白細胞介素-10基因修飾的兔脂肪來源間充質(zhì)干細胞的構(gòu)建及其對自體外周血Th17細胞的免疫調(diào)控△

趙璐 粘紅 韋燕凱 金成成 李娜 陳思思 魏瑞華

干燥綜合征(Sj?gren’s syndrome，SS)是一種慢性自身免疫性干眼類型，主要侵犯唾液腺和淚腺，表現(xiàn)為口眼干燥[1]。SS發(fā)病機制尚未完全明確，目前仍缺乏有效的治療方法，有研究表明，Th17細胞作為致炎細胞群在SS發(fā)病過程中起到了重要作用[2]。間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是來源于中胚層的多能干細胞，具有低免疫原性及免疫抑制特性。研究表明，MSCs可通過抑制Th17細胞的活化與增殖發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[3-6]。同時有研究表明，白細胞介素10(interleukin 10，IL-10)、吲哚胺2，3-雙加氧酶(indoleamine 2，3-dioxygenase，IDO) 等基因可增強MSCs的治療效能[7-8]。因此，本研究旨在構(gòu)建IL-10 基因修飾的兔脂肪來源間充質(zhì)干細胞(interleukin-10 gene-modified adipose mesenchymal stem cells，IL-10-ADSCs)，探究其對兔外周血Th17細胞的免疫調(diào)控作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物SPF級雌性新西蘭大白兔，體質(zhì)量為2.5～3.0 kg(北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供)，實驗前排除眼部炎癥及其他異常，實驗動物的使用及喂養(yǎng)遵循國家科學(xué)技術(shù)委員會頒布的《實驗動物管理條例》。

1.1.2 主要試劑與儀器慢病毒包裝細胞人胚腎293T細胞株(美國ATCC細胞庫)；ADSCs細胞(天津醫(yī)科大學(xué)眼科醫(yī)院眼科研究所)；pHBLV-CMVIE-ZsGreen-Puro載體質(zhì)粒及輔助包裝質(zhì)粒pSPAX2和pMD2.G(上海漢恒生物有限公司)；大腸桿菌菌株DH5α、RNA提取試劑Trizol(美國Invitrogen公司)；無內(nèi)毒素質(zhì)粒抽提試劑盒(北京康為世紀有限公司)；胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)、胰蛋白酶、DMEM培養(yǎng)基、DMEM/F-12培養(yǎng)基、聚乙二醇8000、I型膠原酶(美國Gibco公司)；2×濃縮定量即時聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real time polymerase chain reaction，Q-PCR)擴增混合液、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、限制性內(nèi)切酶、T4連接酶(美國Thermo公司)；小鼠抗兔DYKDDDDK Tag一抗、HRP標記馬抗小鼠IgG二抗(美國Cell Signaling Technology公司)；淋巴細胞分離液(美國GE公司)；7900HTFAST Q-PCR儀(愛普拜斯應(yīng)用生物系統(tǒng)貿(mào)易上海有限公司)。

1.2 IL-10重組慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定

1.2.1 IL-10基因片段的制備從GeneBank數(shù)據(jù)庫中獲得兔IL-10的mRNA序列，設(shè)計引物序列如下：上游引物：5’-ATATGAATTCGCCACCATGCTCAGCTCAGCTCT-3’；下游引物：5’-ATATGGATCCGCTTTTTATCTTCATTGTCATGTA-3’(引物說明：下劃線為交換配對堿基，酶切位點)。聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)的反應(yīng)體系為模板DNA 0.5 μL，上、下游引物各1.0 μL，10× PCR 緩沖液5.0 μL，脫氧核糖核苷三磷酸 5.0 μL，高保真PCR酶1.0 μL，硫酸鎂2.0 μL，加超純水至50.0 μL。PCR 反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性20 s，55 ℃退火20 s，72 ℃延伸90 s，25個循環(huán)。PCR 產(chǎn)物進行10 g·L-1瓊脂糖凝膠電泳鑒定后，按照DNA 凝膠回收試劑盒說明書回收DNA 片段。

1.2.2 重組質(zhì)粒pHBLV-IL-10的構(gòu)建及鑒定用EcoR I和BamH I分別對IL-10 PCR產(chǎn)物和pHBLV-CMVIE-ZsGreen-Puro載體質(zhì)粒進行雙酶切，酶切完成后進行膠回收，用T4 DNA連接酶連接后，用DH5α感受態(tài)細菌轉(zhuǎn)化，涂布含有氨芐抗性的瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃過夜培養(yǎng)后挑取單克隆菌落，37 ℃、250 r·min-1搖菌14 h后進行菌液PCR 鑒定，陽性克隆菌送鉑尚生物技術(shù)(上海)有限公司測序。

1.2.3 pHBLV-IL-10慢病毒的包裝質(zhì)粒高純度無內(nèi)毒素大量抽提，在轉(zhuǎn)染前1 d將培養(yǎng)至P3代的293T細胞接種于10 cm培養(yǎng)皿中，待細胞匯合度達70%～80%時用于轉(zhuǎn)染，取兩支滅菌離心管，分別加入質(zhì)粒DNA(pSPAX2、pMD2.G、pHBLV-IL-10遵循摩爾比111，共24 μg)或LipoFiterTM(48 μL)與DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基的混合液于室溫孵育5 min。將兩支離心管中DNA溶液與LipoFiterTM溶液混合均勻，室溫孵育20 min后共轉(zhuǎn)染293T細胞。轉(zhuǎn)染6 h后更換為完全培養(yǎng)基。分別收集培養(yǎng)48 h及72 h富含慢病毒顆粒的細胞上清。4 ℃、2000 r·min-1離心15 min去除細胞雜質(zhì)，0.45 μm濾器過濾上清液后每30 mL加入高壓滅菌5×聚乙二醇8000 NaCl母液7.5 mL，4 ℃搖床過夜，第2天7110 r·min-1離心20 min，DMEM/F-12基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸沉淀分裝于EP管中于-80 ℃儲存。

1.2.4 重組慢病毒滴度檢測將生長狀態(tài)良好的293T細胞按每孔10×103個接種于96孔板。第2天取6個無菌EP管分別加入90 μL完全培養(yǎng)基，取10 μL病毒原液加入到第1個EP管中，吹打混勻后吸取10 μL加入到第2個EP管中，連續(xù)6次做10倍梯度稀釋。將梯度稀釋的病毒加入293T細胞孵育過夜，24 h后換液，72 h后熒光顯微鏡觀察熒光表達情況。對熒光比例10%～30%的孔進行細胞計數(shù)并計算滴度。滴度計算：滴度(TU·mL-1)=細胞數(shù)×熒光百分比×103/病毒原液體積(μL)。

1.3 IL-10-ADSCs的構(gòu)建與鑒定

1.3.1 重組慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染ADSCsADSCs分離提純及鑒定方法同前期文獻[9]，將生長狀態(tài)良好的ADSCs細胞接種于24孔板，第2天細胞匯合度達50%～70%時進行慢病毒感染，24 h后換液，48 h后熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)表達效率。

1.3.2 Q-PCR檢測IL-10基因的表達提取感染慢病毒后ADSCs細胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，Q-PCR檢測細胞內(nèi)IL-10 mRNA表達水平。384孔板中分別加入1 μL上游引物，1 μL下游引物(引物序列：上游引物：5’-CAACAGAGAGCAGGACGTGAGACT-3’，下游引物：5’-GCATCTTGGCTTTGGTACTGAGCT)，4 μL 2×濃縮Q-PCR擴增混合液以及2 μL cDNA，封板膜封閉后渦旋離心，離心結(jié)束后，將384孔板放入Applied Biosystems 7900HT Fast Real-time PCR儀中，設(shè)置參數(shù)，反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性15 s，60 ℃退火 1 min，72 ℃延伸15 s，共40個循環(huán)。

1.3.3 Western blot檢測IL-10蛋白的表達消化離心收集細胞，加入細胞裂解液提取細胞總蛋白。100 μg等量蛋白上樣，經(jīng)SDS-PAGE電泳、轉(zhuǎn)膜、50 g·L-1脫脂牛奶室溫封閉1 h。分別加小鼠抗兔DYKDDDDK Tag一抗(1500)及小鼠抗兔β-actin二抗(12000)4 ℃孵育過夜。TBST緩沖液洗膜3次，每次10 min；HRP標記馬抗小鼠IgG二抗(12000)室溫孵育1 h，TBST緩沖液洗膜3次，每次10 min；DAB顯色檢測蛋白表達(pHBLV-CMVIE-ZsGreen-Puro載體自帶3×FLAG標簽)。

1.3.4 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測感染慢病毒后ADSCs干細胞特性提取感染慢病毒后ADSCs細胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。在冰浴中按次序分別將1.0 μL cDNA，2.0 μL上下游引物，12.5 μL 2×Taq逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)預(yù)混試劑以及7.5 μL雙蒸水加入至200.0 μL EP管中，將上述混合液離心后置于RT-PCR儀上，執(zhí)行擴增。反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性3 min后進入循環(huán)階段：94 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，循環(huán)30～35次，最后 72 ℃ 保溫5 min。反應(yīng)結(jié)束后加樣行瓊脂糖凝膠電泳。加樣：RT-PCR marker：1 μL marker+1 μL上樣緩沖液+4 μL TAE電泳緩沖液，RT-PCR樣品：5 μL樣品DNA+1 μL上樣緩沖液，混勻后依次加入瓊脂糖凝膠孔中，100 V、50 mA電泳40 min，凝膠成像儀成像分析ADSCs中GAPDH、CD29、CD34、CD44、CD45、CD73、CD90基因的表達。RT-PCR引物序列：GAPDH：上游引物：5’-AACATCATCCCTGCCTCTA-CTG-3’，下游引物：5’-CTCCGACGCCTGCTTCAC-3’；CD29：上游引物：5’-CAAGAAGGAATGCCTACGTC-3’，下游引物：5’-CAATGCCACCAAGTTTCCCAT-3’；CD34：上游引物：5’-AGAACTTTCCAGCATGTTCCAGTTTATG-3’，下游引物：5’-GGCTTGCCACATCTTGCTCGGTGA-3’；CD44：上游引物：5’-CACCACGGATTTCTGACCAC-3’，下游引物：5’-TCCAAGC-CTCCATGTAATGT-3’；CD45：上游引物：5’-TTACCTGGACACCTCCTCAA-3’，下游引物：5’-TTCATCATCCCTTTCAACAA-3’；CD73：上游引物：5’-CCACTTCTCAAAGAGGCTAA-3’，下游引物：5’-GAAGAATAGGATTTCCGTGT-3’；CD90：上游引物：5’-CATTTCCCTGTGACTGGTTG-3’，下游引物：5’-CTGGCTTCCCTTGTCATAAA-3’。

1.4 IL-10-ADSCs對兔外周血Th17細胞分化相關(guān)基因mRNA表達的影響

1.4.1 建立淚腺上皮細胞與自體外周血淋巴細胞共培養(yǎng)體系分離兔淚腺上皮細胞及外周血淋巴細胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)，方法同前期文獻[9]。將兔淚腺上皮細胞于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 d后進行γ射線照射(照射劑量為2500 RAD)，使其喪失增殖能力但保留其抗原性(表達MHCⅡ分子)。將其與PBMCs以11的比例混合培養(yǎng)3 d后，按PBMCsADSCs為51的比例加入等量的ADSCs、IL-10-ADSCs和GFP-ADSCs(前期研究表明ADSCs可抑制外周血T淋巴細胞的增殖，ADSCs與T淋巴細胞混合培養(yǎng)比例為51時抑制效果最好[9])，同時以等量的成人真皮成纖維細胞-α作為實驗對照，共培養(yǎng)2 d后，收集混合培養(yǎng)體系中細胞。

1.4.2 IL-10-ADSCs對兔外周血Th17細胞分化相關(guān)基因mRNA表達的影響將1.4.1中收集的混合培養(yǎng)的細胞加入適量Trizol進行總RNA的提取，逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA，Q-PCR檢測Th17細胞分化相關(guān)基因IL-17、維甲酸相關(guān)孤獨受體C(retinoicacid orphan receptor C，RORC) mRNA表達水平，引物序列：GAPDH：上游引物：5’-GGGTGGTGGACCTCATGGT-3’，下游引物：5’-CGGTGGTTTGAGGGCTCTTA-3’；IL-17：上游引物：5’-GGAATGAGGACCACCACATGA-3’，下游引物：5’-CTGCGTAGGACCAGGATCTCTT-3’；RORC：上游引物：5’-GGCCTACCACGCCGA-3’，下游引物：5’-TCCATGCCACCGTATTTGC-3’。相對定量結(jié)果分析采用2-ΔΔCt法。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示，兩組樣本均數(shù)比較采用t檢驗，兩組以上樣本比較采用單因素方差分析(ANOVA)。檢驗水準：α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 IL-10重組慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定

2.1.1 重組質(zhì)粒pHBLV-IL-10的構(gòu)建及鑒定兔IL-10目的基因經(jīng)PCR擴增后產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析，基因片段大小為534 bp，大小與預(yù)期結(jié)果相符，見圖1A。挑取細菌培養(yǎng)皿單克隆菌落，過夜搖菌后進行菌液PCR鑒定，陽性轉(zhuǎn)化子PCR產(chǎn)物大小約為900 bp(PCR擴增用的是載體上的一段通用引物，故應(yīng)該比534 bp大300 bp左右)，見圖1B。將陽性克隆菌液送鉑尚生物技術(shù)(上海)有限公司進行測序分析，測序結(jié)果顯示基因序列正確，重組慢病毒載體構(gòu)建成功，見圖2。

圖1 IL-10重組慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定。A：PCR擴增IL-10基因片段；B：IL-10過表達重組質(zhì)粒菌液PCR鑒定。1-8代表的是挑取的8個單克隆菌落

圖2 pHBLV-IL-10載體測序結(jié)果。陽性克隆菌基因測序結(jié)果表明重組慢病毒載體構(gòu)建成功

2.1.2 慢病毒包裝與滴度檢測將pSPAX2、pMD2.G、pHBLV-IL-10共轉(zhuǎn)染293T細胞進行慢病毒的包裝，分別于轉(zhuǎn)染后48 h及72 h熒光顯微鏡下觀察GFP的表達情況，見圖3。收集48 h及72 h病毒上清經(jīng)5×聚乙二醇8000濃縮后獲得的病毒顆粒進行滴度的測定，見圖4。對熒光比例合適(10%)的孔進行細胞計數(shù)并計算滴度。滴度計算結(jié)果為1.2×109TU·mL-1。滴度滿足后續(xù)實驗需求。

2.2 IL-10-ADSCs的構(gòu)建與鑒定用濃縮后的慢病毒顆粒感染ADSCs，48 h熒光顯微鏡下觀察GFP表達效率約為80%以上，見圖5A。應(yīng)用Q-PCR對IL-10-ADSCs組及GFP-ADSCs組細胞中IL-10 mRNA表達水平進行檢測，結(jié)果表明，與GFP-ADSCs組相比，IL-10-ADSCs組IL-10 mRNA的相對表達量顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)，見圖5B。Western blot檢測IL-10蛋白水平相對表達量，結(jié)果表明，目標蛋白相對分子質(zhì)量大小約為22 000，與預(yù)期結(jié)果一致。與GFP-ADSCs組相比，IL-10-ADSCs組在蛋白水平過表達IL-10，見圖5C。利用RT-PCR檢測IL-10-ADSCs相關(guān)的細胞表面標志分子基因水平的表達，結(jié)果顯示IL-10-ADSCs高表達CD29、CD44、CD73、CD90等MSCs標志物，不表達CD34、CD45等造血細胞標志物，說明IL-10-ADSCs仍然具有干細胞特性，見圖5D。

圖3 IL-10重組慢病毒包裝48 h(A)及72 h(B)GFP表達情況(×4)。熒光顯微鏡下觀察慢病毒包裝48 h及72 h GFP表達率可達90%以上

圖4 梯度稀釋病毒計算病毒滴度(×20)。對濃縮后的病毒連續(xù)6次行10倍梯度稀釋后感染293T細胞進行滴度計算，每孔所加病毒量分別為A(10 μL)、B(10-1 μL)、C(10-2 μL)、D(10-3 μL)、E(10-4 μL)、F(10-5 μL)，圖為感染72 h后熒光顯微鏡下GFP表達情況，選取第3孔細胞(感染率約10%)消化計數(shù)進行滴度的計算(圖4C)

圖5 IL-10-ADSCs的構(gòu)建與鑒定。A：慢病毒感染ADSCs 48 h GFP表達情況(×4)；B：Q-PCR檢測IL-10 mRNA表達水平；C：Western blot檢測IL-10蛋白表達水平(載體自帶3×FLAG標簽，故目標蛋白采用小鼠抗兔DYKDDDDK Tag一抗)；D：RT-PCR鑒定IL-10-ADSCs干細胞特性

2.3 IL-10-ADSCs抑制兔外周血Th17細胞分化相關(guān)基因mRNA表達Q-PCR檢測混合培養(yǎng)體系細胞中Th17細胞分化相關(guān)基因IL-17、RORC mRNA表達水平。與對照組IL-17、RORC mRNA的表達量(IL-17：1.000±0.016；RORC：1.000±0.021)相比，IL-10-ADSCs組(IL-17：0.203±0.160；RORC：0.371±0.190)、ADSCs組(IL-17：0.508±0.296；RORC：0.632±0.061)及GFP-ADSCs組(IL-17：0.539±0.202；RORC：0.549±0.008)均顯著降低，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均為P<0.05)。同時IL-10-ADSCs組對IL-17、RORC mRNA抑制效果大于ADSCs組和GFP-ADSCs組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均為P<0.05)，ADSCs組與GFP-ADSCs組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均為P>0.05)。結(jié)果表明，MSCs可抑制反應(yīng)體系中T細胞向Th17細胞方向分化，且IL-10-ADSCs組抑制效果較基因修飾前更加顯著(圖6)。

圖6 IL-10-ADSCs抑制兔外周血Th17細胞分化相關(guān)基因mRNA表達。IL-10-ADSCs組與對照組比較，*P<0.05，***P<0.001；IL-10-ADSCs組與ADSCs組比較，$P<0.05，$$P<0.01；ADSCs組與GFP-ADSCs組比較，nsP>0.05

3 討論

近年來干細胞療法為SS等自身免疫性疾病的治療帶來了希望，研究表明MSCs對自身免疫性疾病的治療效果很大程度上依賴于其免疫調(diào)節(jié)因子的分泌。因此，用特定的免疫調(diào)節(jié)因子對MSCs進行基因修飾可能會最大限度地發(fā)揮其治療作用[4，10]。本研究預(yù)通過構(gòu)建IL-10-ADSCs，探究其是否能增強ADSCs對Th17細胞的免疫調(diào)控作用。

眾所周知，IL-10是一種多細胞源、多功能的細胞因子，調(diào)節(jié)細胞的生長與分化，參與炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)，是目前公認的炎癥與免疫抑制因子[11]。Trittibach等[12]研究表明，IL-10可以有效減少葡萄膜炎模型小鼠前房及后房炎癥細胞的產(chǎn)生。我們的前期研究通過腺病毒介導(dǎo)IL-10轉(zhuǎn)基因的方式治療自身免疫性干眼也取得了一定的治療效果[13]。但無論是體外重組還是腺病毒介導(dǎo)都無法有效維持IL-10有效的治療濃度，長期反復(fù)注射還易產(chǎn)生抗IL-10抗體。應(yīng)用重組慢病毒載體對MSCs進行基因修飾很好地解決了上述問題，本研究中我們成功構(gòu)建了穩(wěn)定表達IL-10基因的IL-10-ADSCs，且在基因修飾后并未影響其干細胞特性。

研究表明，Th17細胞是參與自身免疫性干眼的主要細胞群[14-15]。IL-17作為Th17細胞的主要效應(yīng)分子，已被證明與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等多種自身免疫性疾病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[16]。IL-17作為細胞誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的早期啟動子，可刺激IL-6、IL-8、腫瘤壞死因子-α等細胞因子的生成，從而引起一系列的病理改變[17]。研究表明，SS患者血清中IL-17表達水平隨病情的嚴重程度升高，在SS小鼠模型中也同樣發(fā)現(xiàn)唾液腺及血清中IL-17表達水平升高[18-19]。Lin等[20]研究發(fā)現(xiàn)，IL-17基因敲除的小鼠無法誘導(dǎo)形成SS，而在過繼轉(zhuǎn)移Th17細胞后則出現(xiàn)顯著的唾液分泌量下降、自身抗體產(chǎn)生增加等SS臨床癥狀。RORC是Th17細胞分化過程中關(guān)鍵性的轉(zhuǎn)錄因子，在Th17分化及介導(dǎo)自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用。研究表明RORC缺失會阻止CD4+T細胞向Th17細胞分化，而過表達RORC的CD4+T細胞在不需要外來細胞因子的情況下即可產(chǎn)生IL-17；同時有研究表明RORC基因敲除的小鼠，自身免疫性疾病發(fā)生率下降，Th17 細胞數(shù)量也相應(yīng)減少[21-22]。在前期的研究中，我們也發(fā)現(xiàn)Th17細胞參與了自身免疫性干眼模型中炎癥反應(yīng)的發(fā)生[9，23]。

基因修飾MSCs調(diào)控Th17細胞免疫反應(yīng)已得到廣泛的研究，Mohammadzadeh等[24]研究發(fā)現(xiàn)，在自身免疫性腦脊髓炎治療過程中，與ADSCs相比，β干擾素基因修飾的ADSCs可更大程度降低IL-17的分泌。Wang等[25]探究IL-35基因修飾的MSCs在誘導(dǎo)心臟移植免疫耐受中的作用，結(jié)果表明IL-35基因修飾的干細胞在抑制Th17免疫反應(yīng)及減少移植物排斥反應(yīng)方面顯示出更大的優(yōu)勢。與上述研究結(jié)果一致，本研究為探究IL-10-ADSCs對Th17細胞的免疫調(diào)控作用，我們觀察了ADSCs、IL-10-ADSCs及GFP-ADSCs對體外激活T淋巴細胞相關(guān)炎性因子的影響，結(jié)果表明，與對照組相比，三組均可降低兔外周血Th17細胞相關(guān)細胞因子IL-17 mRNA及其轉(zhuǎn)錄因子RORC mRNA表達水平(均為P<0.05)，值得注意的是，IL-10-ADSCs對Th17細胞的抑制效果較ADSCs進一步增強(P<0.05)。

綜上所述，ADSCs在IL-10基因修飾后對Th17細胞免疫調(diào)控作用增強，這提示其對自身免疫性干眼可能具有更佳的治療效果，為我們后期探索自身免疫性干眼發(fā)病機制以及優(yōu)化治療方案做了前期實驗準備。但IL-10-ADSCs究竟通過何種途徑對Th17細胞產(chǎn)生免疫調(diào)控，其他細胞因子是否也參與其中仍有待進一步研究。