結(jié)直腸炎合并關(guān)節(jié)病患者HLA-B27表達(dá)情況、VAS評分和ESR的相關(guān)性分析

李文清，鄧 飛，王福祖，余大蓮

(青海省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，青海西寧 810000)

結(jié)直腸炎可表述為結(jié)腸炎和直腸炎，它們是結(jié)腸、直腸內(nèi)由各種因素引起的持續(xù)性消化系統(tǒng)疾病，癥狀包括腹部疼痛、腹瀉、便血或其他更嚴(yán)重的癥狀[1-3]。其中約30%患炎性腸病(克羅恩病或潰瘍性結(jié)腸炎)人群患有直腸炎，因而本文中合并探討[4]。上述疾病引發(fā)因素很多，比如自身免疫反應(yīng)、免疫功能異常、感染、癌癥放射治療、抗菌藥物的使用、結(jié)直腸手術(shù)并發(fā)癥、不潔的飲食習(xí)慣和性行為等[2-3,5]。關(guān)節(jié)病包括各種骨關(guān)節(jié)疾病，如肩周炎、骨質(zhì)增生、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)等，其中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎也與自身免疫異常相關(guān)[6]。人白細(xì)胞抗原亞型B27(HLA-B27)作為人類主要組織相容性復(fù)合物的表達(dá)產(chǎn)物，在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮作用，因而筆者猜測HLA-B27表達(dá)與上述疾病密切相關(guān)[7]。故本研究旨在驗(yàn)證上述猜測并分析其與視覺模擬評分法(VAS)的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月至2019年1月本院診治的結(jié)腸炎和/或直腸炎患者，將符合標(biāo)準(zhǔn)的93例納入研究，作為觀察組，其中男女性比例為49∶44，年齡平均(46.71±15.88)歲，潰瘍性結(jié)腸炎38例，非特異性結(jié)腸炎(UC)17例，慢性直腸炎25例，克羅恩病13例；慢性滑膜炎10例，RA 42例，外周關(guān)節(jié)炎34例，骶髂關(guān)節(jié)炎7例。選取同期僅患腸炎和/或直腸炎患者50例作為對照組，年齡平均(45.41±15.60)歲，潰瘍性結(jié)腸炎18例，UC 12例，慢性直腸炎11例，克羅恩病9例。另外選取同期于本院就診健康人資料50例作為健康對照組，男女性比例為32∶28，年齡平均(42.45±16.73)歲。兩組一般資料差異具有可比性(P>0.05)。

1.2納入和排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：有腹痛、腹瀉、便血等癥狀；符合結(jié)腸炎或直腸炎或克羅恩病診斷標(biāo)準(zhǔn)[8-10]，但克羅恩病需發(fā)生于結(jié)腸或直腸；伴有關(guān)節(jié)炎；符合相關(guān)疾病(如RA)診斷標(biāo)準(zhǔn)[11]；未進(jìn)行相關(guān)治療或藥用停止1個(gè)月以上。排除標(biāo)準(zhǔn)：未滿18周歲；中斷參與研究者；克羅恩病發(fā)于回腸或胃腸道其他部分者；曾行膝關(guān)節(jié)置換術(shù)者；病例資料不完全；患其他臟器功能不全或嚴(yán)重疾病；曾患結(jié)直腸腫瘤者；患內(nèi)分泌疾?。槐硎霾磺寤蚓裾系K者。

1.3方法

1.3.1HLA-B27的檢測 于檢測日清晨(8:30前)抽取全部患者空腹肝素靜脈血5 mL置于抗凝管，其中一部分低溫離心后取上清，-20 ℃保存待測。另取500 μL血樣使用DNA抽提試劑盒抽提DNA，根據(jù)已經(jīng)公布的HLA-B27的DNA序列設(shè)計(jì)引物，外送合成后以PCR加瓊脂糖凝膠電泳法檢測血樣中目的DNA的表達(dá)情況，引物和反應(yīng)體系如下。引物F：5′-CAG TCT GTG CCT TGG CGT TGC-3′，引物R:5′-GGC TAC GTG GAC ACG CT-3′。Taq酶1.0 μL，DNA模板2.0 μL，引物各0.6 μL，dNTPs 1.6 μL，PCR Buffer 2.0 μL，dd H2O 12.2 μL。上述所用試劑和試劑盒分別購于博日和利德曼公司。

1.3.2VAS評分標(biāo)準(zhǔn) 依據(jù)受認(rèn)可的VAS評分評定法，即將疼痛按0至10分進(jìn)行分級，其中0分表示無痛，10分表示無法忍受的劇痛，其他分級依據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)表示不同疼痛等級。0～3分表示輕度疼痛，4～6分表示中度疼痛，大于7分表示重度疼痛。全部受試者均按此方法判斷疼痛感受。

1.3.3影像檢查 對全部患者患病關(guān)節(jié)進(jìn)行影像檢查，暴露患處，利用X線檢查病變情況并記錄相關(guān)結(jié)果。利用Kellgren-Lawrence標(biāo)準(zhǔn)將患者患處損傷情況進(jìn)行分級，其中1級關(guān)節(jié)間隙狹窄不明顯，邊緣可能存在骨贅；2級關(guān)節(jié)間隙狹窄不明顯，邊緣少年骨贅；3級關(guān)節(jié)間隙狹窄，中等量骨贅存在，邊緣少量硬化；4級關(guān)節(jié)間隙狹窄明顯，存在大量骨贅，邊緣硬化嚴(yán)重，關(guān)節(jié)存在形變。

1.3.4其他指標(biāo)檢測 以紅細(xì)胞沉降率(ESR)、C反應(yīng)蛋白(CRP)和血小板計(jì)數(shù)(PLT)表征患者關(guān)節(jié)病活動(dòng)，ESR使用魏氏法檢測， PLT使用全自動(dòng)血細(xì)胞儀(BC6800，Mindray公司)檢測，CRP使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測其于血清中水平，檢測試劑盒購于利德曼公司。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 手工剔除無效信息(信息缺失比例>20%)后錄入Epidata建立數(shù)據(jù)庫，后導(dǎo)入SPSS22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。病例一般特征采用描述性統(tǒng)計(jì)指標(biāo)進(jìn)行分析，采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或兩獨(dú)立樣本秩和檢驗(yàn)比較兩組計(jì)量間資料的差異，等級資料在經(jīng)過半定量化處理后以及基于率和構(gòu)成比的比較均采用χ2檢驗(yàn)；依據(jù)數(shù)據(jù)是否服從二元正態(tài)分布分別采用Spearman或Pearson相關(guān)分析各監(jiān)測指標(biāo)間的相關(guān)性。如無特殊說明，顯著性水準(zhǔn)α=0.05，所有P值均表示雙側(cè)概率。

2 結(jié) 果

2.1三組患者指標(biāo)對比 三組HLA-B27陽性率、VAS評分和ESR等指標(biāo)均存在明顯差異(P<0.05)，其中觀察組各指標(biāo)水平最高，對照組其次，健康對照組最低。見表1。

表1 兩組患者指標(biāo)對比

注：與觀察組相比，aP<0.05；與對照組相比，bP<0.05

2.2不同VAS評分患者HLA-B27表達(dá)情況對比 觀察組HLA-B27陽性患者大部分疼痛感中度至重度，而HLA-B27陰性患者重度疼痛較少，大部分為輕度至中度疼痛，故觀察組HLA-B27陽性患者VAS評分明顯高于HLA-B27陰性患者(P<0.05)；對照組患者HLA-B27是否呈陽性與VAS分級分布無明顯關(guān)聯(lián)(P>0.05)，且其VAS分級分布與觀察組存在明顯差異(P<0.05)，見表2。

2.3HLA-B27表達(dá)與關(guān)節(jié)病變情況相關(guān)性 觀察組患者Kellgren-Lawrence分級均大量落于2至3級間，4級患者均不常見；HLA-B27陽性組未見1級患者，而陰性組1級占13.2 %，兩組存在明顯差異(P<0.05)，同時(shí)兩組整體Kellgren-Lawrence分級分布存在明顯差異(P<0.05)。對照組患者Kellgren-Lawrence分級大量落于1級，不論是HLA-B27陽性與否，均與觀察組分布情況差異顯著(P<0.05)。見表3。

表2 不同VAS評分患者HLA-B27表達(dá)情況對比[n(%)]

注：與觀察組HLA-B27陽性相比，aP<0.05；與觀察組HLA-B27陰性相比，bP<0.05

表3 HLA-B27表達(dá)與關(guān)節(jié)病變情況相關(guān)性

注：與觀察組HLA-B27陽性相比，aP<0.05；與觀察組HLA-B27陰性相比，bP<0.05

2.4結(jié)直腸炎合并關(guān)節(jié)病患者HLA-B27表達(dá)與VAS評分的關(guān)聯(lián) HLA-B27陽性結(jié)直腸炎合并關(guān)節(jié)病患者全部觀察到關(guān)節(jié)病變情況(Kellgren-Lawrence 2-4級)，94.2%(49/52)患者VAS評分大于等于4分。

3 討 論

HLA-B27有染色體6上主要組織相容性復(fù)合體(MHC)中B基因編碼的I類表面抗原，呈遞抗原肽(來自自身和非自身抗原)到T細(xì)胞[12]。研究表明其與強(qiáng)直性脊柱炎、炎性腸炎和關(guān)節(jié)炎等炎性疾病顯著相關(guān)[12]。本研究選取結(jié)直腸炎合并關(guān)節(jié)病患者作為觀察組，結(jié)直腸炎患者作為對照組，分析其HLA-B27陽性表達(dá)發(fā)現(xiàn)，觀察組患者陽性表達(dá)率明顯更高。同時(shí)兩組陽性表達(dá)均高于健康對照組6.0 %的陽性表達(dá)率，已有的報(bào)道結(jié)果一致[13]。HLA-B27陽性率高表達(dá)表示患者HLA-B27表達(dá)異常，也表征患者體內(nèi)抗原肽呈遞過程發(fā)生異常。MHCⅠ類呈遞異常賦予受脅迫細(xì)胞逃脫CD8+T細(xì)胞識(shí)別的能力，從而影響CD8+T細(xì)胞應(yīng)答[14]。本研究中納入的結(jié)直腸炎和關(guān)節(jié)病病例，其病因中包含異常的機(jī)體免疫反應(yīng)，故上述結(jié)果與患者體內(nèi)免疫反應(yīng)異?，F(xiàn)象一致。有證據(jù)顯示，在病原體入侵后，外源肽片段通過MHCⅠ類蛋白呈遞給CD8+T細(xì)胞，響應(yīng)中的CD8+T細(xì)胞分泌靶向并殺死呈遞特異性MHC-抗原復(fù)合物的細(xì)胞的細(xì)胞因子[15-16]。從MHC識(shí)別抗原開始，機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答和反應(yīng)。故由患者PLT、 ESR和血清CRP水平異常，可得知觀察組和對照組患者疾病活動(dòng)活躍。

本課題組利用VAS評分和X線檢查后Kellgren-Lawrence分級表征患者關(guān)節(jié)病嚴(yán)重程度，根據(jù)分組進(jìn)行對照后發(fā)現(xiàn)，合并關(guān)節(jié)病的患者VAS評分和Kellgren-Lawrence分級分布情況完全異于不合并關(guān)節(jié)病患者。合并關(guān)節(jié)病HLA-B27陽性表達(dá)患者，VAS評分明顯更高，其中、重度疼痛患者明顯更多；相對而言，陰性表達(dá)患者VAS評分更低，大部分患者疼痛為輕度和中度。在不合并關(guān)節(jié)病的結(jié)直腸炎患者中，HLA-B27是否陽性表達(dá)似乎不對VAS評分分布造成影響。因此，可以推測，HLA-B27陽性表達(dá)患者VAS評分更高，即疼痛更為明顯。換言之，疾病活動(dòng)程度活躍的患者中HLA-B27陽性表達(dá)的概率更高。當(dāng)然不能排除個(gè)人疼痛忍受程度差異，但上述結(jié)論可能在本研究分析疾病中具有代表性。

為了佐證筆者的觀點(diǎn)，本研究用影像學(xué)方法檢查了兩組(觀察組和對照組)患者受累關(guān)節(jié)的受損情況，結(jié)果顯示，在合并關(guān)節(jié)病得到患者中，HLA-B27是否陽性表達(dá)影響其受累關(guān)節(jié)受損情況。本課題組觀察到，在HLA-B27陽性表達(dá)患者中，受累關(guān)節(jié)Kellgren-Lawrence分級明顯高于陰性表達(dá)患者。受累關(guān)節(jié)損害越嚴(yán)重，患者可能感受到的疼痛便越劇烈，與VAS評分表征結(jié)果一致。

4 結(jié) 論

雖然本文就結(jié)直腸炎合并關(guān)節(jié)炎患者HLA-B27表達(dá)情況進(jìn)行了闡述，但由于病例資料限制，僅利用VAS評分和Kellgren-Lawrence分級對關(guān)節(jié)炎情況進(jìn)行表征。下一步，擬收集更多病例資料，以影像學(xué)表征患處病變情況，在聯(lián)系HLA-B27表達(dá)情況進(jìn)行研究。綜上所述，結(jié)直腸炎合并關(guān)節(jié)病患者中HLA-B27陽性表達(dá)水平異常，其陽性表達(dá)與關(guān)節(jié)受累有一定關(guān)聯(lián)，即陽性表達(dá)患者VAS評分更高，受累關(guān)節(jié)疼痛更為明顯。