血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平檢測(cè)在診斷子宮腺肌病中的應(yīng)用

陳新元,黃 勝，王同利

(浙江省溫州市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 325000)

子宮腺肌病是由子宮內(nèi)膜腺體、間質(zhì)等侵入子宮肌層導(dǎo)致的，是30～50歲經(jīng)產(chǎn)婦的常見(jiàn)疾病類(lèi)型，雖然子宮腺肌病不會(huì)導(dǎo)致患者死亡，但患病過(guò)程中會(huì)有不同程度的痛經(jīng)，嚴(yán)重影響患者生理及心理健康[1]。臨床上子宮腺肌病的診斷主要依賴(lài)于超聲、CT等影像學(xué)檢測(cè)手段，但上述方法均存在一定的局限性，且子宮腺肌病常被誤診為子宮肌瘤，仍需要手術(shù)后病理檢測(cè)確診。因此，尋求早期、靈敏、高效的血清標(biāo)記物應(yīng)用于臨床檢測(cè)，對(duì)于子宮腺肌患者有十分重大的意義[2]。近幾年，隨著血清miRNA的研究發(fā)展，發(fā)現(xiàn)血清miRNA可用于分子診斷[3]，本研究旨在評(píng)估血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平檢測(cè)在子宮腺肌病中的診斷效能，并分析血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平與痛經(jīng)程度的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2017年2月至2018年2月本院收治的子宮腺肌病患者216例納入觀(guān)察組，同時(shí)招募同時(shí)間于本院體檢的60名健康者作對(duì)照組。觀(guān)察組年齡35～49歲，平均(43.62±9.41)歲；體質(zhì)量指數(shù)(21.56±2.37)kg/m2；孕次(1.69±0.52)次；月經(jīng)周期(30.54±3.62)d。對(duì)照組年齡34～50歲，平均(42.74±10.21)歲，體質(zhì)量指數(shù)(22.17±2.69)kg/m2；孕次(2.15±0.68)次；月經(jīng)周期(29.75±4.16)d。兩組受試者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：子宮肌腺患者術(shù)后經(jīng)病理檢測(cè)確診；年齡大于或等于30歲；依從性好；簽署知情同意書(shū)；對(duì)照組受試者身體健康，實(shí)驗(yàn)室檢查各項(xiàng)指標(biāo)均正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：心、肝、腎等器質(zhì)性病變；嚴(yán)重感染；合并糖尿病、甲狀腺功能亢進(jìn)等內(nèi)分泌疾??；先天性免疫疾?。谎合到y(tǒng)疾病；就診前接受抗感染治療、激素治療；精神障礙。

1.3 試劑與儀器 Trizol試劑購(gòu)買(mǎi)于日本Takara公司，逆轉(zhuǎn)率試劑盒、熒光染料SYBR Green Mix、熒光定量PCR試劑盒購(gòu)買(mǎi)于美國(guó)Sigma公司，PCR引物由蘇州金唯智生物科技有限公司提供，熒光定量PCR儀購(gòu)買(mǎi)于美國(guó)BioRad公司。

1.4 qRT-PCR檢測(cè)血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平 于清晨空腹抽血5 mL，收集上層血清，采用Trizol試劑盒提取血清中總RNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)率為cDNA模板，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀擴(kuò)增血清中hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p。程序設(shè)置條件為：95 ℃預(yù)變性90 s，95 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸20 s，共40個(gè)循環(huán)。采用2-△△CT法進(jìn)行半定量分析，以GADPH為內(nèi)參，計(jì)算hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p的表達(dá)，其引物序列[4-5]見(jiàn)表1。上述檢驗(yàn)均由金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心檢測(cè)完成。

表1 引物序列表

1.5 方法 比較兩組受試者血清中hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p的表達(dá)，分析hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p表達(dá)與子宮腺肌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系，并觀(guān)察hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p診斷子宮腺肌病的診斷效能。

1.6 痛經(jīng)評(píng)分 參照子宮肌瘤癥狀及健康相關(guān)生活質(zhì)量問(wèn)卷(UFS-QOL)[6]，對(duì)子宮腺肌患者痛經(jīng)現(xiàn)象進(jìn)行疼痛程度評(píng)分，分值1～5分，完全不痛計(jì)為1分，偶爾痛計(jì)為2分，比較痛、偶爾口服藥物計(jì)為3分，非常痛、經(jīng)常口服藥物計(jì)為4分，極度痛計(jì)為5分。

2 結(jié) 果

2.1 兩組血清中hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p表達(dá)的比較 與對(duì)照組比較，子宮肌腺患者血清中hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p的表達(dá)均顯著增高(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 兩組血清中hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p表達(dá)的比較

2.2 血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平診斷子宮腺肌的臨床價(jià)值 ROC曲線(xiàn)如圖1所示，血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平可有效區(qū)分子宮腺肌患者和健康者，當(dāng)血清hsa-miR-22-3p/U6≥1.17時(shí)，診斷子宮腺肌的靈敏度為93.3%，特異度為64.8%(P<0.05)；當(dāng)血清hsa-miR-103a-3p/U6≥2.46時(shí)，診斷子宮腺肌的靈敏度為93.3%，特異度為77.8%(P<0.05)。見(jiàn)表3。

圖1 血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平對(duì)子宮腺肌診斷的ROC曲線(xiàn)分析

指標(biāo)AUC靈敏度特異度95%CIhsa-miR-22-3p0.86693.3%64.8%0.820～0.911hsa-miR-103a-3p0.92093.3%77.8%0.886～0.954

2.3 血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平與痛經(jīng)程度的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析顯示，血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平分別與子宮腺肌患者痛經(jīng)程度呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為r=0.57、0.64，P=0.032、0.014。

3 討 論

子宮腺肌病病理變化表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜腺體、間質(zhì)的移位，且伴隨著周?chē)?xì)胞的增殖[7]。子宮腺肌病多發(fā)于產(chǎn)后、人工流產(chǎn)后，具體發(fā)病機(jī)制尚不明確；臨床表現(xiàn)繼發(fā)性痛經(jīng)，月經(jīng)過(guò)多，慢性盆腔痛等，多采用保守性治療，但其復(fù)發(fā)率極高，手術(shù)切除子宮仍是最有效的根治手段，但對(duì)于仍有生育需求的女性來(lái)說(shuō)是不能接受的[8]。但子宮腺肌病早期并無(wú)明顯的病癥，確診時(shí)病情已經(jīng)開(kāi)始進(jìn)展，因此早期診斷子宮腺肌意義重大[9]。目前主要應(yīng)用影像學(xué)檢測(cè)診斷子宮腺肌病，但仍有一定的漏診、誤診概率[10]。因此，開(kāi)發(fā)檢測(cè)靈敏度、特異度高的子宮腺肌標(biāo)志物，輔助其他診斷方法提高子宮腺肌病的確診率成為研究熱點(diǎn)。

mi RNAs是一類(lèi)內(nèi)源基因編碼的小分子非編碼單鏈RNA分子，大多數(shù)以單拷貝、多拷貝或基因簇的形式存在于基因組中，參與調(diào)節(jié)體內(nèi)多種基因[11]。mi RNAs廣泛存在于人體血清及組織中，其序列具有高度的保守性，據(jù)報(bào)道，mi RNAs介導(dǎo)多種分子途徑參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，且不同的腫瘤類(lèi)型其表達(dá)譜不同[12-13]，故mi RNAs的不同表達(dá)可能對(duì)疾病的病理表征有一定的區(qū)分作用，此外，血清mi RNAs適用于常規(guī)檢測(cè)，有成為血清標(biāo)志物的潛能。研究發(fā)現(xiàn)，mi RNA可能參與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展，子宮內(nèi)膜異位癥是指子宮內(nèi)膜組織種植與子宮內(nèi)膜以外的位置[14]。盡管子宮腺肌病和子宮內(nèi)膜異位癥是兩種不同的婦科疾病，但二者在主要癥狀和病理機(jī)制等方面有相似之處，但mi RNAs 與子宮腺肌病的相關(guān)研究鮮少報(bào)道，故本研究擬探究血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平檢測(cè)在診斷子宮腺肌病中的應(yīng)用。

研究表明，血清中檢測(cè)到的mi RNA有兩種來(lái)源：一種是直接由細(xì)胞分泌的，另一種是機(jī)體選擇性包裹mi RNA在外泌體、微小體等膜性結(jié)構(gòu)中，運(yùn)輸至胞外后進(jìn)入血液循環(huán)，提示細(xì)胞生長(zhǎng)的不同階段會(huì)分泌不同的mi RNA，可能產(chǎn)生不同的功能和作用[15]。血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平應(yīng)用于子宮腺肌病診斷研究較少，但在其他疾病中研究較多。孫月玲等[16]研究顯示外周血miR-22-3p在重癥急性胰腺炎患者中呈高表達(dá)，其診斷重癥急性胰腺炎的AUC為0.729，靈敏度為57.41%，特異度為83.70%，且與重癥急性胰腺炎的CT分級(jí)、胸水情況等病理參數(shù)有關(guān)。張亞珍等[17]研究顯示miR-103a-3p在乳腺癌組織和血清中呈低表達(dá)，可能通過(guò)調(diào)控PDK4下調(diào)機(jī)體糖酵解過(guò)程，從而抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖。

本研究通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)子宮腺肌患者與健康者血清中hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平，發(fā)現(xiàn)子宮腺肌患者血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平顯著高于健康者，表明hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p可能參與調(diào)控子宮腺肌病的發(fā)生、發(fā)展。ROC曲線(xiàn)顯示，hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p對(duì)子宮腺肌病診斷的AUC分別為0.866、0.920，表明通過(guò)檢測(cè)血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平可以有效區(qū)分子宮腺肌患者和健康者，能較準(zhǔn)確的診斷，且hsa-miR-103a-3p的診斷價(jià)值更高，與徐愛(ài)云等[18]報(bào)道一致。80%的子宮腺肌患者均存在痛經(jīng)的癥狀，本研究通過(guò)Pearson相關(guān)分析顯示，血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平分別與子宮腺肌患者痛經(jīng)程度呈正相關(guān)，表明血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平還可一定程度上預(yù)測(cè)子宮腺肌病的嚴(yán)重程度。然而hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p參與子宮腺肌病的發(fā)生、發(fā)展的具體分子機(jī)制還有待研究。

綜上所述，血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p在子宮腺肌患者血清中高表達(dá)，且對(duì)子宮腺肌病有較高的診斷價(jià)值，且與子宮腺肌患者痛經(jīng)程度呈正相關(guān)，可作為子宮腺肌病潛在的血清標(biāo)志物，應(yīng)用于子宮腺肌病的早期診斷。后期還需要擴(kuò)大樣本量作進(jìn)一步驗(yàn)證，此外，還可繼續(xù)探討hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p參與子宮腺肌病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程的分子途徑，使得研究結(jié)果更加完善。