隨機尿沉渣檢測對社區(qū)獲得性尿路感染診斷價值分析

田曉波,于 珊,金 靜,魯辛辛

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院，北京 100176)

尿路感染是由各種病原體入侵泌尿系統(tǒng)引起的疾病，根據(jù)感染部位可分為上尿路感染(腎盂腎炎、輸尿管炎)和下尿路感染(膀胱炎、尿道炎)[1]。尿培養(yǎng)是尿路感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，臨床上診斷社區(qū)獲得性尿路感染需要根據(jù)臨床癥狀以及尿培養(yǎng)結(jié)果，才能做出最終的診斷[2-3]。但尿培養(yǎng)對標(biāo)本的留取方法要求高[4-5]，需要嚴(yán)格的無菌操作且培養(yǎng)時間長，往往需要24 h以上,真菌感染甚至需要48 h以上[6]，患者會因此錯過最佳治療時機。尿常規(guī)中的尿沉渣檢測，標(biāo)本留取簡單，檢測的自動化程度高，耗時短，但上皮細(xì)胞、裸核的上皮細(xì)胞甚至滴蟲等[7]，因與白細(xì)胞大小相近，儀器無法區(qū)別而會被計為白細(xì)胞，造成沉渣檢測白細(xì)胞假性增高[8-9]。另外，因為男性和女性生理結(jié)構(gòu)的差異，尿沉渣檢測的影響因素也不盡相同。本研究通過對白細(xì)胞和細(xì)菌計數(shù)，分析靈敏度、特異度和一致性，旨在評估尿沉渣檢測是否可以用于尿路感染的初步診斷，以便盡早進行藥物治療[10-11]。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2017年1月至2018年6月于首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院診治的107例泌尿外科門診患者納入研究。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者有尿頻、尿急等尿路感染指征；排除孕婦及慢性腎臟疾病患者。納入研究者均行尿培養(yǎng)和隨機中段尿沉渣檢測，年齡19～71歲；男性組45例，年齡22～71歲；女性62例，年齡19～68歲。

1.2儀器與耗材 主要包括Sysmex UF1000i型尿沉渣儀、Olympus BX41型顯微鏡、白洋BY-600A型離心機、基質(zhì)輔助激光解吸-電離飛行時間質(zhì)譜儀(MALDI-TOF-MS，Bruker)、VITEK-2 Compact微生物分析系統(tǒng)(Biomerieux)、LabServ LS-C0150型CO2培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿(Oxoid)。

1.3質(zhì)控菌株 質(zhì)控菌株包括大腸埃希菌ATCC 25922、金黃色葡萄球菌ATCC 25923、糞腸球菌ATCC 29212，白色假絲酵母菌ATCC90029等。

1.4方法

1.4.1尿培養(yǎng)和鑒定 按照中國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《尿路感染臨床微生物實驗室診斷(WS/T489-2016)》進行尿培養(yǎng)，革蘭陰性桿菌菌落計數(shù)>105CFU/mL、革蘭陽性球菌計數(shù)>104CFU/ mL者有診斷意義[12]；使用質(zhì)譜儀和VITEK-2 Compact進行細(xì)菌和真菌鑒定；以尿培養(yǎng)的結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)。

1.4.2Sysmex UF1000i檢測尿沉渣 清潔尿管留取隨機中段尿10 mL，尿沉渣檢測白細(xì)胞和細(xì)菌。1 500 r/min(離心力340×g)、離心5 min，傾去上清留0.2 mL沉渣混均，吸取1滴計數(shù)白細(xì)胞和細(xì)菌，高倍鏡檢查10個視野。凡Sysmex UF1000i檢測白細(xì)胞結(jié)果與顯微鏡鏡檢不一致者需排除。白細(xì)胞參考區(qū)間為0～30/μL，細(xì)菌參考區(qū)間為0～131/μL。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS20.0軟件計算靈敏度、特異度、χ2值和Kappa系數(shù)(K值)，Kappa一致性判定標(biāo)準(zhǔn)：0.00～0.20為極低；0.21～0.40為一般；0.41～0.60為中等；0.61～0.80為高度；0.81～1.00為幾乎完全一致。

2 結(jié) 果

2.1尿培養(yǎng)和尿沉渣檢測 107例患者中，尿培養(yǎng)(金標(biāo)準(zhǔn))陽性共45例，男15例、女30例；陰性共62例，男30例、女32例。尿培養(yǎng)致病菌種類和對應(yīng)沉渣檢測結(jié)果見表1、2。男性組30例培養(yǎng)陰性患者中，白細(xì)胞陽性3例，白細(xì)胞計數(shù)均≤170/μL；細(xì)菌陽性4例，細(xì)菌計數(shù)均≤150/μL。男性組15例培養(yǎng)陽性患者中，白細(xì)胞陽性13例，細(xì)菌陽性8例。女性組32例培養(yǎng)陰性患者，白細(xì)胞陽性12例，白細(xì)胞計數(shù)均≤186/μL，細(xì)菌陽性11例，細(xì)菌值均≤260/μL；30例培養(yǎng)陽性患者，白細(xì)胞陽性22例，細(xì)菌陽性28例。

表1 尿培養(yǎng)不同結(jié)果對應(yīng)的沉渣檢測結(jié)果

續(xù)表1 尿培養(yǎng)不同結(jié)果對應(yīng)的沉渣檢測結(jié)果

注：*表示大腸埃希菌在尿培養(yǎng)3種菌中的比例≥90%；△表示屎腸球菌在尿培養(yǎng)2種菌中的比例≥95%

表2 尿培養(yǎng)陽性分離的致病菌種類

2.245例男性組 尿培養(yǎng)陽性率為33.3%(15/45)。尿沉渣檢測：白細(xì)胞陽性率為35.6%(16/45)，靈敏度為86.7%，特異度為90.0%，K=0.753；細(xì)菌陽性率為26.7%(12/45)，靈敏度為53.3%，特異度為86.7%，K=0.422，白細(xì)胞檢測靈敏度、特異度和一致性均優(yōu)于細(xì)菌檢測。見表3、4。

表3 男性組尿沉渣白細(xì)胞和尿培養(yǎng)的檢測結(jié)果(n)

表4 男性組尿沉渣細(xì)菌和尿培養(yǎng)的檢測結(jié)果(n)

2.362例女性組 尿培養(yǎng)陽性率48.4%(30/62)，白細(xì)胞陽性率54.8%(34/62)，靈敏度為73.3%，特異度為62.5%，K=0.357，細(xì)菌陽性率62.9%(39/62)，靈敏度為93.3%，特異度為65.6%，K=0.584，白細(xì)胞檢測靈敏度低于細(xì)菌檢測，特異度與細(xì)菌檢測相似，一致性低于細(xì)菌檢測，見表5、6。

表5 女性組尿沉渣白細(xì)胞和尿培養(yǎng)的檢測結(jié)果

表6 女性組尿沉渣細(xì)菌和尿培養(yǎng)的檢測結(jié)果

2.4兩組間的比較 男性組和女性組尿培養(yǎng)陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.42，P>0.05)，白細(xì)胞陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.89,0.01

3 討 論

尿培養(yǎng)作為尿路感染的金標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)本留取要求嚴(yán)格，對培養(yǎng)結(jié)果要做全面分析判斷，減少污染是保證尿液標(biāo)本質(zhì)量的關(guān)鍵,這也是困擾尿培養(yǎng)的難題。清潔中段尿是臨床最易獲得的尿液標(biāo)本，本實驗?zāi)蚺囵B(yǎng)采集方法是清潔中段尿采集法，留取中段尿液約10 mL于無菌容器中，立即送檢，采集后于0.5 h內(nèi)進行尿培養(yǎng)，但尿液標(biāo)本質(zhì)量的影響因素較多，即使導(dǎo)尿管進行導(dǎo)尿，也無法避免體內(nèi)和皮膚的正常菌污染[13-14]，因此要進行污染菌的排除。男性組30例培養(yǎng)陰性患者中，有4例培養(yǎng)出表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、糞腸球菌、白色假絲酵母菌等單一菌株，但尿培養(yǎng)細(xì)菌計數(shù)<104CFU/ mL，2例培養(yǎng)出2種或2種以上的凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)、解谷氨酸棒桿菌、草綠色鏈球菌、白色假絲酵母菌等皮膚正常菌，尿培養(yǎng)每種細(xì)菌計數(shù)均<104CFU/ mL；女性組32例培養(yǎng)陰性患者中，有7例培養(yǎng)出溶血葡萄球菌、糞腸球菌、白色假絲酵母菌、乳桿菌等單一菌株，但尿培養(yǎng)細(xì)菌計數(shù)<104CFU/ mL，3例培養(yǎng)出2種或2種以上的CNS、陰道加德納菌、草綠色鏈球菌、白色假絲酵母菌、乳桿菌等皮膚或陰道正常菌，尿培養(yǎng)每種細(xì)菌計數(shù)均<104CFU/ mL，這部分均要判斷屬于污染菌。對于男性組15例培養(yǎng)陽性患者，有1例培養(yǎng)出大腸埃希菌、白色假絲酵母菌和解谷氨酸棒桿菌等3種菌，大腸埃希菌比例≥90%，根據(jù)臨床癥狀判定致病菌為大腸埃希菌[15]；女性組30例培養(yǎng)陽性患者，有1例培養(yǎng)出屎腸球菌和乳桿菌等2種菌，屎腸球菌比例≥95%，根據(jù)臨床癥狀判定致病菌為屎腸球菌?？傮w而言，男性組比女性組尿培養(yǎng)效果更好，這與女性身體結(jié)構(gòu)特殊性有關(guān)，而且陰道等生殖器官含有大量正常菌群，對培養(yǎng)結(jié)果的判斷造成了困擾。

尿沉渣檢測對樣本的采集、檢測和結(jié)果的判讀更簡單，更快速，更有優(yōu)勢，對標(biāo)本留取要求不如尿培養(yǎng)嚴(yán)格?；颊吡羧≈卸文?，在2 h內(nèi)完成沉渣檢測，全自動批量檢測，檢測耗時短，基本上幾分鐘至十幾分鐘可檢測出白細(xì)胞和細(xì)菌。同時，細(xì)胞直方圖還可以判斷尿路感染中的白細(xì)胞類型，以及對藥物治療后療效的觀察[16]。研究中排除了孕婦及慢性腎臟疾病患者。慢性腎臟疾病患者尿液中的小紅細(xì)胞和變形紅細(xì)胞，會造成細(xì)菌、真菌檢測假陽性。男性組有1例致病菌為白色假絲酵母菌，類酵母菌計數(shù)為6 670/μL，女性組1例致病菌為熱帶假絲酵母菌，類酵母菌計數(shù)為3 154/μL，而沉渣檢測污染性真菌的類酵母菌計數(shù)均低于100/μL，尿路感染患者和非尿路感染患者類酵母菌計數(shù)呈現(xiàn)出明顯的差別。體積小的草酸鈣結(jié)晶、小紅細(xì)胞以及其他顆粒或碎塊會被檢測為類酵母菌，影響檢測結(jié)果，本實驗中107例患者中，出現(xiàn)4例小紅細(xì)胞報告為類酵母菌情形，需要用顯微鏡檢查才能鑒別[17]。

男性組尿培養(yǎng)陽性率33.3%，尿沉渣檢測白細(xì)胞陽性率35.6%，靈敏度(86.7%)和特異度(90.0%)均較高，K=0.753，與金標(biāo)準(zhǔn)比較呈現(xiàn)出高度一致性；尿沉渣檢測細(xì)菌陽性率26.7%，靈敏度(53.3%)低，特異度(86.7%)高，K=0.422，中等一致性。女性組尿培養(yǎng)陽性率48.4%，白細(xì)胞陽性率54.8%，靈敏度(73.3%)和特異度(62.5%)均較低，K=0.357，一致性一般，細(xì)菌陽性率62.9%，靈敏度(93.3%)高而特異度(65.6%)低，K=0.584，中等一致性。男性組和女性組白細(xì)胞陽性率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，細(xì)菌陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義。可見，對于男性，沉渣白細(xì)胞檢測無論靈敏度、特異度和一致性均優(yōu)于細(xì)菌檢測，白細(xì)胞檢測更有價值；對于女性，沉渣白細(xì)胞檢測靈敏度低于細(xì)菌檢測，特異度與細(xì)菌檢測相似，一致性低于細(xì)菌檢測，細(xì)菌檢測對女性尿路感染的診斷優(yōu)于白細(xì)胞檢測；對于白細(xì)胞檢測，男性白細(xì)胞陽性靈敏度、特異度和一致性均優(yōu)于女性組，白細(xì)胞檢測對男性尿路感染診斷優(yōu)于女性；對于細(xì)菌檢測，男性組靈敏度和一致性低于女性組，而特異度高于女性組，細(xì)菌檢測對男性和女性尿路感染診斷無顯著差異。

UF-1000i使用流式細(xì)胞計數(shù)法從前向散射光的發(fā)光度即可獲知細(xì)胞的大小和表面狀態(tài)等，從染色尿細(xì)胞發(fā)出的熒光能夠反映量化的細(xì)胞表面和胞質(zhì)內(nèi)的性狀，以及細(xì)胞核的性質(zhì)(核糖核酸和脫氧核糖核酸的數(shù)量)[18-19]?；诹魇郊?xì)胞計數(shù)原理分析尿樣中的5種有機成分并可定量顯示。尤其是白細(xì)胞和細(xì)菌的定量檢測，可以輔助診斷尿路感染。UF細(xì)菌檢測通道核酸熒光試劑能對尿液中的細(xì)菌進行特異性染色，能排除細(xì)胞碎片、雜質(zhì)顆粒對細(xì)菌染色的干擾。實驗中尿培養(yǎng)陰性病例中，尿培養(yǎng)非致病菌計數(shù)均<104CFU/ mL，同時沉渣細(xì)菌計數(shù)處于比較低的水平，兩者相吻合。

本實驗?zāi)蚺囵B(yǎng)陽性率為42.1%(45/107)，略高于其他學(xué)者的報道，可能與嚴(yán)格要求患者無菌留取尿培養(yǎng)樣本有關(guān)，培養(yǎng)結(jié)果主要是大腸埃希菌、銅綠假單胞菌和腸球菌為主，與其他研究相似[20]；與其他學(xué)者不同的是，本實驗著重研究了尿培養(yǎng)不同結(jié)果對應(yīng)的尿沉渣白細(xì)胞和細(xì)菌的具體數(shù)值，使得對比更加細(xì)化，同時，考慮到隨機中段尿是患者最常留取的方式，采用了尿沉渣檢查與尿培養(yǎng)不同的留取方式，更具有代表性和實用性[21]。

4 結(jié) 論

與金標(biāo)準(zhǔn)比較，男性白細(xì)胞檢測靈敏度和特異度均較高，一致性高，細(xì)菌檢測特異度高；女性組細(xì)菌檢測靈敏度高，一致性中等。隨機尿沉渣檢測對社區(qū)獲得性尿路感染有一定的診斷價值。