• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波提取浮萍多糖工藝研究

    2019-12-04 08:41:22于忠娜王軍劉桂伶王玉梅韓榮偉
    中國獸藥雜志 2019年11期
    關(guān)鍵詞:浮萍純度超聲波

    于忠娜,王軍,劉桂伶,王玉梅,韓榮偉*

    (1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)海都學(xué)院,山東萊陽 265200;2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東青島 266109)

    浮萍(Common Duckweed Herb,Herba spirodelae)為浮萍科植物紫背浮萍(Spirodelapolyrrhiz(L.)Schleid)或青萍(LemnaminorL.)的全草,其生長周期短、繁殖快、喜陰喜濕等,其干燥的全草可以做家畜的飼料,在我國四川、浙江、湖北等地區(qū)的動物養(yǎng)殖中廣泛分布并使用[1-3]。浮萍味辛,性寒,歸肺經(jīng),有利尿消腫、發(fā)汗解表、止癢等功效。研究表明,浮萍中含有多糖、蛋白質(zhì)、樹脂、類脂、黃酮類化合物等多種物質(zhì),浮萍多糖是浮萍中重要的生物活性物質(zhì),具有免疫調(diào)節(jié)作用。而中獸藥具有價(jià)格低廉、藥物殘留少、不會產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn),因而浮萍多糖在中獸藥中的應(yīng)用越來越受重視[4]。

    國內(nèi)對浮萍多糖的提取純化方法研究較多,主要有堆熱法、超濾法等,但這些方法對設(shè)備要求較高,技術(shù)工藝繁瑣,費(fèi)用較高[5-6]。本研究利用超聲波的空化效應(yīng)增加溶劑的穿透力,輔助浮萍多糖的提取[7-8],并通過Design-Expert軟件進(jìn)行響應(yīng)面法設(shè)計(jì),優(yōu)化超聲波輔助提取浮萍多糖的最佳提取工藝。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑 浮萍干燥全草購于四川成都國際商貿(mào)城荷花池中藥材專業(yè)市場,批號:20150416;去離子水,葡萄糖,濃硫酸,苯酚,乙醇,所用試劑均為分析純,購于北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司。

    1.2 儀器與設(shè)備 FW100高速萬能粉碎機(jī),天津市泰斯特儀器有限公司;分樣篩,浙江上虞市肖金化驗(yàn)儀器廠;SB25-12DTD型超聲波清洗器,寧波新芝生物科技股份有限公司;302型電熱鼓風(fēng)干燥箱,中國山東龍口市先科儀器公司;TGL-16C高速臺式離心機(jī),上海安亭科學(xué)儀器廠;SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵,上海亞榮生化儀器廠;WFJ7200型紫外可見分光光度計(jì),上海尤尼科儀器有限公司。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 提取方法 用高速萬能粉碎機(jī)將干燥浮萍全草粉碎,過60目分樣篩,備用。準(zhǔn)確稱取1.0 g浮萍粉末,加入去離子水,靜置10 min,設(shè)定超聲功率、時(shí)間、溫度,進(jìn)行超聲波處理;超聲處理后的樣品8000 r/min離心10 min,收集上清液并抽濾,濾液中加95%乙醇(V∶V,1∶4)過夜后8000 r/min離心10 min得到沉淀;沉淀物放入60 ℃干燥箱中烘干得浮萍多糖粉末。

    1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品在105 ℃烘干至恒重后,準(zhǔn)確稱取10.0 mg,加去離子水溶解并定容至100 mL,得到濃度為0.1 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL,分別加入具塞試管中,加蒸餾水至2.0 mL,加5%苯酚1.0 mL,混勻,迅速加入5.0 mL濃硫酸,蓋上塞,立刻搖勻,室溫靜置30 min后,以空白校正零點(diǎn),用1 cm比色皿于490 nm處測定吸光度,平行3次并記錄吸光度值,作出葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。多糖組分近似等于葡聚糖,故多糖回歸方程為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程系數(shù)乘以葡萄糖與葡聚糖間的轉(zhuǎn)換系數(shù)0.9[9]。

    1.3.3 多糖提取率的測定與計(jì)算 準(zhǔn)確稱取1.0 g過分樣篩的干燥浮萍粉末,加入一定質(zhì)量的去離子水,靜置10 min,設(shè)置一定的超聲功率、超聲時(shí)間、溫度,進(jìn)行超聲波處理,將經(jīng)過超聲波處理完的樣品用臺式離心機(jī)8000 r/min離心10 min,收集上清液并抽濾。應(yīng)用苯酚-硫酸法測濾液中的多糖含量[10],多糖提取率計(jì)算方法見公式(1)。

    (1)

    式中:R為多糖提取率;c為濾液中的多糖濃度;n為稀釋倍數(shù);V為濾液總體積;m為浮萍原料質(zhì)量。

    1.3.4 產(chǎn)品純度的測定與計(jì)算 精密稱取所得浮萍多糖粉末50.0 mg,加去離子水溶解并定容至250 mL。吸取上述溶液1.0 mL加入具塞試管(蒸餾水,做空白對照),補(bǔ)水至2.0 mL,加入5%苯酚溶液1.0 mL,迅速加入5.0 mL濃硫酸,蓋上塞,立刻搖勻,靜置30 min后,于490 nm處測定吸光度。再以多糖為對照,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線求得多糖含量,計(jì)算方法見公式(2)。

    (2)

    式中:C為樣品純度;m1為產(chǎn)品中的多糖質(zhì)量;m2為待測樣品質(zhì)量。

    1.3.5 單因素試驗(yàn) 按照1.3.1浮萍多糖提取工藝流程,考察料液比、超聲波提取時(shí)間、超聲波功率、提取溫度以及提取次數(shù)等因素對浮萍多糖提取率的影響。具體操作如下:

    (1)準(zhǔn)確稱取6份干燥浮萍粉末(1.0 g/份),設(shè)定超聲波功率400 W、超聲波提取時(shí)間 80 min、超聲波提取溫度50 ℃,提取次數(shù)1次等條件下,考察1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70等不同料液比對浮萍多糖提取率的影響。

    (2)準(zhǔn)確稱取6份干燥浮萍粉末(1.0 g/份),設(shè)定料液比1∶50、超聲波功率400 W、超聲波提取溫度50 ℃、提取次數(shù)1次等條件下,考察20 min、40 min、60 min、80 min、100 min、120 min等不同提取時(shí)間對浮萍多糖提取率的影響。

    (3)準(zhǔn)確稱取6份干燥浮萍粉末(1.0 g/份),設(shè)定料液比1∶50、超聲波提取溫度50 ℃、超聲波提取時(shí)間 80 min、提取次數(shù)1次等條件下,考察250 W、300 W、350 W、400 W、450 W、500 W等不同超聲功率對浮萍多糖提取率的影響。

    (4)準(zhǔn)確稱取6份干燥浮萍粉末(1.0 g/份),設(shè)定料液比1∶50、超聲波功率400 W、超聲波提取時(shí)間 80 min、提取次數(shù)1次等條件下,考察20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃等不同提取溫度對浮萍多糖提取率的影響。

    (5)準(zhǔn)確稱取4份干燥浮萍粉末(1.0 g/份),設(shè)定料液比1∶50、超聲波功率400 W、超聲波提取時(shí)間 80 min、超聲波提取溫度50 ℃等條件下,考察1次、2次、3次、4次等不同提取次數(shù)對浮萍多糖提取率的影響。

    1.3.6 工藝優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,采用Design-Expert 8.0基于Box-Behnken中心組合的設(shè)計(jì)原理,料液比(A)、超聲時(shí)間(B)和超聲功率(C)為自變量(表1),以浮萍多糖提取率為響應(yīng)值進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)[11],優(yōu)化浮萍多糖的提取工藝,實(shí)驗(yàn)方案見表2。通過對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析,擬合如下模型:

    Y=n0A2+n1B2+n2C2+n3AB+n4AC+n5BC+

    n6A+n7B+n8C+n9

    (3)

    式中:Y為響應(yīng)值,A、B、C為自變量,n0~n9為系數(shù)[12]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 由測定結(jié)果計(jì)算出葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y=15.957x+0.00057,R2=0.99921。多糖組分近似等于葡聚糖,而葡萄糖與葡聚糖間的轉(zhuǎn)換系數(shù)為0.9,故上述方程可校正為:y=14.361x+0.00051,R2=0.99921。以多糖濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo),吸光度A為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果見圖1。

    圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 1 The standard curve

    2.2 單因素試驗(yàn)結(jié)果分析

    2.2.1 料液比對浮萍多糖提取率的影響 不同料液比對多糖提取率的影響結(jié)果見圖2。

    圖2 料液比對浮萍多糖提取率的影響Fig 2 Effect of solid-liquid ratio on the extraction rate of polysaccharides duckweed

    由圖2可知,料液比在1∶20~1∶50之間時(shí),浮萍多糖的提取率隨料液比的增大而提高,在料液比為1∶50時(shí)達(dá)到最大,之后隨料液比的增大而降低。這是因?yàn)殡S著溶劑量的增大,超聲波需要處理的液體增多,使多糖的分離效率降低,多糖的損失率增加[13],故本試驗(yàn)選擇料液比因素水平為1∶40、1∶50和1∶60。

    2.2.2 超聲波提取時(shí)間對浮萍多糖提取率的影響不同超聲波提取時(shí)間對多糖提取率的影響結(jié)果見圖3。

    圖3 超聲波提取時(shí)間多浮萍多糖提取率的影響Fig 3 Effect of extraction time on the extraction rate of polysaccharides duckweed

    由圖3可知,在超聲波提取時(shí)間試驗(yàn)條件范圍內(nèi),浮萍多糖的提取率隨著時(shí)間的延長呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢,在超聲波提取時(shí)間為60 min時(shí)達(dá)到最大。這是因?yàn)檫^長時(shí)間的超聲波處理會引起熱量積聚或機(jī)械剪切作用而破壞多糖的結(jié)構(gòu);同時(shí),提取時(shí)間的增加也會導(dǎo)致能耗增加[14],因此本試驗(yàn)選擇的超聲提取時(shí)間因素水平為40 min、60 min和80 min。

    2.2.3 超聲波功率對浮萍多糖提取率的影響 不同超聲波功率對浮萍多糖提取率的影響結(jié)果見圖4。可見,在超聲波功率試驗(yàn)條件范圍內(nèi),浮萍多糖的提取率隨著超聲波功率的增加呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢,并在超聲波功率為350 W時(shí)達(dá)到最大。這是因?yàn)槌暡üβ蔬^低,細(xì)胞破碎效能不足,而功率過大導(dǎo)致浮萍多糖結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞或者使其降解[15],所以本試驗(yàn)中的超聲波功率因素水平定為300 W、350 W和400 W。

    2.2.4 超聲波提取溫度對浮萍多糖提取率的影響不同提取溫度對多糖提取率的影響結(jié)果見圖5。

    圖4 超聲波功率對浮萍多糖提取率的影響Fig 4 Effect of ultrasonic power on the extraction rate of polysaccharides duckweed

    圖5 超聲波提取溫度對浮萍多糖提取率的影響Fig 5 Effect of ultrasonic extraction temperature on the extraction rate of polysaccharides duckweed

    由圖5可知,在超聲波提取溫度試驗(yàn)條件范圍內(nèi),浮萍多糖的提取率隨著超聲波溫度的升高呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢,并在超聲波提取溫度為50 ℃時(shí)達(dá)到最大。這是因?yàn)樘崛囟冗^高,多糖會發(fā)生降解,影響浮萍多糖的提取率[16],所以本試驗(yàn)中的最佳超聲波提取溫度選擇為50 ℃。

    2.2.5 提取次數(shù)對浮萍多糖提取率的影響 不同提取次數(shù)對多糖提取率的影響結(jié)果見圖6。

    圖6 提取次數(shù)對浮萍多糖提取率的影響Fig 6 Effect of extraction times on the extraction rate of polysaccharides duckweed

    由圖6可知,提取次數(shù)1~2次時(shí),浮萍多糖的提取率有顯著的提高,但第3、4次,浮萍多糖的提取率有提高,但不顯著,結(jié)合實(shí)際成本考慮,故本試驗(yàn)選擇提取2次為最佳提取次數(shù)。

    2.3 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果

    2.3.1 優(yōu)化實(shí)驗(yàn)因素的選取 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選取料液比、超聲時(shí)間和超聲功率為自變量,以浮萍多糖提取率為響應(yīng)值進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)(表1)。

    2.3.2 響應(yīng)面模型的建立及分析 運(yùn)用Design-Expert進(jìn)行三因素三水平的響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì),共17個(gè)試驗(yàn)點(diǎn),其中12個(gè)為分析因子,5個(gè)為中心試驗(yàn)用以估計(jì)誤差。試驗(yàn)結(jié)果見表2。

    根據(jù)得到的試驗(yàn)數(shù)據(jù),運(yùn)用Design-Expert對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行多遠(yuǎn)回歸擬合,得到浮萍多糖提取率對試驗(yàn)自變量的二次多項(xiàng)回歸方程:多糖提取率Y=-0.019A2-0.0065B2+0.0025C2-0.0008AB-0.0013AC+0.016BC+0.060A-0.036B+0.055C+1.01。

    表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平表Tab 1 The response surface experiment factors and levels

    表2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果表Tab 2 Design and Results of the response surface experiment result

    方程中各項(xiàng)系數(shù)絕對值的大小直接反映各因素對響應(yīng)值的影響程度,系數(shù)的正、負(fù)反映了影響的方向[17]。由方程的一次項(xiàng)系數(shù)可以得出,影響浮萍多糖提取率的因素的主次順序?yàn)椋毫弦罕?、超聲功率、超聲時(shí)間,響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果方差分析見表3。

    表3 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果方差分析表Tab 3 ANOVA results of the response surface experiment

    2.3.3 響應(yīng)曲面分析 利用Design Expert 軟件對表2數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合,所得到的響應(yīng)面及其等高線圖見圖7-圖9。通過等高線的形狀可以判斷因素之間交互效應(yīng)的強(qiáng)弱,圓形標(biāo)識兩因素交互作用可以忽略,而橢圓形表示兩因素交互作用顯著[18]。根據(jù)浮萍多糖提取過程中各因素的兩兩交互作用確定各因素的最佳水平范圍。

    由圖7等高線圖可知水料比和超聲時(shí)間的交互作用對浮萍多糖提取率的影響不顯著。曲面圖中顯示,在所選的實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)存在多糖提取率的極值;水料比對于浮萍多糖提取率的影響較超聲時(shí)間顯著。

    圖7 水料比和超聲時(shí)間的相互作用及等高線分析圖Fig 7 The ratio of water and ultrasonic time interaction and contour analysis chart

    圖8 水料比和超聲功率的相互作用及等高線分析圖Fig 8 The ratio of water and the interaction of ultrasonic power and contour analysis chart

    圖9 超聲時(shí)間和超聲功率的相互作用及等高線分析圖Fig 9 Interaction of ultrasonic time and ultrasonic power and contour maps

    由圖8等高線圖和曲面圖可知,水料比和超聲功率的交互作用對浮萍多糖提取率影響較為顯著,水料比對于浮萍多糖提取率的影響較超聲功率顯著。

    由圖9等高線圖和曲面圖可知,超聲時(shí)間和超聲功率的交互作用對浮萍多糖提取率的影響顯著;超聲功率對于浮萍多糖提取率的影響較超聲時(shí)間顯著。

    綜上可知,對浮萍多糖提取率的影響程度從大到小依次為料液比、超聲功率和超聲時(shí)間。通過響應(yīng)面優(yōu)化分析,得到浮萍多糖最大提取率為1.188%,提取浮萍多糖的最佳工藝條件為料液比1∶40.06、超聲時(shí)間79.58 min、超聲功率341.37 W。

    2.3.4 響應(yīng)面試驗(yàn)?zāi)P万?yàn)證 在上述優(yōu)化的提取條件下,浮萍多糖提取率的理論值可達(dá)到1.188%。為了檢驗(yàn)此最佳工藝條件的可靠性,考慮到實(shí)際操作的便利,將最佳工藝條件改為:料液比1∶40、超聲時(shí)間80 min、超聲功率340 W,做3組平行試驗(yàn),進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果如表4所示,得到的多糖提取率的平均值為1.125%,與模型理論預(yù)測值僅相差0.063%,因此,采用響應(yīng)面分析優(yōu)化得到的提取條件參數(shù)準(zhǔn)確可靠,可用于實(shí)際操作。

    表4 多糖提取驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果Tab 4 Polysaccharide extraction and verification

    2.4 多糖含量測定結(jié)果 根據(jù)響應(yīng)面試驗(yàn)中得到的最佳提取條件,采用苯酚-硫酸法測定樣品(粗多糖粉末)中的多糖含量,結(jié)果見表5。

    表5 多糖含量測定結(jié)果Tab 5 Polysaccharide content determination results

    超聲波法提取浮萍多糖測得的樣品純度為18.03%,國內(nèi)堆熱法提取浮萍多糖測得的樣品純度為15%~30%。相比可發(fā)現(xiàn),提取的多糖的純度仍需要提高。

    3 討 論

    浮萍其營養(yǎng)價(jià)值很高,而蛋白、脂肪含量均超過其他水草[19]。本研究運(yùn)用超聲波輔助提取浮萍多糖,運(yùn)用了超聲波的空化效應(yīng),大大地增加了溶劑的穿透力,加深需提取成分的在溶液中的釋放擴(kuò)散,提高了物質(zhì)的提取速度和工作效率。

    通過響應(yīng)面設(shè)計(jì),優(yōu)化浮萍多糖的提取工藝,試驗(yàn)值與模型理論預(yù)測值僅相差0.063%。因此采用響應(yīng)面分析優(yōu)化得到的提取條件參數(shù)準(zhǔn)確可靠,可用于實(shí)際操作。葛星星等曾用該方法對豆薯多糖進(jìn)行工藝優(yōu)化[20], 徐仰麗等也用該方法對蝦殼進(jìn)行脫鹽處理[21],都獲得了較高的提取率和純度,說明該方法切實(shí)可行。所以在浮萍多糖提取方面需要繼續(xù)優(yōu)化工藝,這也是該實(shí)驗(yàn)正在進(jìn)行的后續(xù)探索。

    超聲波法提取浮萍多糖測得的樣品純度與國內(nèi)堆熱法[5]和超濾法提取浮萍多糖[6]測得的樣品純度相比可發(fā)現(xiàn),在多糖提取率和多糖純度方面仍需要提高,但本實(shí)驗(yàn)降低了設(shè)備需求,技術(shù)流程相對簡單,更適合工業(yè)應(yīng)用。另外,在葛星星、徐仰麗等進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)中,他們在單因素實(shí)驗(yàn)選取數(shù)據(jù)進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化時(shí)選擇的數(shù)據(jù)段與該實(shí)驗(yàn)不同,可能這是導(dǎo)致該實(shí)驗(yàn)純度相對較低的原因。后續(xù)工作將在不破壞多糖活性的前提下,改進(jìn)試驗(yàn)過程,提高樣品提取率和純度。

    猜你喜歡
    浮萍純度超聲波
    退火工藝對WTi10靶材組織及純度的影響
    滄海浮萍
    海峽姐妹(2018年9期)2018-10-17 01:42:52
    基于Niosll高精度超聲波流量計(jì)的研究
    電子制作(2018年17期)2018-09-28 01:56:38
    色彩的純度
    童話世界(2017年29期)2017-12-16 07:59:32
    《紅浮萍》中的女性訴求與空間哲學(xué)
    離開你,我是一片浮萍
    蝙蝠的超聲波
    超聲波流量計(jì)的研究
    電子制作(2016年21期)2016-05-17 03:52:47
    間接滴定法測定氯化銅晶體的純度
    超聲波流量計(jì)在蘭干渠上的應(yīng)用
    欧美性猛交╳xxx乱大交人| 麻豆国产97在线/欧美 | 国产一区二区在线观看日韩 | 欧美中文日本在线观看视频| 99精品久久久久人妻精品| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲国产精品成人综合色| 国产精品爽爽va在线观看网站| 久久亚洲真实| 欧美色欧美亚洲另类二区| 在线播放国产精品三级| 日韩精品中文字幕看吧| www.自偷自拍.com| 国产在线观看jvid| 99国产综合亚洲精品| 一边摸一边抽搐一进一小说| 夜夜夜夜夜久久久久| 黄色丝袜av网址大全| 一区二区三区国产精品乱码| 国语自产精品视频在线第100页| 成人av一区二区三区在线看| avwww免费| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久久久久久精品吃奶| 女人被狂操c到高潮| 怎么达到女性高潮| 99国产精品99久久久久| 国模一区二区三区四区视频 | 曰老女人黄片| 国产熟女xx| www国产在线视频色| 在线看三级毛片| 亚洲五月天丁香| 欧美黑人欧美精品刺激| 18禁国产床啪视频网站| 国产精品一及| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 午夜两性在线视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲av五月六月丁香网| 窝窝影院91人妻| 看黄色毛片网站| 日日夜夜操网爽| 韩国av一区二区三区四区| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲成人久久性| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 久久久久国内视频| 日本三级黄在线观看| 欧美日本视频| 亚洲全国av大片| 精品国产美女av久久久久小说| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲五月天丁香| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 色尼玛亚洲综合影院| 高清毛片免费观看视频网站| 亚洲熟妇熟女久久| 熟女电影av网| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 9191精品国产免费久久| 人人妻人人看人人澡| 一边摸一边抽搐一进一小说| 一级片免费观看大全| 久久久国产精品麻豆| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产一区二区激情短视频| 日韩欧美免费精品| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 欧美成人午夜精品| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产精品久久久久久精品电影| 国产亚洲欧美在线一区二区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 高清在线国产一区| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 全区人妻精品视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产精品,欧美在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 操出白浆在线播放| 国产久久久一区二区三区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 成年版毛片免费区| 激情在线观看视频在线高清| 欧美性长视频在线观看| 午夜两性在线视频| 国产精品av视频在线免费观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 俺也久久电影网| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产亚洲av高清不卡| 手机成人av网站| 国产精品影院久久| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产免费av片在线观看野外av| 久久久精品欧美日韩精品| 又大又爽又粗| 免费在线观看黄色视频的| 日本一区二区免费在线视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 99精品久久久久人妻精品| bbb黄色大片| 成熟少妇高潮喷水视频| 男男h啪啪无遮挡| 999久久久精品免费观看国产| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 18美女黄网站色大片免费观看| 午夜成年电影在线免费观看| 老司机靠b影院| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲熟女毛片儿| 哪里可以看免费的av片| 最新在线观看一区二区三区| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 一边摸一边做爽爽视频免费| 天天添夜夜摸| 久久伊人香网站| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲国产精品999在线| 草草在线视频免费看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲,欧美精品.| 午夜亚洲福利在线播放| 午夜老司机福利片| 特大巨黑吊av在线直播| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 中文在线观看免费www的网站 | 国产精品一区二区三区四区久久| 色播亚洲综合网| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲av成人精品一区久久| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 少妇熟女aⅴ在线视频| 欧美激情久久久久久爽电影| 久久婷婷成人综合色麻豆| 午夜福利欧美成人| 99re在线观看精品视频| 岛国视频午夜一区免费看| 国产高清视频在线观看网站| 禁无遮挡网站| 搞女人的毛片| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产成人aa在线观看| 搞女人的毛片| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产97色在线日韩免费| 又紧又爽又黄一区二区| 国产三级黄色录像| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品一区二区精品视频观看| 久久亚洲精品不卡| 亚洲无线在线观看| 毛片女人毛片| 观看免费一级毛片| 香蕉久久夜色| 国产不卡一卡二| 久久性视频一级片| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 久久99热这里只有精品18| 99在线视频只有这里精品首页| 色综合婷婷激情| av在线播放免费不卡| 给我免费播放毛片高清在线观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 一a级毛片在线观看| 国模一区二区三区四区视频 | 黄色丝袜av网址大全| 曰老女人黄片| 天堂√8在线中文| 欧美丝袜亚洲另类 | 日韩免费av在线播放| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美久久黑人一区二区| 男人舔女人下体高潮全视频| 91av网站免费观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲在线自拍视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲人成网站高清观看| 日本熟妇午夜| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产成人精品无人区| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲在线自拍视频| 久久婷婷成人综合色麻豆| АⅤ资源中文在线天堂| 国产成人影院久久av| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 2021天堂中文幕一二区在线观| 欧美性猛交黑人性爽| 国产成人欧美在线观看| 色综合婷婷激情| 亚洲全国av大片| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产精华一区二区三区| 国产人伦9x9x在线观看| 精品国产亚洲在线| 亚洲精品美女久久av网站| 日本 欧美在线| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 757午夜福利合集在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 国产午夜精品久久久久久| 黄片大片在线免费观看| 黄色丝袜av网址大全| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲片人在线观看| 国模一区二区三区四区视频 | 国产人伦9x9x在线观看| 国产精品综合久久久久久久免费| 舔av片在线| svipshipincom国产片| 亚洲电影在线观看av| 久久天堂一区二区三区四区| 黄色片一级片一级黄色片| 国产黄片美女视频| 制服丝袜大香蕉在线| 国产高清videossex| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产高清有码在线观看视频 | 黄色 视频免费看| 亚洲av电影在线进入| 欧美3d第一页| 久久久久久久久中文| 国产爱豆传媒在线观看 | 亚洲 欧美一区二区三区| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| xxxwww97欧美| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产野战对白在线观看| 一个人免费在线观看的高清视频| 三级毛片av免费| 韩国av一区二区三区四区| 国产成人系列免费观看| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 色噜噜av男人的天堂激情| 一级作爱视频免费观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产成人精品久久二区二区91| 一级毛片高清免费大全| 国产免费av片在线观看野外av| 国内精品久久久久久久电影| 成人av一区二区三区在线看| 久久九九热精品免费| 少妇熟女aⅴ在线视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 久久伊人香网站| 久久久国产欧美日韩av| 国产成人av教育| 午夜激情av网站| 国产91精品成人一区二区三区| tocl精华| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 两人在一起打扑克的视频| 一级黄色大片毛片| 两个人视频免费观看高清| 看片在线看免费视频| 国产免费av片在线观看野外av| 久久久久性生活片| 麻豆久久精品国产亚洲av| 岛国在线免费视频观看| 欧美高清成人免费视频www| 黄片小视频在线播放| 精品欧美一区二区三区在线| 欧美又色又爽又黄视频| 国产麻豆成人av免费视频| 久久精品91蜜桃| 亚洲av熟女| 中文字幕高清在线视频| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 亚洲激情在线av| 成熟少妇高潮喷水视频| 成人三级黄色视频| 国产单亲对白刺激| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 欧美丝袜亚洲另类 | 丰满人妻一区二区三区视频av | 国语自产精品视频在线第100页| 一级a爱片免费观看的视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 成人三级黄色视频| 久久亚洲真实| 高潮久久久久久久久久久不卡| 婷婷精品国产亚洲av在线| 最近最新中文字幕大全免费视频| 日本三级黄在线观看| 18禁观看日本| 露出奶头的视频| 99热这里只有是精品50| 99精品欧美一区二区三区四区| √禁漫天堂资源中文www| 美女大奶头视频| 亚洲欧美激情综合另类| 亚洲真实伦在线观看| 女警被强在线播放| 国产爱豆传媒在线观看 | 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产真实乱freesex| 亚洲精品在线美女| 十八禁人妻一区二区| 国产熟女xx| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产精品爽爽va在线观看网站| 久久久久性生活片| 一边摸一边做爽爽视频免费| 99在线人妻在线中文字幕| xxxwww97欧美| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 成人三级做爰电影| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 欧美性猛交黑人性爽| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 看片在线看免费视频| 亚洲精品色激情综合| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲男人天堂网一区| 少妇的丰满在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 成人av一区二区三区在线看| 久久九九热精品免费| 成人特级黄色片久久久久久久| www.www免费av| 欧美精品亚洲一区二区| 一边摸一边抽搐一进一小说| 一边摸一边做爽爽视频免费| 禁无遮挡网站| 免费在线观看影片大全网站| 最近在线观看免费完整版| 妹子高潮喷水视频| 久久香蕉激情| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 美女 人体艺术 gogo| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 精品午夜福利视频在线观看一区| 一区二区三区激情视频| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲成人久久爱视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 精品日产1卡2卡| 亚洲成人久久性| 欧美zozozo另类| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产爱豆传媒在线观看 | 男男h啪啪无遮挡| 亚洲自拍偷在线| 俺也久久电影网| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 深夜精品福利| 中出人妻视频一区二区| 午夜福利高清视频| 香蕉国产在线看| 动漫黄色视频在线观看| 国产真实乱freesex| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产成人aa在线观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 无人区码免费观看不卡| 午夜福利在线在线| 最新在线观看一区二区三区| 国产一区二区在线观看日韩 | 成人午夜高清在线视频| 久热爱精品视频在线9| 麻豆av在线久日| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲精华国产精华精| 亚洲专区国产一区二区| 香蕉国产在线看| 少妇粗大呻吟视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 久久久久亚洲av毛片大全| aaaaa片日本免费| 久久欧美精品欧美久久欧美| 免费在线观看亚洲国产| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 日韩欧美在线二视频| 草草在线视频免费看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 精品国产美女av久久久久小说| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲成人国产一区在线观看| 99热这里只有是精品50| 欧美一区二区国产精品久久精品 | 久久久久久久久久黄片| 欧美最黄视频在线播放免费| 天天添夜夜摸| 成人高潮视频无遮挡免费网站| av视频在线观看入口| av免费在线观看网站| a在线观看视频网站| 又紧又爽又黄一区二区| 久久香蕉激情| 国产野战对白在线观看| 精品久久久久久成人av| 久久久久久久久久黄片| 精品高清国产在线一区| 亚洲七黄色美女视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 午夜免费激情av| 少妇粗大呻吟视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 一a级毛片在线观看| 精品久久久久久久久久久久久| 99热只有精品国产| 亚洲中文日韩欧美视频| 两个人视频免费观看高清| av免费在线观看网站| 91国产中文字幕| 国产爱豆传媒在线观看 | 久久天堂一区二区三区四区| 日日夜夜操网爽| 黄色视频,在线免费观看| 国产精品野战在线观看| 色综合站精品国产| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲精华国产精华精| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲国产精品999在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 免费高清视频大片| 一本综合久久免费| 久久精品成人免费网站| 欧美一区二区精品小视频在线| 免费在线观看成人毛片| 国内揄拍国产精品人妻在线| 99热这里只有是精品50| 成在线人永久免费视频| 国产黄片美女视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久国产乱子伦精品免费另类| 老司机福利观看| 国产精品久久久久久精品电影| 中文字幕久久专区| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 神马国产精品三级电影在线观看 | 男插女下体视频免费在线播放| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲片人在线观看| 在线播放国产精品三级| 五月伊人婷婷丁香| 国产日本99.免费观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 在线观看日韩欧美| 999精品在线视频| 成人av在线播放网站| 久久久久久九九精品二区国产 | 大型黄色视频在线免费观看| 一本一本综合久久| 老汉色∧v一级毛片| 国产成人aa在线观看| 国产爱豆传媒在线观看 | 国产在线观看jvid| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产又色又爽无遮挡免费看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 一区福利在线观看| 国产激情久久老熟女| 草草在线视频免费看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产精品久久久久久精品电影| 国产片内射在线| 久久亚洲精品不卡| 日韩欧美在线二视频| 美女大奶头视频| 免费看日本二区| 村上凉子中文字幕在线| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲国产精品合色在线| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 真人一进一出gif抽搐免费| www日本在线高清视频| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 黄色视频不卡| 免费一级毛片在线播放高清视频| 长腿黑丝高跟| 免费观看精品视频网站| 日韩三级视频一区二区三区| 99精品在免费线老司机午夜| 床上黄色一级片| 成人精品一区二区免费| 国产精品日韩av在线免费观看| 一级毛片高清免费大全| 久久久久久大精品| 91在线观看av| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产伦在线观看视频一区| 黄色视频,在线免费观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 久久这里只有精品19| 男女下面进入的视频免费午夜| 精品国内亚洲2022精品成人| 成人午夜高清在线视频| 免费在线观看影片大全网站| 人妻久久中文字幕网| 一二三四社区在线视频社区8| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久精品大字幕| 欧美日韩乱码在线| 身体一侧抽搐| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲熟妇熟女久久| 免费无遮挡裸体视频| 久久久国产成人免费| 啦啦啦免费观看视频1| 免费在线观看日本一区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 麻豆久久精品国产亚洲av| 欧美一级毛片孕妇| 国产午夜精品久久久久久| 成年版毛片免费区| 午夜精品久久久久久毛片777| 好男人电影高清在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 国产免费av片在线观看野外av| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲国产欧美一区二区综合| 久久欧美精品欧美久久欧美| 中文字幕最新亚洲高清| 香蕉丝袜av| 成年版毛片免费区| 黄片大片在线免费观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 99国产精品99久久久久| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| av片东京热男人的天堂| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 久99久视频精品免费| 日本 av在线| 久久 成人 亚洲| 久久精品91无色码中文字幕| 最好的美女福利视频网| 最新美女视频免费是黄的| 日本免费a在线| 色哟哟哟哟哟哟| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 一级黄色大片毛片| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲18禁久久av| 亚洲一区中文字幕在线| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 免费电影在线观看免费观看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 最近在线观看免费完整版| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲av成人一区二区三| 丝袜人妻中文字幕| 国产在线观看jvid| 真人做人爱边吃奶动态| 高清毛片免费观看视频网站| 丁香欧美五月| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久久国产欧美日韩av| 国产激情欧美一区二区| 国产精品 国内视频| av中文乱码字幕在线| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久亚洲真实| 亚洲美女黄片视频| 日日爽夜夜爽网站| a级毛片在线看网站| 色在线成人网| 国产av麻豆久久久久久久| 久久久久国内视频| 精华霜和精华液先用哪个| 一级毛片高清免费大全| 禁无遮挡网站| 一区福利在线观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产熟女午夜一区二区三区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 欧美乱色亚洲激情| 国产成人aa在线观看| 精品乱码久久久久久99久播| 国产精品国产高清国产av| 操出白浆在线播放| 精品乱码久久久久久99久播| 日韩精品中文字幕看吧| 欧美色欧美亚洲另类二区|