熊果酸抑制動(dòng)脈粥樣硬化巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)作用

王波 余珊 俞華 王磊 謝力 劉亞彬 陶劍 寧海濤 賈靜

(1昆明學(xué)院醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650031；2昆明市第一人民醫(yī)院)

動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是心血管疾病的主要病理基礎(chǔ),其引起的血栓形成和斑塊破裂可誘發(fā)嚴(yán)重的心血管疾病,如冠心病、心肌梗死等。近年來(lái)分子生物學(xué)及AS治療學(xué)的進(jìn)步使AS從不治到可治，但高熱量、高飽和脂肪酸食物攝入過(guò)多及缺乏體力活動(dòng)等不良生活方式促使AS發(fā)病率和死亡率持續(xù)上升，對(duì)其進(jìn)行有效地防治尤為重要。研究發(fā)現(xiàn)熊果酸(UA)具有抗AS的作用，且安全，不良反應(yīng)小〔1〕。UA又名烏索酸、烏蘇酸是一種存在于多科植物中的五環(huán)三萜類化合物，分子式為C30H48O3。UA在自然界中分布廣泛，常以游離或結(jié)合成糖苷的形式存在于山楂、白花蛇舌草、女貞子、車前草、夏枯草、杜鵑花、連翹和苦丁茶科熊果的葉、果實(shí)等植物中，其抗腫瘤、抗AS、降血脂、降低血糖、保肝、抗菌、抗炎、抗病毒、抗氧化、鎮(zhèn)靜和安定等藥理作用已被證實(shí)，且安全和不良反應(yīng)小，作為一種高效低毒的多用途新藥，被國(guó)內(nèi)外學(xué)者普遍關(guān)注〔2～8〕。本研究旨在觀察UA在AS形成過(guò)程中對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)形成泡沫細(xì)胞的影響，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 本實(shí)驗(yàn)選用40只8周齡、體重200～250 g的健康Wistar雌性大鼠，飼養(yǎng)于重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。飼養(yǎng)環(huán)境照明12 h，溫度保持為(22±1)℃，濕度保持為(60±5)%。AS造模分為兩組：隨機(jī)選用20只Wistar雌性大鼠作為干預(yù)治療組，剩余20只Wistar雌性大鼠作為模型組。

1.2主要試劑及儀器 UA粉劑選用成都健騰生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，其純度>95%，用二甲基亞砜(DMSO)溶解，并調(diào)整 DMSO終濃度為0.06%。奧林巴斯顯微鏡、熒光顯微鏡、徠卡密閉式全自動(dòng)組織脫水機(jī)、組織包埋機(jī)、恒溫冰凍切片機(jī)、恒溫展片臺(tái)、病理圖像分析儀、低溫冰箱、全自動(dòng)酶標(biāo)儀、全自動(dòng)生化分析儀及臺(tái)式低溫冷凍離心機(jī)。

1.3方法

1.3.1造模 采用Wistar大鼠作為研究對(duì)象，通過(guò)高脂飼養(yǎng)加維生素D喂養(yǎng)的方法建立AS模型(n=20),10 w后對(duì)兩組Wistar大鼠取血測(cè)定血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C),并取損傷側(cè)頸動(dòng)脈行HE染色制作病理切片，觀察巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)形成泡沫細(xì)胞的病理學(xué)變化，檢測(cè)動(dòng)物模型建立是否成功。

1.3.2血生化分析 在第10周末處死Wistar大鼠收集血清樣本，采用全自動(dòng)血生化分析儀檢測(cè)血清TG、TC、LDL-C和HDL-C。

1.3.3標(biāo)本采集及形態(tài)學(xué)染色 在第10周末，將各組Wistar大鼠麻醉后處死，取出右側(cè)股動(dòng)脈近心端1 cm經(jīng)等滲生理鹽水灌洗后，立即置于4℃多聚甲醛溶液中，常溫固定12 h后，進(jìn)行脫水和石蠟包埋，沿橫斷面行連續(xù)切片(5 μm/片)，進(jìn)行HE染色。采用Image-ProPlus6.0圖像分析軟件分析圖片。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行t及χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組血生化指標(biāo)比較 與模型組與給藥前比較組比較，干預(yù)治療組給藥后TC、TG、HDL-C和LDL-C顯著降低(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.2兩組細(xì)胞學(xué)檢測(cè)比較 干預(yù)治療組給藥前和模型組大鼠股動(dòng)脈內(nèi)膜明顯增厚，兩組均觀察到有脂質(zhì)沉積、泡沫細(xì)胞、少量紅細(xì)胞和纖維組織增生，內(nèi)膜壞死脫落，伴有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。給藥后干預(yù)治療組大鼠股動(dòng)脈內(nèi)膜纖維細(xì)胞減少甚至消失，平滑肌增生，沉積脂質(zhì)減少，單核巨噬細(xì)胞增生(圖1)。

表1 兩組血生化指標(biāo)比較

與干預(yù)治療組治療后比較：1)P<0.05

圖1 干預(yù)治療組給藥前、后股動(dòng)脈細(xì)胞學(xué)檢測(cè)(HE)

3 討 論

UA又名烏索酸、烏蘇酸是一種存在于多科植物中的五環(huán)三萜類化合物，分子式為C30H48O3，分子量456.68。熊果酸為山楂、白花蛇舌草、女貞子、車前草、夏枯草、杜鵑花、連翹和苦丁茶科熊果的葉、果實(shí)等植物的提取物，其抗腫瘤、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降血脂等藥理作用已被證實(shí)，且安全和不良反應(yīng)小〔9～15〕。

高脂導(dǎo)致大量脂質(zhì)沉積于血管壁，引發(fā)巨噬細(xì)胞的聚集，巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)后，變成泡沫細(xì)胞進(jìn)一步介導(dǎo)血管壁的損傷，降低血清血脂水平，可以抑制損傷斑塊中巨噬細(xì)胞的聚集，減輕AS〔16～20〕。本研究顯示UA能夠降低高脂飲食大鼠血清TC、TG和LDL-C水平，提示其調(diào)脂作用可能成為其抗AS的一部分。同時(shí)UA對(duì)脂質(zhì)沉積和泡沫細(xì)胞形成有一定的抑制作用，促進(jìn)平滑肌增生，但血管壁仍然有少量脂質(zhì)沉積、炎性細(xì)胞和泡沫細(xì)胞，這可能與本研究給藥時(shí)間較短有關(guān)。研究證明，UA可以抑制脂質(zhì)沉積，促進(jìn)平滑肌增生、血管修復(fù)和單核巨噬細(xì)胞增生，而這些單核巨噬細(xì)胞在AS中發(fā)揮著相當(dāng)?shù)淖饔?，在AS中UA是否可以抑制這些炎癥發(fā)生，降低內(nèi)膜損傷將在以后的研究中進(jìn)一步探討。