養(yǎng)殖環(huán)境和降雨對海水貝類富集微生物能力的影響

陳瑜 金雷 朱敬萍

摘要 對同一貝類養(yǎng)殖生產(chǎn)區(qū)域內(nèi)，生長環(huán)境中影響貝類微生物富集的主要因素及持續(xù)降雨對貝類中微生物含量的影響進行了研究。結(jié)果表明，養(yǎng)殖水質(zhì)的變化在一定程度上影響貝類富集大腸桿菌，而底泥中微生物的變化對貝類富集大腸桿菌的影響并不直接;持續(xù)降雨后遇到晴天，泥蚶富集微生物的能力加強，貝肉內(nèi)大腸桿菌群和菌落總數(shù)偏高;在持續(xù)降雨期間，縊蟶體內(nèi)大腸桿菌群和菌落總數(shù)明顯偏高，特別是在持續(xù)降雨后遇到晴天時菌落總數(shù)顯著增長。

關(guān)鍵詞 貝類;微生物;富集能力;持續(xù)降雨;養(yǎng)殖環(huán)境

中圖分類號 S917.1文獻標(biāo)識碼 A

文章編號 0517-6611（2019）19-0115-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.19.034

Abstract This paper investigated the main influencing factors of microbial enrichment?? capacity in the growth environment of shellfish in the same aquaculture environment of shellfish and studied the effects of continuous rainfall on the microbe content in shellfish. The results showed that the changes of water quality affected the enrichment of Escherichia coli in shellfish to some extent，but the changes of microbe in the sediment had no direct effect on the enrichment of E. coli in shellfish. The microbial enrichment capacity of Tegillarca granosa was higher and the amount of E. coli and total amount of bacterial colonies increased in shellfish in sunny days after continuous rainfall. During the continuous rainfall period，the amount of E. coli and total amount of bacterial colonies were obviously higher in S.constricta. Especially， the total amount of bacterial colonies obviously increased in the sunny days after continuous rainfall.

Key words Shellfish;Microbe;Enrichment capacity;Continuous rainfall;Aquaculture environment

隨著我國沿海城市工業(yè)的迅速發(fā)展，人口向城市流動，向海洋排放的廢棄物日益增多，使部分水域受到不同程度污染[1]。貝類的生長位置比較穩(wěn)定，一旦遇到水質(zhì)污染，很難不對貝類生長造成影響[2]。加上雙殼貝類屬于濾食性生物，在濾食餌料生物的同時，也將水中的有害物質(zhì)吸入體內(nèi)，食用不清潔貝類極易引發(fā)疾病，從而局部暴發(fā)食品中毒事件[3-4]。我國政府近年來對此十分重視，多次對沿海地區(qū)部分經(jīng)濟貝類的衛(wèi)生狀況開展大規(guī)模調(diào)查研究，采取多種措施，加強對貝類的衛(wèi)生管理，確保貝類的食用安全。為保障消費者食用貝類產(chǎn)品的衛(wèi)生和安全，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)局從2003年起，對我國主要貝類養(yǎng)殖海域的環(huán)境狀況以及養(yǎng)殖貝類衛(wèi)生狀況進行了分類管理工作[5]。同時，經(jīng)過多年的貝類劃型工作和長期的總結(jié)經(jīng)驗發(fā)現(xiàn)，對于同一貝類養(yǎng)殖生產(chǎn)區(qū)域內(nèi)，生長環(huán)境中影響貝類微生物富集的主要因素及持續(xù)降雨對貝類中微生物含量的影響尚不清楚。筆者研究了影響貝類微生物富集的主要環(huán)境因素，探討了持續(xù)降雨環(huán)境對貝類富集微生物的影響，以期進一步完善貝類養(yǎng)殖生產(chǎn)區(qū)劃型工作方案，為闡明品種差異對貝類監(jiān)測和劃型結(jié)果的影響提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

隔水式恒溫培養(yǎng)箱（型號GHP -9270）;智能光照培養(yǎng)箱（型號GXZ）;生物安全柜（型號BSC-1000 ⅡA2）;立式壓力蒸汽滅菌器（型號YXQ-LS-50G）;其他實驗室常用設(shè)備。

1.2 試材與試劑

月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯、EC肉湯（Escherichia coli broth）、乳糖蛋白胨肉湯、伊紅美藍（EMB）瓊脂、營養(yǎng)瓊脂、平板計數(shù)瓊脂（PCA）、2216E瓊脂、HBI生化鑒定試劑盒均購自青島海博生物技術(shù)有限公司。所有培養(yǎng)基均需在121 ℃下高壓滅菌20 min;其余均為實驗室常用試劑。

1.3 測定項目與方法 大腸桿菌按照GB 4789.38—2012《食品微生物學(xué)檢驗 大腸埃希氏菌計數(shù)》測定;菌落總數(shù)按照GB 4789.2—2010《食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定》測定。

1.3.1 海水中糞大腸菌群和細菌總數(shù)的檢測。參照GB17378.7—2007《海洋監(jiān)測規(guī)范 第7部分近海污染生態(tài)調(diào)查和生物監(jiān)測》。

1.3.2 底泥微生物檢測。取25 g底泥樣品放入盛有225 mL磷酸鹽緩沖液的玻璃瓶內(nèi)，搖勻靜置后取上清液進行底泥微生物檢測，具體檢測方法參考海水中糞大腸菌群和細菌總數(shù)的檢測方法。

1.4 方法

1.4.1 養(yǎng)殖環(huán)境的影響因素試驗。

2018年7—9月，在對混合養(yǎng)殖圍塘進行3次貝類樣品抽樣的同時，抽取海水養(yǎng)殖圍塘中的水和底泥。龍灣1號、2號塘均位于溫州龍灣區(qū)永興五溪鎮(zhèn)，除底泥參數(shù)不同外，水體為同一海水水體。選取龍灣1號、2號塘為試驗塘，并以2塘中養(yǎng)殖品種文蛤為研究貝類，選取易受環(huán)境影響的大腸桿菌進行試驗。在試驗期間，養(yǎng)殖戶在7、8、9月對養(yǎng)殖塘換水1次，換水后7 d進行抽樣檢測。

1.4.2 降雨對貝類微生物含量的影響。2018年11月9日至11月23日，每天定時在樂清市蒲岐鎮(zhèn)東門外村、清江鎮(zhèn)蔡岙村養(yǎng)殖場采集泥蚶、縊蟶樣品和水體樣品進行檢測，并記錄每天的天氣狀況[平均氣溫為（20±2）℃]，連續(xù)采樣監(jiān)測15 d。試驗結(jié)束時，記錄試驗結(jié)果，并繪制微生物的變化曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 水質(zhì)對貝類富集微生物的影響

從圖1、2可以發(fā)現(xiàn)，2018年7—9月，水體中糞大腸菌群和細菌總數(shù)先減少后增加，2個養(yǎng)殖塘中文蛤體內(nèi)的大腸桿菌數(shù)也隨之增加、減少。特別是在9月，大腸桿菌數(shù)顯著增加。因此，養(yǎng)殖水質(zhì)的變化在一定程度上影響了貝類富集大腸桿菌。

2.2 底泥對貝類富集微生物的影響 從圖1可以發(fā)現(xiàn)，在7月、8月2號塘文蛤中大腸桿菌數(shù)要比1號塘多，9月則正好相反。從圖3可以看出，試驗期間1號塘中底泥中糞大腸菌群和細菌總數(shù)均比2號塘多。因此，底泥中微生物的變化對貝類富集大腸桿菌的影響并不直接。由此推測，水體中微生物的變化對貝類富集大腸桿菌的影響比底泥微生物的變化更為直接。

2.3 持續(xù)降雨對貝類微生物含量的影響

從圖4可以看出，持續(xù)降雨對泥蚶富集微生物有一定影響[6-8]。以貝類一類生產(chǎn)區(qū)和二類生產(chǎn)區(qū)的分界點（大腸桿菌數(shù)2 300 MPN/kg）為臨界值，超過2 300 MPN/kg的日期分別為11月10日、18日、22日和23日，其大腸桿菌數(shù)分別為9 300、4 300、9 300和9 300 MPN/kg，其余日期大腸桿菌數(shù)均不高于2 300 MPN/kg。結(jié)合天氣情況發(fā)現(xiàn)，11月10日、18日、22日和23日均為多云或晴天，并且此前幾天都有明顯的降雨過程。此外，這4天相應(yīng)的菌落總數(shù)分別為75.0×103、44.0×103、9.4×103和15.8×103 CFU/g。因此，持續(xù)降雨后遇到晴天，泥蚶富集微生物的能力加強，貝肉內(nèi)大腸桿菌和菌落總數(shù)偏高。

從圖5可以看出，在持續(xù)降雨監(jiān)測的幾天中，縊蟶樣品中的大腸桿菌數(shù)一直偏高。以貝類二類生產(chǎn)區(qū)和三類生產(chǎn)區(qū)的分界點（大腸桿菌數(shù)46 000 MPN/kg）為臨界值，超過46 000 MPN/kg的天數(shù)有10 d。此外，菌落總數(shù)明顯偏高的日期為

11月9日、10日、18日和23日，分別為132×103、471×103、146×103和117×103 CFU/g。這幾天均為多云或晴天，氣溫偏高。因此，在持續(xù)降雨期間，縊蟶中大腸桿菌數(shù)和菌落總數(shù)明顯偏高，特別是在持續(xù)降雨后遇到晴天，菌落總數(shù)增長顯著。結(jié)合圖6和圖7水體中糞大腸菌群和細菌總數(shù)的變化，究其原因，是因為海洋是地表徑流最終的匯入場所，灘涂貝類養(yǎng)殖區(qū)屬于近海養(yǎng)殖區(qū)，受地表徑流匯入的影響最為直接，而且地表徑流量會受污染源（生活污水、工業(yè)廢水等）的影響[9-11]。持續(xù)降雨導(dǎo)致地表徑流快速涌入近海，將富含大量微生物的水體帶入灘涂貝類養(yǎng)殖區(qū)，加上雨后天晴，氣溫升高，微生物快速生長。水體是貝類生長的直接外部環(huán)境，是貝類富集微生物的外部因素，水體中微生物數(shù)量的增加最終會導(dǎo)致貝類體內(nèi)微生物數(shù)量的增加。

3 結(jié)論

通過抽樣檢測貝類養(yǎng)殖圍塘中水體和底泥的微生物含量，確定影響貝類微生物富集的直接因素。結(jié)果表明，養(yǎng)殖水體中糞大腸菌群和細菌總數(shù)的變化與貝類體內(nèi)大腸桿菌含量存在一定的正相關(guān)，而底泥中微生物的變化對貝類富集大腸桿菌的影響并不直接。因此，水體中微生物的變化對貝類富集大腸桿菌的影響比底泥更為明顯。在持續(xù)降雨期間，連續(xù)每天對養(yǎng)殖場泥蚶、縊蟶樣品及水體進行微生物檢測，結(jié)果表明持續(xù)降雨后遇到晴天，泥蚶富集微生物的能力加強，貝肉內(nèi)大腸桿菌和菌落總數(shù)偏高。對縊蟶而言，在持續(xù)降雨期間其大腸桿菌數(shù)和菌落總數(shù)明顯偏高，特別是在持續(xù)降雨后遇到晴天，菌落總數(shù)顯著增長。

參考文獻

[1]HO B S W，TAM T Y.Natural depuration of shellfish for human consumption：A note of caution[J]. Water research，2000，34（4）：1401-1406.

[2] MURCHIE L W，CRUZROMERO M，KERRY J P，et al. High pressure processing of shellfish：A review of microbiological and other quality aspects[J].Innovative food science and emerging technologies，2005，6（3）：257-270.

[3] 蔡友瓊，喬慶林，徐捷.我國貝類衛(wèi)生現(xiàn)狀及貝類凈化概況[J].漁業(yè)現(xiàn)代化，2002（6）：7-9.

[4] OLIVERIA J，CUNHA A，CASTILHO F，et al. Microbial contamination and purification of bivalve shellfish：Crucial aspects in monitoring and future perspectivesA minireview[J].Food control，2011，22（6）：805-816.

[5] 劉歡，宋懌，馬兵，等.國內(nèi)外養(yǎng)殖貝類質(zhì)量安全管理比對及我國貝類質(zhì)量安全管理探討分析[J].中國水產(chǎn)，2012（4）：30-33.

[6] 李帥軍，郭劍芬，吳東梅，等.隔離降雨對米櫧天然林土壤微生物生物量和酶活性的影響[J].亞熱帶資源與環(huán)境學(xué)報，2018，13（1）：17-25.

[7] 李旺霞，陳彥云，陳科元，等.不同降雨量對雨養(yǎng)農(nóng)業(yè)區(qū)土壤酶活性和土壤微生物的影響[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報，2015，46（9）：1579-1583.

[8] 高沛力.雨季對海水養(yǎng)殖的影響及應(yīng)對措施[J].河北漁業(yè)，2014（10）：21-22.

[9] 徐開發(fā).灘涂貝類養(yǎng)殖環(huán)境中的污染物與環(huán)境問題展望[J].鄉(xiāng)村科技，2016（18）：96.

[10] 林巨華.海洋灘涂貝類養(yǎng)殖環(huán)境及病害防治研究[J].湖南農(nóng)機，2014，41（7）：163-164.

[11] 劉斌，陶瑩，黨曉霞.灘涂養(yǎng)殖對海洋生態(tài)系統(tǒng)的影響[J].創(chuàng)新，2010（1）：58-60.