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    膜融合的研究進(jìn)展及其在藥物運(yùn)輸方面的應(yīng)用

    2019-12-20 09:41:56蘇瑩瑩李春艷李迪
    分析化學(xué) 2019年12期
    關(guān)鍵詞:融合研究

    蘇瑩瑩 李春艷 李迪

    摘?要?膜融合對(duì)于生物體的生命活動(dòng)具有重要的調(diào)控作用。細(xì)胞內(nèi)的膜融合在生物體的整個(gè)生命周期中發(fā)揮了促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)的作用,病毒和細(xì)胞膜的融合可能標(biāo)志著生物體生命的終結(jié)。然而,由于活細(xì)胞的復(fù)雜性,對(duì)細(xì)胞內(nèi)膜融合過(guò)程的認(rèn)識(shí)僅局限于少數(shù)細(xì)胞膜上的蛋白結(jié)構(gòu),如可溶性N-乙基馬來(lái)酰亞胺敏感性因子附著型的蛋白受體(Soluble N-ethyl maleimide sensitive factor attachment protein receptors,SNARE)及其在促進(jìn)膜融合中的作用。為更好地研究膜融合的機(jī)理,常用相關(guān)人工模型系統(tǒng)模擬生物膜融合。本文對(duì)SNARE促進(jìn)膜融合的機(jī)理、DNA及卷曲螺旋多肽介導(dǎo)的膜融合研究進(jìn)展,以及膜融合在藥物運(yùn)輸?shù)确矫娴膽?yīng)用進(jìn)行了概述。

    關(guān)鍵詞?膜融合; N-乙基馬來(lái)酰亞胺敏感性因子附著型的蛋白受體; DNA; 評(píng)述

    1?引 言

    生物膜融合是一種常見(jiàn)的細(xì)胞生理現(xiàn)象,對(duì)調(diào)控生物分子的運(yùn)輸、攝取及釋放具有至關(guān)重要的作用[1],如膜融合調(diào)控神經(jīng)元之間的信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程、細(xì)胞內(nèi)的胞吞和胞吐過(guò)程[2]、病毒轉(zhuǎn)染[3]和囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。生物膜上的蛋白和其它生物大分子之間的靜電斥力使生物體內(nèi)生物膜之間的距離在10~20 nm之間。因此,膜融合的第一步是拉近生物膜之間距離至幾個(gè)納米。膜的緊密接觸伴隨著磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)的局部破壞,導(dǎo)致柄狀結(jié)構(gòu)的形成。在莖的中間部分,距離較近的脂質(zhì)雙層膜的外膜首先發(fā)生融合。通常認(rèn)為,莖可擴(kuò)張成半融合隔膜,其內(nèi)層脂質(zhì)是分開(kāi)的。在最終的脂質(zhì)重排過(guò)程中,半融合柄或者隔膜形成一個(gè)小孔,隨著融合的進(jìn)行,這兩個(gè)小孔逐漸增大,使最初的兩個(gè)脂室變成一個(gè),并將各室所包含的物質(zhì)混合在一起,完成融合過(guò)程,如圖1A所示[4]。盡管細(xì)胞內(nèi)的膜融合和病毒融合的蛋白質(zhì)機(jī)制有很大的不同,但在融合過(guò)程中發(fā)生的脂質(zhì)雙層間的物理變化是相似的。一般認(rèn)為真核細(xì)胞中的膜融合是由可溶性N-乙基馬來(lái)酰亞胺敏感性因子附著型的蛋白受體(Soluble N-ethyl maleimide sensitive factor attachment protein receptors,SNARE)控制。膜融合的大部分?jǐn)?shù)據(jù)是基于SNARE蛋白研究獲取的[5,6]。膜融合過(guò)程發(fā)生之前,膜上的兩組蛋白分別由兩個(gè)卷曲螺旋區(qū)域組成,相互作用形成具有四螺旋結(jié)構(gòu)的SNARE復(fù)合物,如圖1B所示。SNARE蛋白在膜融合過(guò)程中所起作用可由兩種機(jī)理解釋:蛋白將兩個(gè)磷脂層拉在一起,促進(jìn)半融合及全融合過(guò)程,如圖1A(a); 另一種,SNARE先分別在單邊的跨膜區(qū)域形成融合孔,當(dāng)融合孔擴(kuò)大后,跨膜區(qū)域會(huì)分開(kāi),磷脂參與融合孔中,繼而發(fā)生融合,如圖1A(b)。研究表明,SNARE復(fù)合物可將兩個(gè)分子膜拉近至2~3 nm[7]。

    研究膜融合的主要方法有以下兩種: 第一種方法是使用已知的融合蛋白。這些蛋白可在體外進(jìn)行表達(dá),也可用于體內(nèi)的融合系統(tǒng)。由于體內(nèi)系統(tǒng)中有很多蛋白參與此過(guò)程,所以在體內(nèi)很難將某種蛋白的影響進(jìn)行獨(dú)立研究。此外,由于生物體內(nèi)部組成的復(fù)雜性,體內(nèi)的脂質(zhì)重組研究也常會(huì)得到對(duì)立的結(jié)果。如生物體內(nèi)常存在密度不均勻的蛋白質(zhì)及大小不均勻的脂質(zhì)體等,這些都會(huì)導(dǎo)致不穩(wěn)定融合事件的發(fā)生。第二種方法通過(guò)合成觸發(fā)膜融合的類似物,深入了解蛋白質(zhì)誘導(dǎo)的膜融合的發(fā)生機(jī)制。常見(jiàn)的膜融合類似物包括源于自然蛋白的膜融合肽及利用互補(bǔ)的DNA鏈。在膜融合肽誘導(dǎo)的膜融合過(guò)程中,多肽在脂質(zhì)雙層中以螺旋結(jié)構(gòu)存在,導(dǎo)致脂質(zhì)膜不穩(wěn)定,促使其發(fā)生融合。如病毒和細(xì)胞的融合(圖1C)[4],兩種融合膜之間沒(méi)有特異性識(shí)別分子,只是融合肽和磷脂膜之間的相互作用即可促進(jìn)膜的融合。而DNA鏈誘導(dǎo)的膜融合則是通過(guò)錨定在不同脂質(zhì)膜上的DNA堿基互補(bǔ)配對(duì)促進(jìn)膜融合。DNA分子鏈具有高度選擇性且易于合成的優(yōu)點(diǎn),DNA納米技術(shù)具有可編程性,將膜融合和DNA相結(jié)合,拓寬了膜融合的研究領(lǐng)域。Hook等曾通過(guò)對(duì)DNA鏈進(jìn)行膽固醇功能化修飾,將DNA鏈輕易地嵌入磷脂雙分子層中,然后利用互補(bǔ)的DNA分子鏈之間的雜交反應(yīng)將兩個(gè)脂質(zhì)膜結(jié)合在一起[8]。

    2?SNARE促進(jìn)膜融合的機(jī)理研究

    在生物學(xué)上,融合蛋白作為促進(jìn)膜融合的催化劑可幫助兩個(gè)生物膜克服融合過(guò)程中生物膜之間的排斥力,進(jìn)而促進(jìn)膜融合[8]。常見(jiàn)的融合蛋白有SNARE蛋白及病毒融合蛋白[9]。SNARE蛋白是一類生物膜上細(xì)胞間特異性和細(xì)胞質(zhì)靶向蛋白的總稱,SNARE假說(shuō)認(rèn)為SNARE蛋白由囊泡(v-)SNARE、目標(biāo)(t-)SNARE、N-乙基順丁烯二酰亞胺敏感性的融合蛋白(N-ethylmaleimide-sensitive factor,NSF)和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的可溶性NSF附著蛋白(Soluble NSF attachment protein,SNAP)組成。即使在NSF和SNAP不存在的情況下,囊泡(v-)和目標(biāo)(t-)SNAREs也會(huì)形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)[11]。囊泡融合是最早發(fā)現(xiàn)的SNARE介導(dǎo)的一類膜融合,在融合過(guò)程中,SNARE蛋白的復(fù)合結(jié)構(gòu)可誘導(dǎo)后續(xù)的膜融合,SNARE蛋白由疏水的碳末端跨膜域和水溶性的N端區(qū)域組成。在識(shí)別過(guò)程中,最初未結(jié)構(gòu)化的SNARE模體自組裝成四螺旋束,這種四螺旋束能被特定的蛋白解離。通常,螺旋束從氮末端開(kāi)始形成,之后像拉鏈一樣向跨膜區(qū)移動(dòng),這種移動(dòng)過(guò)程會(huì)對(duì)脂質(zhì)膜產(chǎn)生壓力,促進(jìn)融合孔的生成,繼而發(fā)生膜融合。病毒融合蛋白對(duì)于病毒進(jìn)入細(xì)胞的過(guò)程起重要作用。病毒入侵細(xì)胞的過(guò)程,首先是包裹在病毒周圍的融合多肽先嵌入宿主細(xì)胞的細(xì)胞膜,使融合蛋白的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,繼而推動(dòng)兩個(gè)生物膜發(fā)生融合。融合多肽也可通過(guò)擾動(dòng)宿主細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)促進(jìn)膜融合,這與SNARE蛋白的組成幾乎相似,即融合蛋白產(chǎn)生一個(gè)內(nèi)在的力,推動(dòng)兩個(gè)生物膜發(fā)生接觸,最后導(dǎo)致膜融合。

    此外,研究發(fā)現(xiàn),具有卷曲螺旋序列的SNARE模體,可通過(guò)相互之間的平行作用形成SNARE復(fù)合結(jié)構(gòu),如圖2所示[12,13]。這種復(fù)合結(jié)構(gòu)緊鄰跨膜區(qū),表明SNARE復(fù)合結(jié)構(gòu)的自組裝可將突出囊泡和脂質(zhì)體膜結(jié)合在一起,SNARE復(fù)合結(jié)構(gòu)可提供膜融合所需能量。隨后,神經(jīng)元的SNARE結(jié)構(gòu)被證實(shí)是由4個(gè)平行的α-螺旋組成,2個(gè)來(lái)自SNAP-25,另外2個(gè)分別來(lái)自突出融合蛋白和突觸泡蛋白,不同膜上SNAREs蛋白的表征顯示SNARE結(jié)構(gòu)具有相似的四螺旋柱狀結(jié)構(gòu)。

    3?天然膜融合蛋白類似物促進(jìn)膜融合的研究

    3.1?通過(guò)DNA修飾的脂質(zhì)體研究膜融合過(guò)程

    生物膜融合由SNARE家族蛋白嚴(yán)格調(diào)控,轉(zhuǎn)運(yùn)小泡和目標(biāo)蛋白分子間通過(guò)特異性識(shí)別發(fā)生相互作用,生成SNARE蛋白復(fù)合物,促使組成細(xì)胞膜的磷脂進(jìn)行重組,使相鄰的脂質(zhì)層發(fā)生融合。受SNARE促進(jìn)膜融合機(jī)理的啟發(fā),Stengel等[8]利用膽固醇修飾的DNA鏈模擬這種識(shí)別過(guò)程,如圖3A所示,疏水端的膽固醇可自發(fā)地嵌入磷脂層,并作為DNA嵌入磷脂層的錨定端,這種膽固醇修飾的DNA鏈具有定向性,使雜交發(fā)生在鏈?zhǔn)絽^(qū),具有互補(bǔ)序列的DNA鏈修飾的囊泡被拉近,進(jìn)而促進(jìn)膜融合。研究發(fā)現(xiàn),嵌入膜內(nèi)的DNA鏈的數(shù)量對(duì)膜融合的速率有很大影響?;旌狭字哂休^高的融合效率和融合速率。 Beales等[14]的研究表明,DNA作為可促進(jìn)膜融合的配受體對(duì),其螺旋的穩(wěn)定性受內(nèi)膜的表面張力調(diào)控,并且脂質(zhì)組成對(duì)嵌入脂質(zhì)體表面的互補(bǔ)DNA的融合溫度有很大影響。

    2009年,Chan等[15]研究了不同DNA鏈的序列對(duì)DNA介導(dǎo)的膜融合的影響,通過(guò)在DNA鏈的不同端修飾磷脂,嵌入脂質(zhì)層之后的互補(bǔ)DNA可形成反向平行雜交,這種雜交方式可拉近兩個(gè)膜。然而,在2007年,他們?cè)趩蝹€(gè)囊泡與基底脂質(zhì)層融合的實(shí)驗(yàn)中觀察到,由磷脂修飾的DNA介導(dǎo)的膜融合過(guò)程中,70%的膜融合處于半融合狀態(tài),只有5%的融合處于全融合狀態(tài),如圖3B所示[16]。他們認(rèn)為,這可能是錨定在磷脂膜的DNA的甘油醚只插入了磷脂層的一半,半融合后,磷脂修飾的DNA在目標(biāo)膜中處于自由擴(kuò)散的狀態(tài)從而遠(yuǎn)離脂質(zhì)體。為了驗(yàn)證這個(gè)猜想,他們引入茄尼醇修飾的DNA,茄尼醇是一類C45的類戊二烯醇,當(dāng)茄尼醇只存在于發(fā)生融合的其中一個(gè)囊泡或者兩者都有時(shí),膜融合的速率提高了2~3倍,這些結(jié)果表明跨膜的錨定基團(tuán)可提高膜融合的效率。

    磷脂修飾的DNA鏈不僅能誘導(dǎo)膜融合,而且可輔助SNARE介導(dǎo)膜融合。2015年,Xu等[17]利用磷脂修飾的DNA實(shí)時(shí)調(diào)控SNARE在膜融合中的作用。磷脂修飾的DNA鏈由21個(gè)堿基對(duì)組成,將其嵌在膜遠(yuǎn)端,通過(guò)堿基之間特異性互補(bǔ)雜交可將兩個(gè)脂質(zhì)體橋連在一起,嵌入在膜近端的一條鏈用于控制脂質(zhì)體之間的間隔距離。利用DNA的互補(bǔ)配對(duì)拉近膜距離的同時(shí),t-SNARE和v-SNARE隨著距離的拉近發(fā)生相互作用,從而形成SNARE復(fù)合物,當(dāng)DNA的堿基數(shù)低于40時(shí),可得到最大融合效率。作為一種操縱本地蛋白程序化的工具,磷脂修飾的DNA可用于調(diào)控其它生物過(guò)程。2018年,Sun等[18]利用DNA編程介導(dǎo)的膜融合策略,發(fā)展了向活細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有效遞送蛋白質(zhì)的方法。

    在DNA介導(dǎo)的單個(gè)融合事件的研究手段成熟之后,Loffler等[19]利用DNA的可編程性研究了膜融合的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。磷脂修飾的DNA介導(dǎo)的膜融合為自上而下地構(gòu)建納米反應(yīng)器提供了一個(gè)模板。DNA介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)膜融合所需溫度低至50℃,這對(duì)于研究在脂質(zhì)體限域的水相反應(yīng)中調(diào)控水的活性對(duì)反應(yīng)的影響有極大的應(yīng)用潛能。有效的程序融合可促進(jìn)新的自下而上合成生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,如多成分人工細(xì)胞系統(tǒng)技術(shù)。這種具有靶向細(xì)胞膜特定位點(diǎn)脂質(zhì)體的融合技術(shù)在藥物靶向及基因傳遞方面有重要的應(yīng)用前景。

    隨著DNA技術(shù)的發(fā)展,DNA納米結(jié)構(gòu)在細(xì)胞膜上的自組裝已成為一個(gè)強(qiáng)有力的研究工具[20]。與天然的生物膜相比,合成的磷脂膜結(jié)構(gòu)比較簡(jiǎn)單,更利于模型構(gòu)建[21]。2017年,Peng等[22]在模擬細(xì)胞微環(huán)境的脂質(zhì)體膜上,實(shí)現(xiàn)了DNA納米柱的自組裝及自組裝的解離的過(guò)程。具有DNA手臂鏈的三維DNA納米柱可通過(guò)膽固醇修飾固定在膜表面。通過(guò)DNA鏈之間的雜交及腳手鏈介導(dǎo)的鏈置換可有效地調(diào)控DNA納米柱的自組裝。

    3.2?利用卷曲螺旋多肽建立的膜融合研究模型

    以上研究方法多是模擬了膜融合的過(guò)程,簡(jiǎn)要概括了膜融合的基本特征。這些研究所用的模型多是脂質(zhì)體和脂質(zhì)體的融合,并未將融合事件擴(kuò)展至活細(xì)胞的研究上,這在很大程度上限制了膜融合在藥物遞送方面的研究。2016年,Mora等[23]受SNARE蛋白結(jié)構(gòu)啟發(fā),建立了利用卷曲螺旋肽互補(bǔ)的相互作用進(jìn)行完全人工模擬的靶向膜融合模型。這個(gè)模型和SNARE介導(dǎo)的膜融合有類似的關(guān)鍵性特征。

    超分子化學(xué)的發(fā)展為功能材料的設(shè)計(jì)提供了很多便捷方法。細(xì)胞膜內(nèi)的蛋白由于相互間的靜電斥力而很難發(fā)生相互作用,大分子之間的疏水相互作用則可彌補(bǔ)這方面的不足。基于蛋白質(zhì)之間的疏水相互作用,可對(duì)膜融合進(jìn)行特異性調(diào)控[24]。設(shè)計(jì)互補(bǔ)的卷曲螺旋組成脂肽嵌入脂質(zhì)體膜中,可有效且快速調(diào)控靶向性膜融合[23,25~28]。此類膜融合脂質(zhì)體是通過(guò)將磷脂和脂肽融合在有機(jī)溶劑中制備[27]。 Versluis等[29]設(shè)計(jì)了一種可基于互補(bǔ)脂肽對(duì)的,快速促進(jìn)膜融合的超分子系統(tǒng)。他們通過(guò)向普通脂質(zhì)體中添加水溶性的兩親性多肽誘導(dǎo)脂質(zhì)體膜融合。這種方法和常見(jiàn)的脂質(zhì)體制備的方法截然不同,普通脂質(zhì)體多基于融合肽、糖類、糖肽類及DNA復(fù)合物等,該方法可用于脂質(zhì)體和細(xì)胞膜的融合及細(xì)胞膜的刺激活化等[30]。

    2013年,Zope等[31]利用光敏材料對(duì)促進(jìn)融合的肽進(jìn)行屏蔽,光敏材料的光誘導(dǎo)效應(yīng)可很快地去屏蔽,使肽鏈發(fā)生相互作用,從而促進(jìn)兩個(gè)脂質(zhì)體膜進(jìn)行融合,實(shí)現(xiàn)可控融合(圖4A)。2016年,Kong等[32]設(shè)計(jì)了一種基于卷曲螺旋組成的肽,通過(guò)其互補(bǔ)作用,靶向促進(jìn)膜融合(圖4B)。兩種卷曲螺旋肽分別為E和K,通過(guò)將E和K脂質(zhì)體混合在一起,膜融合可自發(fā)地進(jìn)行。在自然界中,膜融合受時(shí)間和空間的高度調(diào)控,從而保證融合的正確發(fā)生,維持生物體機(jī)能的正常運(yùn)轉(zhuǎn)。同樣,其融合特性可用于載藥和基因運(yùn)輸?shù)哪と诤舷到y(tǒng),從而控制膜融合發(fā)生的時(shí)間和部位。

    4?膜融合研究在藥物運(yùn)輸方面的應(yīng)用

    穿膜肽和脂質(zhì)體由于其良好的生物相容性和非入侵性而廣泛應(yīng)用于藥物運(yùn)輸?shù)难芯?。脂質(zhì)體的尺寸通常小于1 μm,是研究生物或生物物理膜性質(zhì)的常用模型; 另外,由于其生物相容性及低毒性,常被用作藥物運(yùn)輸系統(tǒng)。功能化修飾的脂質(zhì)體可向細(xì)胞質(zhì)內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)小分子,常見(jiàn)的功能分子有帶正電的磷脂、聚合物、抗體、細(xì)胞穿膜肽等。將水溶性的藥物分子包裹在脂質(zhì)體內(nèi)也是常用的藥物運(yùn)輸方法,但有關(guān)將親脂性的藥物包裹在脂質(zhì)體內(nèi)實(shí)現(xiàn)藥物運(yùn)輸?shù)难芯繄?bào)道較少。受細(xì)胞膜上SNARE蛋白的啟發(fā),Mora等[23]開(kāi)發(fā)了一種藥物運(yùn)輸系統(tǒng)用于靶向膜融合(圖5A),膜融合系統(tǒng)由兩條互補(bǔ)的兩親肽組成,兩條肽分別嵌在不同的膜上,其互補(bǔ)后形成的卷曲螺旋復(fù)合物可將兩個(gè)對(duì)立的細(xì)胞膜拉至較近的距離,從而促使膜融合的形成。

    2017年,Yang等[33]利用脂質(zhì)層包裹的介孔二氧化硅納米顆粒,通過(guò)膜融合介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的傳遞。蛋白質(zhì)向細(xì)胞質(zhì)的運(yùn)輸是納米醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)具有挑戰(zhàn)性的課題,因?yàn)榧?xì)胞攝取和溶酶體逃逸的效率很低,阻礙了其在臨床上的應(yīng)用。該工作設(shè)計(jì)了一種含有大孔徑(10 nm)圓盤(pán)狀腔的二氧化硅納米顆粒(MSNs),用于細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)遞送的研究,并以細(xì)胞色素C(cytC)為不透膜的蛋白質(zhì)研究模型。為確保膠體的穩(wěn)定性,MSNs表面涂覆了一個(gè)融合脂質(zhì)雙層(LB),細(xì)胞攝取由一對(duì)互補(bǔ)的卷曲螺旋肽誘導(dǎo)。卷曲螺旋肽誘導(dǎo)的膜融合可使細(xì)胞色素C有效地進(jìn)行細(xì)胞遞送,并引發(fā)細(xì)胞凋亡。在內(nèi)吞抑制劑的存在下,這些LB涂層MSNs的有效傳遞表明膜融合是細(xì)胞攝取的主要機(jī)制。這種用卷曲螺旋肽介導(dǎo)膜融合對(duì)于細(xì)胞內(nèi)有效遞送無(wú)機(jī)納米粒子或蛋白質(zhì)具有普適性。2018年,Bi等[34]利用脂質(zhì)包裹的磁性納米顆粒實(shí)現(xiàn)了磁場(chǎng)引發(fā)的藥物釋放,這種新的藥物遞送方法對(duì)于癌癥治療具有很大的應(yīng)用潛力。

    互補(bǔ)的卷曲螺旋組成的肽鏈,如E4((EIAALEK)4)和K4((KIAALKE)4),其和脂質(zhì)體相連可組成一類常見(jiàn)的膜融合引發(fā)劑。受此啟發(fā),Yang等[35]首次將這種卷曲螺旋肽用于藥物運(yùn)輸,制備E4肽修飾的脂質(zhì)體,并在其中包裹遠(yuǎn)紅外熒光素TOPRO-3碘負(fù)離子(E3-Lipo-TP3),結(jié)果表明,E4脂質(zhì)體可向膜表面表達(dá)K4肽的Hela細(xì)胞遞送TP3分子。此外,他們用脂質(zhì)體包裹E4-Lipo-DOX,證實(shí)該方法還可向細(xì)胞內(nèi)遞送DOX(圖5B)。將GUV(70% POPC和30%膽固醇)包裹的0.8 mmol/L光澤晶熒光染料和脂肽1孵育,得到功能化的GUV,隨后形成的二聚卷曲螺旋結(jié)構(gòu)可促使脂質(zhì)體的融合,從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)轉(zhuǎn)運(yùn)體3的靶向遞送。最后,在溶液中加入NaCl轉(zhuǎn)運(yùn)體3,將外部的氯化物轉(zhuǎn)化為內(nèi)部的鹽,導(dǎo)致脂質(zhì)體內(nèi)熒光素猝滅。研究表明,與游離的阿霉素相比,E4-Lipo-DOX具有更強(qiáng)的細(xì)胞毒性。為了證明E4/K4卷曲螺旋結(jié)構(gòu)適用于體內(nèi)的藥物運(yùn)輸,他們將E4-Lipo-DOX和E3-Lipo-TP3注射進(jìn)入移植有Hela-K的斑馬魚(yú)體內(nèi),結(jié)果表明,E4脂質(zhì)體可進(jìn)入Hela-K細(xì)胞,E4-Lipo-DOX可抑制癌細(xì)胞的增殖。因此,卷曲螺旋結(jié)構(gòu)可有效且有選擇性地用于體內(nèi)的藥物運(yùn)輸。

    5?總結(jié)與展望

    脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑及電穿孔試劑盒的開(kāi)發(fā)研究對(duì)于細(xì)胞和活體的研究至關(guān)重要。然而,細(xì)胞及生物體是一個(gè)極其復(fù)雜的微環(huán)境,現(xiàn)有研究方法常具有復(fù)雜的機(jī)制,且其對(duì)細(xì)胞行為的影響不可預(yù)測(cè)。膜融合是所有生物體內(nèi)時(shí)刻都在發(fā)生,并且對(duì)于維持生物體的生命活動(dòng)具有重要調(diào)控作用的事件,嚴(yán)格調(diào)控神經(jīng)突觸的傳導(dǎo)、內(nèi)吞、胞吐等生物過(guò)程。理解膜融合的基礎(chǔ)生物物理過(guò)程不僅有助于深入了解生命過(guò)程,而且能為材料科學(xué)開(kāi)辟一個(gè)新的途徑,同時(shí)為藥物設(shè)計(jì)和基因的傳導(dǎo)提供一個(gè)強(qiáng)有力的工具。另一方面,膜融合和其它技術(shù)的結(jié)合,如DNA納米技術(shù)等,可很大程度上促進(jìn)膜融合領(lǐng)域的發(fā)展。但是,生物膜的組成并不像現(xiàn)有的研究設(shè)計(jì)模型那么簡(jiǎn)單,其表面含有大量的蛋白及糖類,微小的刺激可能會(huì)引起細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng),而現(xiàn)有的研究方法并不能對(duì)所有細(xì)胞產(chǎn)生的行為進(jìn)行合理的解釋。建立正確的膜融合系統(tǒng),使其組成更加接近真實(shí)的生物狀態(tài),有助于深入了解生物的生命過(guò)程。

    References

    1?Jahn R,Lang T,Südhof T C. Cell,2003,112(4): 519-533

    2?Wang Y,Li L,Hou C,Lai Y,Long J,Liu J,Zhong Q,Diao J. Semin Cell Dev. Biol.,2016,60: 97-104

    3?Harrison S C. Virology,2015,479: 498-507

    4?Marsden H R,Tomatsu I,Kros A. Chem. Soc. Rev.,2011,40(3): 1572-1585

    5?Li F,Tiwari N,Rothman J E,Pincet F. Proc. Natl. Acad. Sci. USA,2016,113(38): 10536-10541

    6?D'Agostino M,Risselada H J,Endter L J,Comte-Miserez V,Mayer A. EMBO J.,2018,37(19): e99193

    7?Chen X,Ara D,Wang T M,Gilpin C J,Zimmerberg J,Rizo J. Biophys. J.,2006,90(6): 2062-2074

    8?Stengel G,Zahn R,Hk F. ?J. Am. Chem. Soc.,2007,129(31): 9584-9585

    9?Liu X,Tian F,Yue T,Zhang X,Zhong C. J. Chem. Phys.,2017,147(19): 194703

    10?Spang A. Nature,2017,551(30): 576-577

    11?Chen Y A,Scheller R H. Nat. Rev. Mol. Cell Biol.,2001,2(2): 98-106

    12?Yoon T Y,Okumus B,Zhang F,Shin Y K,Ha T. Proc. Natl. Acad. Sci. USA,2006,103(52): 19731-19736

    13?Mostafavi H,Thiyagarajan S,Stratton B S,Karatekin E,Warner J M,Rothman J E,O'Shaughnessy B. Proc. Natl. Acad. Sci. USA,2017,114(21): 5455-5460

    14?Beales P A,Vanderlick T K. Biophys. J.,2009,96(4): 1554-1565

    15?Chan Y H M,van Lengerich B,Boxer S G. Proc. Natl. Acad. Sci. USA,2009,106(4): 979-984

    16?Flavier K M,Boxer S G. Biophys. J.,2017,113(6): 1260-1268

    17?Xu W,Wang,J,Rothman J E,Pincet F. Angew. Chem. Int. Ed.,2015,54(48): 14388-14392

    18?Sun L,Gao Y,Wang Y,Wei Q,Shi J,Chen N,Li D,F(xiàn)an C. Chem. Sci.,2018,9(27): 5967-5975

    19?Loffler P M G,Ries O,Rabe A,Okholm,A H,Thomsen R P,Kjems J,Vogel S. Angew. Chem. Int. Ed.,2017,56(43): 13228-13231

    20?Czogalla A,Kauert D J,F(xiàn)ranquelim H G,Uzunova V,Zhang Y,Seidel R,Schwille P. Angew. Chem. Int. Ed.,2015,54(22): 6501-6505

    21?van Lengerich B,Rawle R J,Bendix P M,Boxer S G. Biophys. J.,2013,105(2): 409-419

    22?Peng R,Wang H,Lyu Y,Xu L,Liu H,Kuai H,Liu Q,Tan W. J. Am. Chem. Soc.,2017,139(36): 12410-12413

    23?Mora N L,Bahreman A,Valkenier H,Li H,Sharp T H,Sheppard D N,Davis A P,Kros A. Chem. Sci.,2016,7(3): 1768-1772

    24?Zheng T,Bulacu M,Daudey G,Versluis F,Voskuhl J,Martelli G,Raap J,Sevink G J A,Kros A,Boyle A L. RSC Adv.,2016,6(10): 7990-7998

    25?Kumar P,van Son M,Zheng T,Valdink D,Raap J,Kros A,Huber M. PLoS One,2018,13(1): e0191197

    26?Rabe M,Zope H R,Kros A. Langmuir,2015,31(36): 9953-9964

    27?Daudey G A,Zope H R,Voskuhl J,Kros A,Boyle A L. Langmuir,2017,33(43): 12443-12452

    28?Koukalova A,Pokorna S,Boyle A L,Mora N L,Kros A,Hof M,Sachl R. Nanoscale,?2018,10(40): 19064-19073

    29?Versluis F,Voskuhl J,van Kolck B,Zope H,Bremmer M,Albregtse T,Kros A. J. Am. Chem. Soc.,?2013,135(21): 8057-8062

    30?Yang J,Bahreman A,Daudey G,Bussmann J,Olsthoorn R C,Kros A. ACS Central Sci.,2016,2(9): 621-630

    31?Zope H R,Versluis F,Ordas A,Voskuhl J,Spaink H P,Kros A. Angew. Chem. Int. Ed.,?2013,52(52): 14247-14251

    32?Kong L,Askes S H,Bonnet S,Kros A,Campbell F. Angew. Chem. Int. Ed.,2016,55(4): 1396-1400

    33?Yang J,Tu J,Lamers G E M,Olsthoorn R C L,Kros A. Adv. Health Mater.,2017,6: 1700759

    34?Bi H,Han X. Chem. Phys. Lett.,2018,706: 455-460

    35?Yang J,Shimada Y,Olsthoorn R C,Snaar-Jagalska B E,Spaink H P,Kros A. ACS Nano,2016,10(8): 7428-735

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