秦巴山區(qū)野生樹莓抗氧化能力比較研究

孫瑩瑩

(陜西省安康市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，陜西 安康 725021)

樹莓(RubuscorchorifoliusL. f.)，是薔薇科懸鉤子屬中的一種落葉灌木的聚合漿果[1]，又名懸鉤子、三月泡、山莓等，中藥名為覆盆子，既是常用的藥用植物，又屬于第三代新興水果[2]，為藥食同源植物。樹莓在我國分布廣泛，野生資源豐富，多生于向陽山坡、溪邊、山谷、荒地和疏密灌叢中潮濕處[3]。據(jù)研究，樹莓果實(shí)營養(yǎng)豐富，含有多種維生素、氨基酸及酚類物質(zhì)[4～6]，具有抗氧化、抗菌、抗炎癥、抗腫瘤[7～9]、抗肥胖、預(yù)防心血管疾病和美白皮膚等多種功效[10～12]。樹莓果實(shí)可鮮食、也可加工成果汁、果酒、果醋、果凍、果醬、乳制品[13～18]等產(chǎn)品，甚至在香精、染料、化妝品、醫(yī)藥[19～21]等領(lǐng)域也用廣泛的應(yīng)用，發(fā)展前景十分廣闊。

目前我國栽培的樹莓品種大多引自國外，本土品種少之又少。安康位于秦巴山區(qū)，多山地，少平原，糧食產(chǎn)量低，農(nóng)民種田積極性低，適合發(fā)展特色經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)，樹莓就是其中之一。本研究共收集6種秦巴山區(qū)野生樹莓，均移栽至安康市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所野生經(jīng)濟(jì)植物資源圃。在抗寒性、抗病性、扦插成活率及產(chǎn)量等農(nóng)藝性狀都較好的前提下，選取4種為研究對(duì)象，通過測定果實(shí)中多酚、黃酮含量及還原能力，篩選出抗氧化能力較強(qiáng)的品系，為當(dāng)?shù)貥漭畠?yōu)良品種選育提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

四種樹莓果實(shí)均采自安康市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所野生經(jīng)濟(jì)植物資源圃。

福林酚試劑：上海荔達(dá)生物科技有限公司；沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品：成都曼斯特生物科技有限公司；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 美國Sigma公司；無水碳酸鈉、無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、鐵氰化鉀、三氯乙酸、三氯化鐵等常規(guī)試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-1700紫外-可見分光光度計(jì) 日本島津公司；分析天平 北京塞多利斯天平有限公司；臺(tái)式離心機(jī) 湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司；超聲波提取器 上海蘭儀實(shí)業(yè)有限公司；HH-S4恒溫水浴鍋 北京科偉永興儀器有限公司；PB-10型pH計(jì) 德國sartorius公司；202-00干燥箱 北京化玻醫(yī)療器械有限公司；移液槍 上海大龍醫(yī)療設(shè)備有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樹莓中總酚含量的測定方法 準(zhǔn)確稱取10g新鮮樹莓樣品，加入適量60%的乙醇研磨成漿后置于250mL三角瓶中，加入100 mL 60%的乙醇溶液，攪拌均勻，在超聲波提取器中75℃提取50 min。提取液以3 000 r·min-1離心20 min，上清液定容至200 mL，采用福林-酚比色法測定總酚含量[22]，以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)樣品重復(fù)三次。

1.3.2 樹莓中黃酮類化合物含量的測定方法 準(zhǔn)確稱取10 g新鮮樹莓樣品，加入適量60%的乙醇研磨成漿后置于250 mL圓底燒瓶中，加入100 mL 60%乙醇，置于水浴鍋上，70℃條件下回流提取1 h，提取液以,3 000 r·min-1離心20 min，上清液定容至200 mL。采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉比色法測定黃酮類化合物的含量[23]，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)樣品重復(fù)三次。

1.3.3 樹莓果實(shí)還原能力的測定 準(zhǔn)確稱取10 g新鮮樹莓樣品，加入適量70%的乙醇研磨成漿后置于150 mL三角瓶中，加入70 mL 70%的乙醇溶液，攪拌均勻，在超聲波提取器中40℃提取1 h，提取液以3 000 r·min-1離心20 min，上清液定容至100 mL。采用普魯士藍(lán)法，以100 mg·L-1抗壞血酸(VC)為參照[24]，進(jìn)行測定，每個(gè)樣品重復(fù)三次。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

研究用DPS軟件進(jìn)行相關(guān)性分析,圖表繪制采用Excel。

2 結(jié)果與分析

2.1 樹莓果實(shí)中總酚含量的分析

植物中的酚類物質(zhì)具有很好的抗氧化功能，一般來說總酚含量越高，其抗氧化活性就越強(qiáng)[25]。由圖1可見四種品系的野生樹莓果實(shí)中的總酚含量差異較大，其中品系2的總酚含量最高，達(dá)到379.85 mg·kg-1，其次是品系4，品系3最低。其中除了品系1和品系4外，幾種品系的野生樹莓果實(shí)相互之間總酚含量差異極顯著(p<0.01)。

2.2 樹莓果實(shí)中黃酮含量的分析

黃酮類化合物在植物體中廣泛存在，具有抗腫瘤、抗炎、保肝、抗氧化自由基等多種生物活性[26]。由圖2可見四種品系的野生樹莓果實(shí)中的黃酮含量差異較大，依然是品系2的最高，其次是品系4，品系3最低，這與總酚含量的高低排序一致。4種品系的野生樹莓果實(shí)相互之間黃酮含量差異極顯著(p<0.01)。

2.3 樹莓果實(shí)還原能力分析

還原能力也常用來評(píng)價(jià)抗氧化劑活性，其原理是樣品中的還原物質(zhì)與鐵氰化鉀反應(yīng)生成亞鐵氰化鉀，再與Fe3+反應(yīng)生成普魯士藍(lán)，在波長700 nm處有特異吸收，吸光值越大，樣品的還原能力就越強(qiáng)，即抗氧化活性也越強(qiáng)。由圖3可以看出四種品系的野生樹莓果實(shí)還原能力的強(qiáng)弱與總酚及黃酮含量排序一致，品系2最高，其次是品系4，品系3最低。4種品系的野生樹莓果實(shí)相互之間還原能力差異極顯著(p<0.01)。

2.4 總酚含量、黃酮含量及還原能力的相關(guān)性分析

由表1可以看出，四個(gè)品系的野生樹莓果實(shí)中總酚含量和黃酮含量之間相關(guān)性達(dá)顯著水平(p<0.05)，總酚含量和黃酮含量與還原能力之間都極顯著相關(guān)(p<0.01)，此分析結(jié)果說明酚類和黃酮類物質(zhì)是樹莓果實(shí)中主要的抗氧化物質(zhì)，與前人研究結(jié)果一致[27]。

圖1 不同品系的樹莓總酚含量比較分析

圖2 不同品系的樹莓黃酮含量比較分析

圖3 不同品系的樹莓還原能力比較分析

項(xiàng)目總酚含量黃酮含量VCEAC總酚含量10.92?0.97??黃酮含量0.92?10.98??VCEAC0.97??0.98??1

注：* 顯著相關(guān)p<0.05；** 極顯著相關(guān)p<0.01。

3 結(jié)論

品系2樹莓果實(shí)的總酚及黃酮含量都最高，還原能力也最強(qiáng)。品系4次之，品系3最低。

四個(gè)品系的野生樹莓果實(shí)相互之間總酚含量(其中除了品系1和品系4之間)，黃酮含量及還原能力都差異極顯著(p<0.01)。

四個(gè)品系的野生樹莓果實(shí)中總酚含量和黃酮含量之間相關(guān)性達(dá)顯著水平(p<0.05)，總酚含量和黃酮含量與還原能力之間都極顯著相關(guān)(p<0.01)。

品系2和品系4可做為優(yōu)良品系進(jìn)行人工馴化與栽培，或作為樹莓新品種選育的親本。