原發(fā)性肝癌患者血清微囊藻毒素水平與TNM分期的關聯及對患者預后的影響

汪富濤，徐 冰，張典朋，成 勇

原發(fā)性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一[1-3]，且我國是一個肝癌大國[4-6]，肝癌位居我國男性惡性腫瘤死亡率第二位，女性惡性腫瘤死亡率第三位[7-9]。乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）感染和黃曲霉毒素（Aflatoxin）暴露是肝癌的兩大危險因素[10-11]，但是尚不足以完全解釋肝癌的全部病因。今年來研究顯示，微囊藻毒素（microcystic，MC）暴露可能是肝癌發(fā)病的另一項重要病因[11-12]。微囊藻毒素是富營養(yǎng)化水體中藍藻所釋放的一類七肽環(huán)狀藻類毒素，是一類強烈的肝致癌物質，其中微囊藻毒素-LR（MC-LR）是較為常見且毒性最強的亞型[11]。本研究將就HCC患者血清MC-LR水平對HCC患者腫瘤分期和預后的影響做如下研究。

1 材料與方法

1.1 研究對象本研究所有臨床樣本均為2013年1月—2017年12月收集于安康市人民醫(yī)院的HCC患者共計338例，患者平均年齡為（55.5±11.9）歲，其中男性94人，女性63人；課題組前期每3個月對所有患者進行一次電話隨訪。

1.2 血清MC-LR檢測 本研究通過ELISA試劑盒（Beacon Analytical Systems Inc, 美國）對血清MC-LR水平進行檢測。血清MC-LR水平按所檢測中位數濃度分為高暴露組和低暴露組（＜0.69 ng/mL為低暴露組，≥0.69 ng/mL為高暴露組）。

1.3 統(tǒng)計分析采用χ2檢驗分析不同HCC患者臨床特征及疾病進展中血清MC-LR水平的差異，采用K-M法繪制生存曲線，用log-rank檢驗不同組患者生存時間之間的差異。統(tǒng)計過程使用實驗SPSS 19.0軟件運行，所有檢驗均為雙側檢驗，α=0.05，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 HCC患者血清MC-LR水平 本課題通過ELISA方法檢測結果顯示，HCC患者血清MC-LR水平中位數為0.69 ng/mL（Q25=0.33 ng/mL，Q75=0.97 ng/mL）。

2.2 不同TNM分期HCC患者血清MC-LR水平對比TNM分期越晚的HCC患者，其血清MC-LR平均濃度顯著升高（F=7.343，P＜0.001），通過兩兩之間比較得出，Ⅰ期與Ⅲ期（P=0.020），Ⅰ期與Ⅳ期（P＜0.001），Ⅱ期與Ⅳ期（P＜0.001），Ⅲ期與Ⅳ期（P=0.001）差異具有統(tǒng)計學意義，見表1。

2.3 HCC患者血清MC-LR水平與TNM分期之間的相關性經kendall' s tau 相關性檢驗分析發(fā)現，HCC患者血清MC-LR水平與TNM分期之間呈明顯正相關（γ=0.274，P＜0.001），見表2。

表1 不同TNM分期HCC患者血清MC-LR平均濃度的比較

表2 HCC患者血清MC-LR水平與TNM分期之間的相關性

2.4 血清MC-LR水平與HCC患者臨床特征之間的關系 通過分析血清MC-LR水平與HCC患者臨床特征之間的關系可見，MC-LR水平與HCC患者的年齡（P=0.003），性別（P=0.007），飲酒（P=0.002），腫瘤臨床分期（P＜0.001），淋巴結轉移（P＜0.001），遠端轉移（P=0.002）及HBV感染（P=0.016）相關見表3。

2.5 血清MC-LR水平與HCC患者預后之間的關系 在血清MC-LR較高和較低水平的HCC患者具有相同手術率的前提下，通過進一步分析血清MC-LR水平與HCC患者預后之間的關系，發(fā)現血清MC-LR水平較高的HCC患者生存期明顯較低表達患者生存期短（χ2=5.578，Plog rank=0.018），見圖1。

3 討論

我國作為一個HCC大國[13-14]，其發(fā)病率約占全世界的54%[11]。目前對于HCC致病因素的研究主要集中在HBV和AF，然而MC-LR作為HCC致病因素的研究已成為近年來的新熱點，研究結論明確證實MC-LR和HCC具有關聯性[11]，但是仍局限于樣本量偏小等不足。本研究收集并分析了我院2013—2017年確診HCC患者的血液標本，通過ELISA方法檢測血液標本中MC-LR的含量并與患者臨床特征及其預后進行關聯分析，研究結果發(fā)現HCC患者血清中MC-LR含量與年齡、性別、飲酒、腫瘤臨床分期、淋巴結轉移、遠端轉移和HBV感染相關，這與先前的文獻報道結果一致[15-16]。

表3 血清MC-LR水平與HCC患者臨床特征之間的關系

圖1 血清MC-LR水平與HCC患者預后之間的關系

MC是水體富營養(yǎng)化后藍藻水華產生的次生代謝物，其具有強烈的肝臟毒性。目前MC-LR被歸為2B級致癌物，將MC-LR釋放后可入水，蓄積在動物體內，并沿食物鏈向高營養(yǎng)級轉移，進而人群可通過飲食等途徑暴露。MC毒性作用的靶器官主要是肝和腎，同位素示蹤結果表明靜脈注射、腹腔注射和口服進入小鼠體內的125I-MCLR，70%以上均分布在肝臟和腎臟。

本研究中發(fā)現，血清MC-LR含量與HCC患者年齡相關，可以推測MC-LR在人體中的作用存在類似于持久性有機污染物的生物累積效應[17]，年齡越大，接觸暴露物質時間越久，危害愈大。本研究發(fā)現HCC患者血清MC-LR含量與性別及其飲酒相關，可考慮不同性別從事不同工種及生活習慣差異所造成的暴露差異[18]，但本研究因資料不全，未完全統(tǒng)計到納入本研究的HCC患者的職業(yè)情況及生活習慣相關數據，尚不能證實此觀點。本研究還發(fā)現HCC患者血清MC-LR含量與其臨床分期、淋巴結轉移和遠端轉移相關，與農清清等[12,19-21]的系列研究相符，其研究發(fā)現MC-LR能夠促進肝細胞惡性轉化，并促進細胞遷徙和轉移。另，本研究還發(fā)現血清MC-LR含量與HBV相關，眾所周知，HBV感染是造成肝癌的首要危險因素，本研究發(fā)現其與血清MC-LR含量相關，可推測MC-LR與HBV感染存在協同效應或相加效應，或可聯合作用促進肝細胞惡性轉化及癌變。

本研究通過大樣本HCC患者血清標本檢測發(fā)現HCC患者血清MC-LR含量與年齡，性別，飲酒，腫瘤臨床分期，淋巴結轉移，遠端轉移及HBV感染相關，但未能從分子水平驗證上述結論，尚不明確其中的分子機制，是本研究的不足之處。