SYRCLE偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工具發(fā)布是否提高動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法質(zhì)量？

張維益，李艷飛，戴巖瑞，馮越，李福翰，王任淳，吳振坤，張楠，陶功財(cái)，尚志忠，張延英，馬彬，楊克虎1,,6

為規(guī)范動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究設(shè)計(jì)降低偏倚風(fēng)險(xiǎn)，2014年荷蘭SYRCLE中心（SYstematic Review Center for Laboratory animal Experimentation）發(fā)布了由Hooijmans等學(xué)者，基于Cochrane偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工具起草和制定的SYRCLE動(dòng)物實(shí)驗(yàn)偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工具[1]。SYRCLE協(xié)作組致力于該評(píng)估工具在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)評(píng)價(jià)中的應(yīng)用和推廣，旨在提高動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的內(nèi)在真實(shí)性，促進(jìn)提高其結(jié)果向臨床實(shí)踐轉(zhuǎn)化的效率[2]。自SYRCLE動(dòng)物實(shí)驗(yàn)偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工具發(fā)布以來(lái)，已經(jīng)過(guò)去了5年時(shí)間，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的發(fā)表數(shù)量依然呈現(xiàn)不斷增漲的趨勢(shì)，雖有學(xué)者基于SYRCLE工具對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)[3-6]，但至今仍不清楚是否隨著SYRCLE動(dòng)物實(shí)驗(yàn)偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工具的發(fā)布，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法質(zhì)量得到改善和提高。

因此，本研究全面收集國(guó)內(nèi)外已發(fā)表的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，全面評(píng)估動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法質(zhì)量是否隨著該評(píng)估工作發(fā)布得以改善和提高，并探索其現(xiàn)狀和存在的問(wèn)題，為后續(xù)研究的開(kāi)展提供參考，最終促進(jìn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的轉(zhuǎn)化和利用。

1 資料與方法

1.1 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn)干預(yù)類(lèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，不限制動(dòng)物種屬和干預(yù)類(lèi)型。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)重復(fù)發(fā)表的研究；自身對(duì)照研究；體內(nèi)分子機(jī)制研究；非醫(yī)學(xué)類(lèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；基于動(dòng)物細(xì)胞、組織或器官等的體外實(shí)驗(yàn)；同時(shí)納入動(dòng)物和人體的實(shí)驗(yàn)。

1.2 文獻(xiàn)檢索策略本文擬比較國(guó)內(nèi)外高影響力期刊收錄的相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是否隨著SYRCLE動(dòng)物實(shí)驗(yàn)偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工具的發(fā)布（2014年），其質(zhì)量得到改善和提高。因此，選擇CSCD和Web of Science數(shù)據(jù)庫(kù)實(shí)施全面檢索，以2014年為分界點(diǎn)，收集前后4年的數(shù)據(jù)（2011-2018）。中文檢索詞包括：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、兔、鼠、狗、猴、羊、豬、猿、猩猩、蛙、蟾蜍；英文檢索詞包括：animal experiments, in vivo, rats, pigs, swines, guinea pigs, rabbits, dogs, canines, sheep, goats, monkeys,apes, paniscus, bonobos, chimpanzees, gorillas, pongo,frogs, toads。CSCD的檢索策略見(jiàn)框1。

1.3 文獻(xiàn)篩選與資料提取由4名培訓(xùn)合格的研究者（張楠、戴巖瑞、馮越、李福翰）嚴(yán)格按照納入排除標(biāo)準(zhǔn)，獨(dú)立篩選文獻(xiàn)，兩兩交叉核對(duì)，如遇分歧則由第三方（馬彬）裁決。按照事先制定的資料提取表提取數(shù)據(jù)，資料提取的內(nèi)容主要包括：①納入研究的基本特征：第一作者、發(fā)表時(shí)間、動(dòng)物種類(lèi)、樣本量、干預(yù)措施等；②偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的關(guān)鍵要素。

1.4 文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)采用SYRCLE偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工具對(duì)納入研究的偏倚風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估，該評(píng)價(jià)工具包括10個(gè)條目（22個(gè)信號(hào)問(wèn)題）。對(duì)4名研究者（張維益、馮越、吳振坤、王任淳）進(jìn)行培訓(xùn)，使其全面掌握SYRCLE偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工具的條目?jī)?nèi)容，以確保評(píng)估結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性。

本研究主要計(jì)算10個(gè)條目的“低風(fēng)險(xiǎn)”符合率（每個(gè)條目被評(píng)價(jià)為“低風(fēng)險(xiǎn)”的文獻(xiàn)數(shù)目占相應(yīng)納入文獻(xiàn)總數(shù)的百分比），并以SYRCLE偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工具發(fā)布時(shí)間（2014年）為節(jié)點(diǎn)，對(duì)2014年前后發(fā)表的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行組間比較。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)和百分比（%），計(jì)量資料采用中位數(shù)和四分位數(shù)間距進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)篩選流程及結(jié)果初檢共獲得相關(guān)文獻(xiàn)48 309篇，排除重復(fù)、不符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)后，最終納入5987篇文獻(xiàn)。文獻(xiàn)篩選流程及結(jié)果見(jiàn)圖1。

綜上所述，采用低中頻綜合治療儀結(jié)合醫(yī)用冷敷貼治療急慢性頸肩腰腿痛，操作簡(jiǎn)單，無(wú)明顯不良反應(yīng)，臨床療效好。但也應(yīng)注意嚴(yán)格掌握適應(yīng)證，有部分患者治療后疼痛復(fù)發(fā)，難以維持持久療效，若效果欠佳，及時(shí)調(diào)整治療方案，以提高患者滿意度，減輕疼痛程度，改善患者生活質(zhì)量。

2.2 納入研究的基本特征納入研究樣本量的中位數(shù)和四分位間距分別為45.5（30，60）只。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇方面，排前3位的分別為：鼠（90.75%，5433/5987）、兔（6.03%，361/5987）和豬（1.42%，85/5987）。干預(yù)措施的分類(lèi)方面，排前3位的分別為：藥物干預(yù)（74.71%，4473/5987）、手術(shù)干預(yù)（5.70%，341/5987）和行為-飲食干預(yù)（2.05%，123/5987）（圖2～3）。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程圖

圖2 納入研究的動(dòng)物種屬

圖3 納入研究的干預(yù)措施

2.3 偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果10個(gè)條目“低風(fēng)險(xiǎn)”符合率介于0.15%～99%間，其中僅20%（2/10）的條目的“低風(fēng)險(xiǎn)”符合率高于50%，大部分條目（60%，6/10）的“低風(fēng)險(xiǎn)”符合率低于30%，其中66.67%（4/6）的條目的“低風(fēng)險(xiǎn)”符合率不足10%（表1）。

表1 納入研究的偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)結(jié)果

2.3.1 選擇偏倚（條目1-3）2014年之后發(fā)表的研究在“分配序列（條目1）”、“基線特征（條目2）”和“隱蔽分組（條目3）”的“低風(fēng)險(xiǎn)”符合率均高于2014年之前發(fā)表的研究，其中條目1和條目2在該方面的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。

2.3.2 實(shí)施偏倚（條目4-5）2014年后發(fā)表的研究在“動(dòng)物安置隨機(jī)化（條目4）”的“低風(fēng)險(xiǎn)”符合率高于2014年前發(fā)表的研究，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；但在“對(duì)動(dòng)物飼養(yǎng)者和研究者施盲（條目5）”方面正好相反，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.01）。

2.3.3 測(cè)量偏倚（條目6-7）2014年之后發(fā)表的研究在“隨機(jī)性結(jié)果評(píng)估（條目6）”和“對(duì)結(jié)果評(píng)價(jià)者施盲（條目7）”的“低風(fēng)險(xiǎn)”符合率均低于2014年前發(fā)表的研究，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。

2.3.4 失訪偏倚（條目8）2014年后發(fā)表的研究在“不完整數(shù)據(jù)報(bào)告（條目8）”的“低風(fēng)險(xiǎn)”符合率高于2014年前發(fā)表的研究，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。

2.3.5 報(bào)告偏倚（條目9）2014年后發(fā)表的研究在“選擇性結(jié)果報(bào)告（條目9）”的“低風(fēng)險(xiǎn)”符合率高于2014年前發(fā)表的研究，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.566）。

3 討論

總體而言，隨著SYRCLE工具的正式發(fā)布，已發(fā)表的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在選擇偏倚、實(shí)施偏倚、失訪偏倚和其他偏倚等條目上的“低風(fēng)險(xiǎn)”符合率均得到一定程度的提高，但在方法學(xué)質(zhì)量上仍存在一定不足。

選擇偏倚主要涉及“分配序列、基線特征以及隱蔽分組”3個(gè)條目。雖然，隨著SYRCLE工具的發(fā)布，已發(fā)表的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在這3個(gè)條目上的“低風(fēng)險(xiǎn)”符合率均得到一定改善和提高，但其實(shí)際比例均低于50%，其中分配序列方面僅為15.14%，隱蔽分組方面更是低于1%。與臨床試驗(yàn)相比，大多數(shù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的樣本量較小，并且“隨機(jī)分配”并非動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)踐模式，因此，組間動(dòng)物在一些重要的基線特征方面的差異更易影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的推斷[1]。而且，Schulz等的研究指出，實(shí)施了隨機(jī)化而未進(jìn)行隱蔽分組依然夸大治療效果30%～41%[7]。因此，今后的實(shí)驗(yàn)應(yīng)重視基線特征對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，特別是對(duì)于未實(shí)施隨機(jī)分組、或樣本量又比較小的研究。此外，應(yīng)重視和加大隨機(jī)方法和隱蔽分組方法在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中的實(shí)施和開(kāi)展，以降低選擇性偏倚。

實(shí)施偏倚主要涉及“動(dòng)物安置隨機(jī)化、對(duì)動(dòng)物飼養(yǎng)者和研究者實(shí)施盲法”2個(gè)條目。雖然2014年后發(fā)表的研究在“動(dòng)物安置隨機(jī)化”方面的“低風(fēng)險(xiǎn)”符合率得到顯著提高，但其實(shí)際比例不足30%。而在“對(duì)動(dòng)物飼養(yǎng)者和研究者施盲”方面甚至低于之前發(fā)表的研究，并未得到明顯的改善和提高。這可能與相關(guān)科研人員對(duì)實(shí)施偏倚的重視程度不夠有關(guān)，馬彬等調(diào)查研究亦顯示[8]：僅30.8%和41.4%的國(guó)內(nèi)研究人員認(rèn)為動(dòng)物安置隨機(jī)化和對(duì)動(dòng)物飼養(yǎng)者和研究者實(shí)施盲法是必要的。然而，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境包括溫度、濕度、光照和水等對(duì)研究結(jié)果有著重要的影響，隨機(jī)安置籠子或動(dòng)物，保持組間動(dòng)物飼養(yǎng)條件可比能有效減少實(shí)施偏倚[9-11]。同時(shí)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中實(shí)施盲法可以有效地減少或避免干預(yù)實(shí)施及結(jié)果測(cè)量中的偏倚，特別是對(duì)于某些主觀性指標(biāo)來(lái)說(shuō)，盲法的實(shí)施必不可少[1,12]。

測(cè)量偏倚主要涉及“隨機(jī)性結(jié)果評(píng)估、對(duì)結(jié)果評(píng)價(jià)者實(shí)施盲法”2個(gè)條目。自SYRCLE工具發(fā)布以來(lái)，2014年后發(fā)表的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在這2個(gè)條目上的“低風(fēng)險(xiǎn)”符合率甚至低于2014年前發(fā)表的研究，且其實(shí)際比例均低于5%。不同于臨床研究，一般而言，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中一名研究人員通常既負(fù)責(zé)干預(yù)的分配和管理，也負(fù)責(zé)結(jié)果評(píng)估和數(shù)據(jù)分析，因此容易導(dǎo)致主觀偏倚的產(chǎn)生[1,12]。此外，多數(shù)動(dòng)物存在晝夜節(jié)律現(xiàn)象，類(lèi)脂物代謝作用、神經(jīng)遞質(zhì)水平、藥代動(dòng)力學(xué)等均會(huì)對(duì)動(dòng)物的周期/晝夜節(jié)律產(chǎn)生影響，未隨機(jī)選擇動(dòng)物進(jìn)行結(jié)果評(píng)估可能會(huì)影響干預(yù)效果的方向和程度[13-15]。因此，今后的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究有必要采取盲法測(cè)量或保持實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的結(jié)果評(píng)價(jià)方法一致，以及注意結(jié)果評(píng)估的隨機(jī)化以減小測(cè)量偏倚。

失訪偏倚主要涉及對(duì)不完整數(shù)據(jù)的處理和報(bào)告。雖然2014年后發(fā)表的研究在失訪偏倚方面的“低風(fēng)險(xiǎn)”符合率明顯高于之前發(fā)表的研究，但在對(duì)缺失數(shù)據(jù)的處理及缺失原因的報(bào)告方面仍存在不足，忽略缺失數(shù)據(jù)或處理不當(dāng)不僅導(dǎo)致樣本量減少，甚至?xí)绊懡Y(jié)果的真實(shí)性和可靠性[16]。今后的研究應(yīng)更加重視對(duì)缺失數(shù)據(jù)是否影響結(jié)果真實(shí)性的原因的詳實(shí)報(bào)告以及對(duì)失訪數(shù)據(jù)的處理，例如參考臨床研究中使用的意向性分析法（ITT）等處理失訪數(shù)據(jù)[17]。

報(bào)告偏倚主要涉及對(duì)結(jié)果的選擇性報(bào)告。雖然2014年后發(fā)表的研究較之前發(fā)表的研究在報(bào)告偏倚方面略有提高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這可能與目前在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域?qū)τ?jì)劃書(shū)的注冊(cè)尚無(wú)任何要求有關(guān)[1]。計(jì)劃書(shū)的注冊(cè)和發(fā)表能夠增強(qiáng)研究的嚴(yán)謹(jǐn)性和透明度，從而減少偏倚，因此已有學(xué)者呼吁在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究開(kāi)始前就在相關(guān)平臺(tái)上注冊(cè)計(jì)劃書(shū)[18,19]。

其他偏倚主要涉及明顯會(huì)產(chǎn)生高偏倚風(fēng)險(xiǎn)的其他問(wèn)題，如藥品污染、資助者的不恰當(dāng)影響、分析單位錯(cuò)誤等。雖然2014年后發(fā)表的研究在上述方面得到明顯改善和提高，但其總體比例僅45.06%，其中在與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)相關(guān)的偏倚風(fēng)險(xiǎn)以及對(duì)原始種群中退出的樣本的處理方面的比例較低，今后的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究在以上兩方面還需進(jìn)一步提高。

本研究亦存在一定的局限性：①納入的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)僅來(lái)自CSCD和Web of Science數(shù)據(jù)庫(kù)，結(jié)果可能不能代表發(fā)表在其他數(shù)據(jù)庫(kù)收錄的期刊上的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法學(xué)質(zhì)量。②由于語(yǔ)言的限制，我們只納入了中英文研究。③納入研究的偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是基于文獻(xiàn)的報(bào)告內(nèi)容，我們沒(méi)有聯(lián)系作者來(lái)驗(yàn)證他們實(shí)驗(yàn)研究的具體實(shí)施細(xì)節(jié)。

綜上所述，自SYRCLE偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工具發(fā)表以來(lái)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究在選擇偏倚、實(shí)施偏倚、失訪偏倚和其他偏倚等條目上得到一定程度的提高，但方法學(xué)質(zhì)量仍存在一些問(wèn)題，其中在隨機(jī)性結(jié)果評(píng)估和盲法方面的問(wèn)題尤為突出。建議采取針對(duì)性措施進(jìn)一步推廣與使用SYRCLE動(dòng)物實(shí)驗(yàn)偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)工具，以有效指導(dǎo)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究設(shè)計(jì)與實(shí)施，提高動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量并促進(jìn)結(jié)果的轉(zhuǎn)化和利用。