微粒子化學(xué)發(fā)光法在HIV抗體篩查試驗(yàn)中的應(yīng)用

邵淑麗 孫梅 李剛 王曉偉 姚繼承 宋宇 曲業(yè)敏 王明義＊

1 威海市立醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室 （山東 威海 264200）

2 威海威高生物科技有限公司 （山東 威海 264200）

內(nèi)容提要： 目的：分析微粒子化學(xué)發(fā)光法在HIV篩查試驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值。方法：采用微粒子化學(xué)發(fā)光法對(duì)本院2017年2月～2019年4月所有篩查HIV抗體的患者進(jìn)行初篩檢測(cè)，免疫印跡法（WB）對(duì)初篩陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行確證試驗(yàn)。結(jié)果：84482份血清標(biāo)本中，共篩檢出有反應(yīng)性血清86例，除拒絕做確認(rèn)的9例，其余經(jīng)WB方法進(jìn)行確認(rèn)后，63例為陽(yáng)性，2例為不確定，12例為陰性。結(jié)論：微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HIV抗體的靈敏度較高，對(duì)患者結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床資料及確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果綜合判斷。

我國(guó)的人類免疫缺陷病毒（HIV）流行有數(shù)十年，隨著感染者和臨床患者的不斷增加，流行模式表現(xiàn)復(fù)雜，艾滋病的預(yù)防控制面臨巨大的挑戰(zhàn)。因此，尋求高敏感性、特異性，又簡(jiǎn)便、快速的HIV檢測(cè)技術(shù)可以盡早發(fā)現(xiàn)HIV感染者和艾滋病患者，及早提供咨詢、治療手段[1]。微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析（MCIA)是一種新型的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，檢測(cè)樣本的S/CO值明顯高于ELISA方法，對(duì)于抗體效價(jià)較低的弱陽(yáng)性血清樣本，有利于早期發(fā)現(xiàn)HIV感染。AutolumiS 3000微粒子化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒2017年2月在本院投入使用以來(lái)，至2019年4月共檢測(cè)84482例患者血清標(biāo)本，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1.材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

2017年2月～2019年4月，威海市立醫(yī)院術(shù)前檢查患者共計(jì)84482例，其中男38434例，女46048例，年齡0～97歲。標(biāo)本收到后立即以4000r/min離心10min，然后上機(jī)檢測(cè)。

1.2 儀器和試劑

威海威高生物科技有限公司生產(chǎn)AutolumiS 3000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀及配套的微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析（MCIA)試劑，可檢測(cè)血清中抗-HIV(1+2)型抗體，質(zhì)控品和定標(biāo)液均購(gòu)自威高生物科技有限公司。HIV1+2膠體金試劑盒購(gòu)自艾博生物醫(yī)藥（杭州）有限公司，試劑盒在有效期內(nèi)使用。

1.3 方法

采用AutolumiS 3000微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)樣品中的抗-HIV(1+2)型抗體，S/CO≥1則可考慮樣本對(duì)HIV抗體有反應(yīng)性，對(duì)初次用AutolumiS 3000微粒子化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行篩查試驗(yàn)S/CO≥1有反應(yīng)性的樣本進(jìn)行4000r/min離心15min后復(fù)檢，復(fù)檢后仍為S/CO≥1有反應(yīng)性的樣本通過(guò)膠體金試驗(yàn)再次進(jìn)行復(fù)檢，將復(fù)檢至少有一種試劑呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣本送威海市疾病預(yù)防控制中心（CDC）通過(guò)免疫印跡法（WB）進(jìn)行確認(rèn)。

1.4 結(jié)果統(tǒng)計(jì)

使用Microsoft Excel對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理統(tǒng)計(jì)，再使用SPSS對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2.結(jié)果

2.1 免疫印跡法確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果

AutolumiS 3000微粒子化學(xué)發(fā)光法篩查HIV S/CO≥1有反應(yīng)性的血清樣本86份，其中9例患者拒絕做確認(rèn)試驗(yàn)，余下77份血清經(jīng)WB確認(rèn)陽(yáng)性63份，陰性12份，不確定2份，AutolumiS 3000微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HIV篩查結(jié)果與WB的符合率為81.8%。

2.2 微粒子化學(xué)發(fā)光法（MCIA）檢測(cè)不同S/CO值與免疫印跡法（WB）結(jié)果比較，比較結(jié)果見(jiàn)表1。

表1. 63例陽(yáng)性標(biāo)本MCIA及WB 試驗(yàn)結(jié)果

由表1可看出，以WB檢測(cè)結(jié)果為“金標(biāo)準(zhǔn)”，微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)S/CO值≥100時(shí)，100%為HIV陽(yáng)性。也就是說(shuō)，當(dāng)AutolumiS 3000檢測(cè)結(jié)果S/CO值＜100時(shí)，WB確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果有可能為陰性或不確定。S/CO值越低，WB檢測(cè)結(jié)果為陰性的可能性越大。

2.3 WB確證試驗(yàn)結(jié)果的條帶特征

確證試驗(yàn)為HIV陽(yáng)性的63份樣本帶型中，出現(xiàn)＞9條帶26份（41.2%），5～8條帶36份（57.1%），3～4條帶1份（1.59%）（圖1）。gp120、gp160、gp66、gp41、p24條帶出現(xiàn)的百分率最高，為100%；gp36最低，為8.7%。

圖1. WB確證HIV試驗(yàn)結(jié)果條帶特征

2.4 威海地區(qū)HIV流行狀況分析

威海地區(qū)HIV篩查的總反應(yīng)率為0.1%，WB確證試驗(yàn)HIV陽(yáng)性率0.07%，與中國(guó)疾控中心、聯(lián)合國(guó)艾滋病規(guī)劃署、世界衛(wèi)生組織聯(lián)合評(píng)估的全人群感染率9.0/萬(wàn)基本一致，說(shuō)明威海處于低流行水平。而確證HIV陽(yáng)性的63例患者中：男性53例（84.1%），女性10例（15.9%），P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；威海本地32例，占50.8%，外來(lái)人員以黑龍江、云南為主，分別占12.7%、11.1%。

3.討論

國(guó)務(wù)院辦公廳關(guān)于印發(fā)中國(guó)遏制與防治艾滋病“十三五”行動(dòng)計(jì)劃的工作目標(biāo)是最大限度發(fā)現(xiàn)感染者和患者，來(lái)自CDC的資料顯示，我國(guó)艾滋病抗體檢測(cè)的人次數(shù)從2012年的1.0億上升到2017年的2.0億。艾滋病檢測(cè)是艾滋病防治工作的重要組成部分。

本實(shí)驗(yàn)室采用AutolumiS 3000微粒子化學(xué)發(fā)光法與WB的符合率為81.8%，與雅培化學(xué)發(fā)光法的符合率相似[2]，符合率都略低，HIV抗體確證結(jié)果與篩查試驗(yàn)的符合率因篩查方法、送檢人群的不同存在較大差異[3-5]。這些樣本都來(lái)源于本院術(shù)前篩查時(shí)的HIV初篩有反應(yīng)性的血清樣本，應(yīng)屬于HIV感染的低危人群。HIV抗體檢測(cè)結(jié)果不確定見(jiàn)于HIV感染早期，本院為綜合性醫(yī)院，就診的患者中不乏自身免疫性疾病、免疫接種、妊娠、肝腎功能衰竭、其他反轉(zhuǎn)錄病毒感染等，這些會(huì)導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生類似HIV特異性抗體的蛋白成分或一些異常蛋白質(zhì)干擾引起非特異性反應(yīng)[6,7]。對(duì)結(jié)果不確定受檢者的隨訪外，實(shí)驗(yàn)室可以通過(guò)其他抗體確證試劑復(fù)檢、核酸檢測(cè)等方法做出早期診斷或排除HIV感染[8,9]。

微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)S/CO值≥100時(shí)，100%為HIV陽(yáng)性。也就是說(shuō)，當(dāng)AutolumiS 3000檢測(cè)結(jié)果S/CO值＜100時(shí)，WB確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果有可能為陰性或不確定。S/CO值＜10的樣本占WB確認(rèn)試驗(yàn)陰性結(jié)果的75%，由此可見(jiàn)S/CO值越低，WB檢測(cè)結(jié)果為陰性的可能性越大。但是國(guó)外研究顯示，化學(xué)發(fā)光法有時(shí)高S/CO值也可能為HIV假陽(yáng)性，因此進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)是必要的[10]。

從本研究結(jié)果看，AutolumiS 3000微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HIV抗體的靈敏度較高，可以滿足艾滋病抗體篩查的需要，同時(shí)假陽(yáng)性率也較高，因此我們要慎重對(duì)待每一位疑似患者。實(shí)際工作中，可以通過(guò)重新采集血樣復(fù)檢，增加HIV核酸檢測(cè)等手段排除一些非特異性反應(yīng)。針對(duì)不同的人群，采用不同的檢測(cè)策略，并結(jié)合流行病學(xué)資料綜合分析，最大限度地預(yù)防艾滋病的傳播。