現(xiàn)了各個級別的人參多糖能不同程度的促進小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖，提高機體免疫功能。史得君等[33]研究了黑參對昆明種雄性小鼠的抗疲勞作用。研究表明，黑參延長了小鼠爬桿時間，增加了小鼠肝糖原含量等，產(chǎn)生了顯著的抗疲勞效果。

3.3 抗血栓作用

黑參中某些特有化學(xué)成分具有改善血液流變學(xué)、抑制血栓形成、改善微循環(huán)和抗凝血等作用。如李世征等[34]觀察黑參對急性血瘀模型大鼠血液流變性和實驗性血栓形成以及小鼠出凝血時間和耳廓微循環(huán)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黑參能夠抑制血栓形成，改善血液流變學(xué)，其機制可能是通過內(nèi)源性凝血途徑、外源性凝血途徑、凝血共同途徑以及降低血漿中纖維蛋白原的含量來抑制血液的凝固，從而達到抗血栓的效果。

3.4 其他作用

除此之外，黑參中其他特有的化學(xué)物質(zhì)也具有多種藥理活性，如抗炎、抗應(yīng)激、抗氧化和神經(jīng)保護等[35～36]作用。Lee等[37]研究發(fā)現(xiàn)黑參通過抗氧化作用能抑制乙醇引起的胚胎畸形。還有研究表明黑參中的人參皂苷Rg3、Rg5、Rk1通過抑制膽堿酯酶，可修復(fù)由乙醇引起的記憶損傷，起到神經(jīng)保護的作用，用來治療阿爾茨海默氏癥[38]。張晶等[39]研究發(fā)現(xiàn) 20（R）-人參皂苷Rg3、20（S）-人參皂苷 Rg3、人參皂苷 Rg5 和 Rk1 能提高小鼠的認(rèn)知能力，具有益智活性。Kim等[40]發(fā)現(xiàn)黑參提取物有比較多的生物活性，服用黑參提取物可以顯著降低血糖，可以用來開發(fā)治療糖尿病的新藥。高戎等[41]認(rèn)為人參皂苷Rg5可以改善膿毒癥引起急性肝損傷時的炎癥，發(fā)揮肺保護作用。目前針對黑參藥理作用的研究多集中在藥效學(xué)范疇，對于黑參中特定的功能分子及其作用機理還有待于深入挖掘。

4 檢測方法

近年來，黑參中皂苷類成分的分析檢測方法發(fā)展迅速， 如 TLC、HPLC-UV、HPLC-ELSD、HPLC-MS 等均有報道。有研究表明，有些結(jié)構(gòu)相似的或紫外吸收差的人參皂苷，不適用于HPLC-UV法[42～44]。與之相比，HPLC-ELSD法只與溶質(zhì)濃度有關(guān)而與光學(xué)性質(zhì)無關(guān)，可以用于各種人參制品中人參皂苷的檢測[45]。孫佰申等[1]采用HPLC-ELSD對“九蒸九曝”法炮制前后樣品中皂苷單體含量進行比較分析，同時測定了7個極性和12個非極性皂苷單體含量。結(jié)果表明，與白參相比，黑參中非極性皂苷和奧克梯隆型（Ocotillol type）皂苷顯著增加，而極性皂苷顯著減少。Fuzzati等[46]用HPLC-ELSD法檢測出亞洲人參中25種人參皂苷，而Sun等[47]認(rèn)為Fuzzati等人對黑參中一些極性低的皂苷成分沒有檢測到，他們加以改正，同時測定了黑參中19個人參皂苷成分。目前對于黑參中皂苷類成分檢測方法較完善，而對于其他活性成分的檢測方法還有待于進一步探討。

5 結(jié)語與展望

通過對黑參的炮制工藝、化學(xué)成分、藥理作用及檢測方法等方面的綜述，發(fā)現(xiàn)在該領(lǐng)域尚存在一些問題。a.黑參的原料、炮制工藝等尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，亟待建立；b.對黑參中稀有人參皂苷的體內(nèi)代謝研究匱乏，已有研究尚無法闡明其皂苷在體內(nèi)完整代謝的過程及作用機制；c.對黑參除皂苷外其他化學(xué)成分和標(biāo)志性成分的研究還不夠全面，缺乏對檢測分析方法的深入探討；d.以活性成分為依據(jù)的黑參質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)鮮有研究。

作者在對吉林省“延邊黑參”進行研究的過程中（延邊黑參是以吉林人參為原料，以傳統(tǒng)“九蒸九曝”炮制工藝制得，通體色澤烏黑、質(zhì)地堅韌），發(fā)現(xiàn)延邊黑參富含人參皂苷Rg3，含量超過吉林省地標(biāo)的2倍以上[2]。在對延邊黑參中標(biāo)志成分稀有皂苷Rg5、Rk1進行含量測定時，考察了超聲法、回流法、藥典人參提取方法3種樣品前處理方法，結(jié)果表明以超聲法作為前處理法，樣品中待測成分含量最高且前處理時間最短，此結(jié)果可為黑參地方標(biāo)準(zhǔn)修訂提供理論依據(jù)。

應(yīng)加強黑參的炮制工藝、化學(xué)成分和藥理作用等方面的探索研究，將幾方面的研究結(jié)果系統(tǒng)化，建立完整的質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)。該質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)與主要藥效相關(guān)，從藥效出發(fā)，選擇對應(yīng)的活性成分作為指標(biāo)，圍繞活性成分的組成和含量制訂多指標(biāo)體系?？山Y(jié)合中醫(yī)的“五色五形”理論（黑色能入腎經(jīng)，益腎、強腎，故黑參可能具有補腎、壯腎之功效），重點開展黑參對腎病的藥理作用研究。此外，還應(yīng)將黑參與鮮參、白參、紅參等五加科人參屬的植物進行化學(xué)成分、藥理活性等的橫向?qū)Ρ龋瑸檫M一步研究及開發(fā)黑參及其相關(guān)人參產(chǎn)品提供理論依據(jù)。